V. — TRAITEMENT DE L'EXTRAIT ALCOOLIQUE PAR L'ALCOOL ABSOLU BOUILLANT

L'extrait alcoolique dans lequel nous venons de caractériser des acides amidés est traité par de petites quantités d'alcool absolu bouillant, à plusieurs reprises. L'alcool saturé prend une belle teinte rouge trés foncé ; on filtre rapidement la liqueur à travers un appareilà filtrations chaudes. On épuise ainsi par l'alcool absolu bouillant jusqu'à ce que la liqueur filtrée n'ait plus qu'une très legere teinte jaune paille. Une assez grande partie de l'extrait alcoolique n'entre pas en solution; il se rassemble sous forme d'une masse blanc-jaunätre.

A. — Partie soluble dans l'alcool absolu bouillant. — La solution rouge est concentree, dans le vide, à une température maxima de 30° C.

Recherche du phosphore. — Elle est positive.

Recherche du pouvoir hémolytique :

Tube № 1 : témoin : XX gouttes de purée globulaire de Cheval lavée + V gouttes d'eau physiologique.

Tube N° 2°; XX gouttes de la purée globulaire précédente + 5 gouttes de solution d'extrait dans l'eau physiologique.

li y a hémolyse totale au bout d'une demi-heure, à l'étuve, à 37° C.

L'extrait est délayé dans de l'eau distillée. L'émulsion rougeätre est brassée, dans une ampoule à décantation, avec du chloroforme. Après un repos suffisant, on décante la couche inférieure chloroformique, legerement jaunátre. La liqueur aqueuse est traitée une nouvelle fois par du chloroforme. Les solutions chloroformiques réunies sont évaporées à l'air libre; on obtient ainsi un résidu

jaune foncé, d'aspect butyreux. Ce résidu est soluble dans l'éther, l'acétone; il noircit, exposé aux vapeurs d'acide osmique. On y recherche les graisses de la facon suivante :

Ce résidu est émulsionné dans de l'eau distillée; on chaufie et on ajoute un peu de lessive de soude, en ayant soin d'agiter constamment le mélange. La substance disparait et le liquide chaud répand une odeur savonneuse. A la solution, on ajoute une solution étendue de chlorure de baryum, par petites portions. П se fait un précipité blanc. Mais la lessive de soude renferme toujours un peu de carbonate de soude, et il s'est produit une quantité correspondante de carbonate de baryte insoluble. Le liquide est filtre et le précipité blanc jeté sur le filtre. Le filtre est desseche avec son contenu dans le vide sulfurique, puis introduit dans un ballon avec un certain volume d'éther à 65o;— on agite de facon à bien répandre le précipité dans l'éther et on ajoute quelques gouttes d'acide sulfurique. П se fait un précipité de sulfate de baryte insoluble. La solution éthérée est évaporée dans une capsule de porcelaine, à l'air libre ; il reste une substance jaune, oléagineuse, d'odeur butyrique. Nous y avons constaté la présence d'acide butyrique en chauffant un peu de résidu avec de l'alcool absolu et SO“ Н? concentré ; il s'est dégagé une odeur agréable, très caractéristique, de butyrate d'ethyle (essence d'ananas).

Donc, malgré tous les soins apportés à l'épuisement initial de la pulpe de Vers par l'éther, une petite partie de graisses à échappé au traitement.

La couche aqueuse, supérieure, séparée du liquide chloroformique, est évaporée, au bain-marie, en consistance sirupeuse. Le liquide épais, rouge-foncé, qui en résulte est épuisé par de l'éther rectifié. Les solutions éthérées abandonnent par évaporation dans une capsule de porcelaine une substance huileuse, jaune citron. Placée dans le vide sulfurique, cette huile se conerete, au bout de trois à quatre jours, en une masse cristalline hygroscopique.

Au microscope, les cristaux se présentent sous la forme de prismes rectangulaires allonges.

Recherche de l Azote dans les cristaux. — Positive.

Une portion dela masse cristallisée a été dissoute dans un peu d'eau distillée et la solution a été répartie dans des verres de montre placés sur un papier noir. Les réactifs suivants des alca-

101465 ont donné des précipités: Réactifs de BOUCHARDAT, de TANRET, de DRAGENDORFF,, de Brucker, l'acide picrique, Је tanin, l'iodure double de potassium et de mercure, l'acide silicotungstique, le chlorure d'or. A froid, le chlorure d'or est réduit.

La substance cristallisée appartient donc au groupe des alcaloïdes.

Recherche du pouvoir hémolytique de l'alcaloide. — Un centigramme est dissous dans 3 grammes d'eau physiologique. V gouttes de cette solution produisent l'hémolyse totale d'une purée globulaire de sang de Cheval (XX gouttes) au bout de 8 à 10 minutes (la dose agissante d'alcaloide est, dans cette expérience, inférieure à 1 milligramme).

