A. LES METHODES ANTERIEUREMENT UTILISEES
En histologie, plus encore que dans les autres domaines, les lipides furent d’abord étudiés sous le nom de « graisses », caractérisées par leurs solubilités et leurs réactions de coloration.
Cette imprécision est naturelle : pour distinguer les corps dont l’ensemble forme ce groupe disparate, il faut au chimiste de longues et délicates manipulations. Souvent même, à défaut de l’espèce chimique impossible à atteindre, on est obligé de se contenter du dosage d’un élément minéral dont la présence caractérise certains corps. Ensuite, grâce à des coefficients, on peut arriver à une évaluation approximative (cas du phosphore lipidique pour les phosphatides).
En histo-chimie le problème est presque insoluble.
1°) Les substances à identifier sont en très faible
proportion (de lordre du millième au millionième de mgr.) et les réactifs ne sont pas sensibles à l'infini.
2°) Les réactifs sont généralement d’une relative spécificité.
g°) Les réactifs et les réactions possibles sanis dommage pour les coupes sont en nombre limité.
4°) Les substances à détecter ne sont généralement pas libres mais plus ou moins engagées dans une combinaison dont il faut les libérer, inaltérées, avant de les mettre en évidence.
On conçoit que la méthode histo-chimique pure soit rapidement limitée par la non spécificité, tandis que la méthode micro-chimique est limitée par le manque de sensibilité.
: À ce propos, il convient de distinguer ces deux mots : histo-chimie et micro-chimie qui n’ont pas le même sens pour l’histologiste et le chimiste.
L’histologiste use volontiers du terme micro-chimie. Pour lui, c’est la mise en évidence sous le microscope, la localisation et l’évaluation très approximative d’un groupe de corps, grâce à certaines propriétés que présentent tous les corps du groupe (coloration, réaction colorée, imprégnation, etc.); alors que le chimiste entend par micro-chimie la caractérisation et le dosage de très petites quantités de substances, ce qui l’oblige aux réactions ultra-sensibles et aux évaluations les plus délicates (pesée au millième de milligramme par exemple et outillage très spécial).
La localisation des albumines dans un tissu, la détermination de l'acidité, de lalcalinité cellulaires
par des matières colorantes jouant le rôle d’indicateurs, ne constituent pas des expériences micro-chimiques. Elles se rapportent plutôt à lhisto-chimie qui n’est souvent qu'une <« ébauche d’analyse > (PRENANT [118 )).
Les applications heureuses des méthodes chimiques en histologie se bornent à celles qui permettent l'identification d’un corps et sa localisation par des procédés assez sensibles et assez délicats pour ne pas altérer le tissu. Aussi, faut-il d'emblée rejeter les méthodes qui ne présentent pas ces caractères.
Une bonne méthode micro-histo-chimique doit être spécifique, sensible, d’une action douce, et ne peut être utilisée qu'à la détection de corps qui ne sont pas primitivement engagés dans une combinaison stable.
Il est certain que l’emploi du réactif molvbdique (LiziENFELD et Mori, Mac CALLUM, d’après PRENANT [118]), du molybdate d’ammoniaque et de l'acide sulfurique, (CASANOVA d’après ParAT ![255]) pour détecter le phosphore des lécithines constitue un non sens (PoricaRD et LEULIER [260 ]). Ce réactif brutal, non spécifique, ne peut mettre clairement en évidence le phosphore:inclus dans la molécule des lécithines. C’est sans doute à des méthodes de ce genre que BruNSvIK [160] fait allusion lorsqu'il rejette les tests micro-chimiques qui manquent de « subtile localisation », et qui sont partant « d’un infime secours en biologie ».
Au contraire l'emploi du xanthydrol à la détection micro-chimique de l’urée (Poricarp [259]) constitue
en principe une méthode micro-chimique type, car il s’agit Ià d’un réactif spécifique, sensible, dont Faction douce s'exerce, sans amener d’altérations, sur un corps libre, l’urée.
Mais il faut convenir que le nombre de réactions strictement micro-chimiques est limité et que rares sont les corps qui se prêtent à une telle détermination histo-chimique.
Cependant nombreuses sont les méthodes imaginées en vue de la localisation et de la diagnose des lipides. D’abord ce furent les méthodes colorantes, celles que LANGERON [216] appelle « méthodes d’analvse chromatique » basées sur la commune propriété des lipides de dissoudre électivement certaines matières colorantes. En concordance avec les résultats positifs donnés par ces méthodes, on découvrit que des cristaux apparaissent bi-réfringents en lumière polarisée, et la méthode optique qui devait se révéler féconde fut généralisée. Enfin, plus récemment, quand la composition des lipides eut été quelque peu éclaircie, on songea aux réactions colorées utilisées en chimie et qui sont données par des corps dont la mise en évidence constitue en général un test de la présence des lipides. En voici un aperçu
sommaire :
