II. Les phosphatides
On désigne sous ce nom des lipides complexes azotés et phosphorés dont le plus important et le mieux connu appartient au groupe des lécithines.
A) ORIGINE, CONSTITUTION. — La lécithine a été dé-
couverte dans le jaune d’œuf, par le pharmacien chimiste GoBLEY en 1846, qui sut y mettre en évidence l'acide glycérophosphorique et des acides gras. C’est à DiarxoNow et STRECKER que l’on doit d’avoir identifié l’amino-alcool de la lécithine : la choline. Depuis la découverte de GoBLEY, on a retrouvé des corps analogues à la lécithine dans toutes les cellules animales ou végétales dès qu’on les a étudiées à ce point de vue. Elle existe dans les tissus, plus ou moins liée aux albumines et à la cholestérine. II ne s’agit pas d’une combinaison, mais d’une adsorption, d’une affinité telle que Péther n’enlève pas directement la lécithine dans le jaune d'œuf:
Il va sans dire que la lécithine n’est pas une, mais que les variétés sont nombreuses. Si l’on songe que dans cette molécule l'acide glycérophosphorique peut être l’acide a ou l’acide B, selon que l'acide phosphorique éthérifie une des fonctions alcool primaire, ou la fonction alcool secondaire de la glycérine, et si d'autre part on pense aux divers acides gras saturés (palmitique, stéarique) ou non (oléique, linoléique, linolénique) capables d’éthérifier les autres fonctions alcool de la glycérine d’une façon totale ou partielle, et enfin que la base aminée n’est pas forcément la choline, on aura une idée de l'extrême variété des lécithines que lon peut rencontrer. Toujours cependant, quelles que soient les modifications présentées.
le squelette demeure schématiquement :
le
CHO ———- acide gras CH ÔO ——— acide gras non saturé | O (l CH0:=-—:P-=0H
O --base organique complexe.
Aussi importe-t-il, lorsqu'on décrit une lécithine, d'en noter l’origine.
À côté de ce groupe de phosphatides essentielle-
N 1 ment caractérisé par le rapport — — -— (lécithine du 1e 1 jaune d'œuf, céphaline), on en rencontre d’autres où 1 2 2 le rapport devient —— (cuorine) -— et —— et dérivant 2 1 2
tous de l’acide glycérophosphorique.
Chez d’autres enfin, l’alcool éthérifié n’est pas la glycérine (sphingomyéline).
B) CARACTÈRES. — Les auteurs décrivent (Mac LEAN [220] LEVENE [228] Fourneau [182)) un très grand nombre de phosphatides. En réalité comme le dit très bien FOURNEAU <« quand ïl s’agit d’une substance aussi difficile à obtenir que la lécithine il faut distinguer entre ce qu’elle est et ce qu’elle pourrait être ». Seule la constitution de ia lécithine du jaune d'œuf est à peu près connue à la lumière de recherches fort intéressantes sur la Iysocytine (1).
La lécithine du jaune d’œuf est un oléo-palmito-
(1) Le venin de cobra tue par hémolyse. Or cette hémolyse ne se: passe qu’en présence de lécithine, qui n’agit pas comme lécithine, mais comme dérivé d’hydrolyse partielle, la lysocytine. L’acide gras libéré est toujours non saturé, ce qui a permis d'expliquer la constitution de la lécithine.
glycéro-phosphate de choline. En réalité, la choline étant une base alcoolique ne donne pas un sel, mais
un éther.
CH? —— O — CH3#10 (reste de l’acide palmitique) du 0 ne (reste de l’acide oléique) CHE (de CO (reste de l’acide oléique) O —— CH? OH | | CH CH A CiE (CH
C’est, comme la définit FOURNEAU « Une graisse dans laquelle une molécule d'acide gras est remplacée par l’éther phosphorique de la choline ».
La lécithine du jaune d'œuf est extraite par l’alcool. L’évaporation laisse un résidu d’où lacétone sépare un mélange de lécithine et de céphaline. La lécithine est précipitée par le chlorure de cadmium, on la purifie par recristallisation.
La lécithine du jaune d’œuf est une substance blanche, extrêmement altérable, très hyvgroscopique aussi se présente-t-elle habituellement sous forme d’une masse pâteuse colorée. Elle est soluble dans les solvants organiques en particulier dans léther anhydre, mais est insoluble dans lacétone (caractère général des phosphatides). Dans l’eau elle gonfle en donnant une pseudo-solution stable qui a la propriété d’émulsionner fortement les graisses.
L'hydrolécithine, obtenue par LEVENE en réduisant
la lécithine par l’hydrogène en présence de palladium
MOT Le
æst cristalline, stable à l'air et très peu soluble dans les solvants organiques froids.