Hendement. — 0 gr.52 centigrammes d'alcaloide pour 800 grammes de pulpe de Vers.

Cet énorme pouvoir hémolytique nous faitenvisager cet alcaloide comme une des espéces chimiques les plus importantes du Ver, au point de vue hémolytique. Cette si grande disproportion entre l'effet produit et la quantité de substance qui entre en jeu rappelle l'action typique des toxines et des venins. On sait, par exemple, que 1 gramme de venin de Naja tripudians tue 4.000 kilogr. de Lapin.

Or, KvEs et Sacus ont nettement établi que la cholestérine empêche l'hémolyse des globules rouges dans un mélange d'hématies lavées + venin de Cobra. П était naturel de se demander si ce corps n'aurait pas une action analogue sur l'alealoide du Sclérostome. A cet effet, la solution alcaloidique a été triturée dans un petit mortier de verre avec quelques cristaux de cholestérine риге; l'émulsion ainsi obtenue a été placée à Гешуе à 37° pendant 3/4 d'heure (ce contact préalable de la cholestérine et de la solution active nous a été recommandé par M. Н. Iscovesco).

Tube N° 1 : témoin : XX gouttes de purée globulaire lavée et diluée + V gouttes de solution alcaloidique. `

Tube N° 2: XX gouttes de purée globulaire précédente + V gouttes de solution alcaloidique renfermant de la cholestérine.

Les deux tubes sont placés à l'étuve à 37° C.

Résultats. — Dans le tube n° 1, l'hémolyse est totale au bout d'un

quart d'heure.

Dans le tube по 2, l'hémolyse a lieu au bout de deux heures.

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Donc, la cholestérine n'a pas d'action empéchante sur l'hémolyse par Lalcaloide.

Recherches sur la portion aqueuse privée de l'alcaloide. — L'extrait sirupeux précédent, rouge foncé, d'odeur de viande rótie, auquel on vient d'enlever l'alcaloide par l'épuisement éthéré, est soumis aux essais suivants :

Recherche du pouvoir hemolytigue. — V gouttes de solution hémolysent complètement XX gouttes de purée globulaire de sang de Cheval lavée et diluée, au bout de deux heures.

1° Une partie del'extrait est dissoute dans l'eau distillée ; la solution est traitée par les reactifs suivants :

Bichlorure de mercure : précipité abondant.

Todure double de potassium et de mercure + acide acétique : précipité.

Acide picrique : précipité.

Acide phosphotungstique : precipite.

Acide silicotungstique : précipité,

Acide phosphomolybdique : précipité.

Réactif de Bouchardat : précipité brun-marron.

Action sur la liqueur de Fehling : 1а solution extractive réduit la liqueur de FEHLING sans précipitation d'oxyde de cuivre ; à la longue, il se forme un dépót blanc floconneux.

Action sur le sous-nitrate de Bismuth, en présence d'alcali :

П n'y a pas de réduction du sel de bismuth.

Ces deux derniéres réactions nous mettent sur la voie des bases créatiniques si bien étudiées par M.le Professeur A.GAUTIER, car la réduction de la liqueur de FEHLING ne peut étre attribuée à du glucose. L'aldéhyde glucose réduit les sels de bismuth, tandis que les bases créatiniques sont sans action sur sur ces sels et réduisent la liqueur de FEHLING.

REAGTIONS CARACTÉRISTIQUES DES BASES CRÉATINIQUES

Réaction de Weyl. — On ajoute à la solution aqueuse quelques gouttes d'une solution à 1 p. 1000 de nitro-prussiate de soude, quelques gouttes de soude à 1 p. 100. La réaction a été positive : la solution s'est colorée en rouge rubis et a viré au jaune assez rapidement.

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Mais cette réaction n'est pas spécifique, car elle est également donnée par l'acétone. Il est donc indispensable d'appliquer les autres réactions des bases créatiniques.

Réaction de Jaffé. — On ajoute à la solution aqueuse une solution d'acide picrique et quelques gouttes desoude à 1 p. 100. La réaction a été positive : il s'est produit une belle coloration rouge. (ForiN s'est basé sur les différences d'intensité de cette coloration pour établir son dosage colorimétrique.) Nous avons reproduit plusieurs fois la reaction de JAFFE.

Sur les conseils de M. le Professeur А. GAUTIER, nous avons traité une solution alcoolique (alcool à 95°) de l'extrait par une solution alcoolique de chlorure de zinc de d — 1.2 (quelques gouttes). Le tube à essai a été placé dans de l'eau froide, et, au bout de 8 jours de repos, le dépót qui s'est formé dans le tube a été examiné au microscope, on a observé de rares,mais caractéristiques ilots d'aiguilles tres fines (chlorure double dezinc et de créatinine).

La reduction de la liqueur de FEHLING, les réactions de WEYL et JAFFE, la précipitation par la solution alcooligue de chlorure de zinc, nous font admettre l'existence de bases créatimiques dans l'extrait alcoolique.

