E) DOSAGE DU CHOLESTÉROL DANS LES TISSUS ET LIQUIDES DE L'ORGANISME

Dans l’organisme, le cholestérol existe le plus souvent inclus dans un complexe protidique qu’il faudra détruire pour une extraction totale. Aussi l'opération qui est à la base de tous les modes de dosages est une solubilisation du cholestérol dans un solvant appro-

prié. Tant vaudra l'extraction, tant vaudront les résultats.

Aussi, les auteurs recommandent-ils de préparer l'extraction : par exemple de dissocier le tissu par l’action d’une liqueur alcaline (AUTENRIErH et FUNK (147]) ou alcoolique alcaline (GrIGAUT [191]). Dans certains cas, l’action à froid de l’alcool sodé est suffisante pour dissocier le complexe protéino-cholestérolique et c’est ce qui se passe en particulier pour le sérum sanguin (GRIGAUT [191)}).

L'alcool absolu à lui seul détruit les liaisons avec les protides, et solubilise le cholestérol «et les phosphatides, avec le minimum d’inconvénients pour ces derniers; mais l'extraction par lalcool absolu est plus longue, plus délicate. Elle doit se faire à chaud, et dans des appareils spéciaux. En effet une macération à froid, même très prolongée donne des résultats inexacts. Il faut procéder à une extraction continue. Pour cela, de nombreux appareils ont été préconisés; d’abord l’appareil de ZULKOWSKkI modifié par SOXHLET qui donne des résultats imparfaits. Au contraire KumMAGAwA et SUTO [213] ont imaginé un appareil qui porte leur nom et dans lequel la substance est placée au sein de la vapeur du dissolvant. Cette lixiviation à chaud donne d’excellents résultats pourvu que la durée d'extraction soit suffisante.

Pour un dosage approché, mais pratiquement satisfaisant (5 p. 100), l’emploi de l’alcool sodé, permet soit directement (cas du sérum sanguin), soit après ébullition de quelques heures (tissus) d’extraire le

.cholestérol.

Une fois solubilisé, l'extrait alcoolique est débarrassé de matières étrangères aux lipides, que Pon obtient à un degré de pureté suffisant pour la suite du dosage.

Le cholestérol peut ensuite être dosé soit pondéralement, soit colortmélriquement.

KumacawaA et SuTro, GRriGAUT dosent le cholestérol par pesée à l’état cristallisé pur. E. GÉRARD [187] puis DoréE et GARDNER [176] utilisent la formation de l’éther benzoïque, qui est soluble dans l’alcoo!l bouillant et qui est presqu’insoluble à froid, mais la méthode la plus intéressante est celle de Winpaus [289] avec ses nombreuses modifications macrochimiques et microchimiques. Elle repose sur le fait suivant : la digitonine précipite totalement le cholestérol libre de ses solutions alcooliques et le complexe obtenu est pratiquement insoluble en macrochimie dans les solvants usuels. La méthode de WinbAUs utilisée tant à la détermination du cholestérol libre que du cholestérol éthérifié (après saponification) a été employée par de très nombreux auteurs, et cela, semble-t-il, avec le maximum de satisfaction.

Les méthodes colorimétriques qui sont nombreuses et moins sûres ne demandent pas, comme les précédentes « une habileté d'exécution, un matériel coûteux, et un grand laps de temps ». Elles suffisent aux dosages cliniques, et peuvent être pratiquées en série.

C’est à BurcHARD en 1889 que l’on doit d’avoir utilisé la réaction colorée de LIEBERMANN-BURCHARD à un dosage du cholestérol. GriGAuT [191] en France,

en 1912, mit au point une technique tout à fait inté-

ressante, et AUTENRIETH et FUNK [147] en Allemagne en 19135 donnèrent une autre technique.

La méthode de GRIGAUT, que nous avons utilisée dans une grande partie de nos recherches, libère le cholestérol par Palcoo! sodé, et reprend par léther. La méthode d'AUTENRIETH et FUNK, qui est celle employée par tous les expérimentateurs anglo-saxons, dissocie par la lessive de soude les tissus et Ie complexe où le cholestérol est engagé : Fextraction proprement dite a lieu ensuite par Féther ou le chloroforme. (C’est une méthode plus longue et plus coûteuse par le volume des solvants employés, solvants que l'on peut d’ailleurs récupérer. Elle donne des résultats un peu plus élevés que celle de GRIGAUT.

C’est sur le résidu de lévaporation des solvants, éther ou chloroforme, qu'est pratiquée la réaction colorée de LIEBERMANN-BURCHARD.

Comparées à la méthode pondérale de WINpAUS, les méthodes colorimétriques donnent généralement des résultats moins élevés. Cela provient de lextraction incomplète, en particulier pour celle de GRIGAUT. Cependant, les résultats qu’elles donnent restent acceptables en raison de leur marge d'erreur relativement faible (5 p. 100).