Les propriétés chimiques des lécithines sont fort intéressantes. Leur grande oxydabilité en fait un pourvoyeur d'oxygène de l’organisme, et leur richesse en phosphore leur a fait attribuer un rôle thérapeutique dont Pefficacité ne compense certes pas les pertes phosphorées normales.
C) DOSAGE. — Le dosage des phosphatides comporte de grosses difficultés.
1) Ces corps sont tinstables. Ils s’altèrent rapidement à l’air, surtout à la chaleur; ils changent d’aspect, deviennent insolubles dans leurs solvants habituels, en particulier dans l’éther. Lorsqu'ils sont inclus dans la cellule morte, leur altération est de deux ordres. Ils s’oxydent très rapidement lorsque le tissu se dessèche, puis sous l’influence de diastases spéciales qui modifient la molécule, le phosphore prend une forme minérale, qui devient, elle aussi, insoluble dans les solvants organiques. Cette instabilité de la molécule rend l’extraction très difficile. On ne peut songer à peser le résidu de l’extraction alcoolique qui renferme d’autres lipides, et si l’on ne se place pas dans des conditions très spéciales, vide et faible température, il est impossible de séparer les phosphatides des autres lipides. La difficulté devient presque insurmontable lorsqu'il s’agit d'isoler quantitativement chacun des phosphatides à l’état pur.
2) À défaut de caractères spécifiques, comme il en existe pour le cholestérol (réactions colorées, réac-
tions de précipitations quantitatives) il est un élément
Qu
dont la présence constante caractérise les phosphatides : c’est le phosphore. Tous les phosphatides ont du phosphore dans leur molécule mais tout le phosphore tissulaire n’est pas lipidique. On peut schématiquement représenter le phosphore tissulaire totat comme étant la somme P total — P lipidique + P nucléique + P minéral + P organique inconnu.
Or, ainsi que l’ont montré MAYER et SCHAEFFER [237] TERROINE [277], pour le phosphore lipidique, JAviL- LIER [203] pour le phosphore nucléique, le rapport de ces formes constitue un indice, une constante tissulaire caractéristique.
Evaluer le phosphore lipidique est une façon détournée mais logique d’exprimer la teneur d’un tissu en phosphatides. Il va sans dire que le chiffre de phosphore lipidique ne correspond pas exactement au chiffre de phosphatides puisqu'il peut y avoir par molécule un ou deux ou trois atomes de P, mais c’est une indication excellente et actuellement la seule à notre disposition. Quelques auteurs calculent leurs résultats en lécithine, cela entraine une part d’arbitraire qui n'existe pas dans les cas précédents, puisqu'on ne préjuge point de la complexité des molécules où le phosphore est engagé.
3) Le dosage du phosphore lipidique comporte donc une extraction des lipides totaux, qui sont ensuite purifiés et minéralisés pour permettre le dosage du phosphore libéré de sa molécule complexe.
GÉRARD [189] desséchait le tissu avec du plâtre et portait à 100°. Il épuisait ensuite au Soxhlet par léther anhydre pendant 7 heures. GRIGAUT [191] et Isco-
VESCO [197] nièrent la valeur de cette technique, in-
suffisante pour extraire tous lés lipides phosphorés.
Les travaux de MAYER et SCHAEFFER apportent d'importantes modifications à cette technique, mais c'est à LEMELAND [222] qu’on doit une procédure rigoureuse et généralement adoptée.
LEMELAND réalise l’extraction, à effectuer sur le tissu dès après la mort, en utilisant comme appareil le Kumagawa et comme solvant, l'alcool. L’extraction dure 6 à 8 heures. La solution alcoolique est alors distillée dans le vide à basse température et le résidu est repris par l’éther anhydre qui ne dissout que les lipides.
Le résidu d’évaporation de l’éther est ensuite minéralisé et le phosphore dosé selon les méthodes ordinaires.
La technique de LEMELAND conduit au phosphore éthéro-soluble : bien que Mlle LE BRETON [158] ait démontré qu'une petite quantité, assez constante d’ailleurs, de ce phosphore n’était pas lipidique, et appartenait à des dérivés immédiats de l’acide glycéro-phosphorique, cela n’infirme pas la méthode qui reste très suffisante pour l’étude du métabolisme phosphoré.
Très récemment BLoor |157] reprenait l'idée de BaxG qui s’étonnait que Pon dose le phosphore pour apprécier une teneur en phosphatides : Le phosphore n’occupe qu’une faible place dans la grosse molécule des lécithines. Aussi BLOOR conseille-t-il de précipiter de leur solution alcoolique par le chlorure de magnésium et l’acétone, les deux plus courants des phosphatides, lécithine dt céphaline, et d’en pratiquer le dosage par oxydation chromique.