D'ailleurs, la créatinine, la crusocréatinine (1) et la ranthocreatinine d'Armand GAUTIER précipitent également par le sublimé corrosif les acides phosphotungstique et phosphomolybdique ;

2» La deuxieme portion de l'extrait sirupeux est amenée, dans le vide sulfurique en consistance de miel épais, puis est successivement épuisée par le chloroforme, l'éther et l'acétone. Ces trois véhicules enlevent trés peu de substance à l'extrait. La pate blancjaunätre ainsi purifiée est desséchée dans le vide sulfurique.

Recherche du pouvoir hémolytique. — У gouttes de solution de cette pate dans l'eau physiologique hémolysent totalement XX gouttes de purée globulaire lavée et diluée (1 partie de purée globulaire pour 20 parties d'eau physiologique) au bout d'une demi-heure.

Nous avons vu plus haut que les extraits acétoniques de parasites n'hémolysaient pas (les substances hémolysantes du Versont

(4) А. Слов, Leçons de Chimie biologique normale et pathologique, p. 218,

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globulaire de sang de Cheval en vingt minutes, Cette substance est donc très active,

В, — Partie insoluble dans l'alcool absolu bouillant, — L'extrait alcoolique non dissous par l'alcool absolu bouillant est repris par de l'alcool à 90», Au bout de 24 heures, la dissolution est complete. Cet extrait alcoolique est évaporé dans le vide à une température maxima de 400 C,

L'extrail päteux obtenu ne renferme pas de phosphore. L'alcool absolu bouillant a done enlevé toutes les substances phosphorées.

Lextrail est redissous dans une petite quantité d'alcool а 90° froid; la solution précipite par l'éther, par l'acétone, On la traite parun exces d éther, Le précipité recueilli surun filtre estdessóché dans le vide; la liqueur éthérosaleoolique est évaporée,

Essais sur la substance précipitée par l'éther. — La solution dans l'eau précipite par : l'acide plerique, les réactifs de Tanret, de Brücke, de Bouchardat, de Dragendorf, les acides phosphotungstigue, phosphomolyhdque, le bichlorure de mercure, Mais Та réaction du biuret est négative et son absence exelut la présence des albumines et des nueléoprotéides ; il en est de méme des réactions de Wry et de JAFFE (absence de leucomalnes eréatiniques).

Ces réactions nous ont fait penser à l'existence possible des bases puriques (leucomaines xanthiques de A, Gautier). En effet, les bases xanthiques précipitent par les acides phosphotungstique et phosphomolybdique ; Vacide picrique précipite la guanine, Vhypoxanthine, la pararanthine, Кийимин à montré que l'iodure de potassium ioduré donne un précipité brun-rouge avec la guanine, la ramthine et Vhypovanthine,

Le bichlorure de mercure donne avec les bases xanthiques un précipité eristallin de sel double.

Nous avons alors effectué les réactions suivantes :

Réaction de Weidel, — On fait bouillir un peu de substance avec quelques gouttes d acide chlorhydrique et quelques cristaux de chlorate de potasse, Le produit est évaporéa sec,au bain-marie, etla capsule est placée sous une cloche légerement imprégnée d'ammoniague ; il ne s'est pas produit les teintes rose, puis rouge, puis pourpre caractéristiques de la xanthine et des homologues de la xanthine : hétéroxanthine, paraxanthine,

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Réaction de la murexide.— On chauffe dans une petite capsule, au bain-marie,quelques gouttes de solution aqueuse additionnées de quelques gouttes d'acide azotique. Sur le résidu d'évaporation de couleur jaunâtre, on verse une goutte d'ammoniaque : il se fait une coloration rouge. |

Dans un autre essai, nous avons remplacé l'ammoniaque par de la potasse ; le résidu rouge-violet a viré au bleu indigo par dessiccation absolue.

Cette réaction positive indique la présence de bases xanthiques dans la substance précipitée par l'éther.

Essais sur la solution éthéro-alcoolique. — Cette solution évaporée abandonne un léger résidu blanc amorphe, d' odeur forte, rappelant un peu celle du géranium rosat.

Peu soluble dans l'eau et dans l'alcool à 90°.

La solution alcoolique précipite par l'iodure double de potassium et de mercure, l'iodure double de potassium et de bismuth, l'acide picrique, le tanin, l'acide phosphomolybdigue.

Recherche du phosphore. — Negative.

Reaction du biuret. — Negative.

Les réactions alcaloidiques et l'odeur forte, agréable, de ce produit nous le fait ranger dans le groupe des Ptomaines, si bien étudié et presque entièrement édifié par A. GAUTIER.

Recherche du pouvoir hémolytique. — La ptomaine provoque l'hémolyse totale d'une purée globulaire de sang de Cheval lavée et diluée au bout de deux heures.

La petite quantité de matiere que nous avons obtenue ne nous а pas permis d'aller plus avant dans l'étude chimique de ce corps.