SONT ESSAYÉES EN HISTO-CHIMIE

Peu à peu, la masse des lipides fut fragmentée, et les propriétés des groupes de corps ainsi créés furent étudiées.

L'un d’eux, celui des cholestérolides présente, nous l'avons vu, de magnifiques réactions colorées. Le cholestérol, constituant normal du protoplasma, peut être pris pour type des lipides. Sa présence une fois constatée permet de conclure, d’une maniere à peu près certaine, à la présence de lipides en général, aussi la détection du cholestérol est-elle devenue un moyen élégant de s'assurer de la présence de hpides.

Les réactions colorées du cholestérol sont généralement données par le cholestérol libre et éthérifié. Ces réactions sont extrêmement nombreuses, mais

nous plaçant strictement dans le cadre histo-chi-

mique, nous dirons quelques mots seulement sur celles qu’on a utilisées à la détection du cholestérol sur coupes.

Heixrz (d’après RomïEu |268]) se servait d’acide sulfurique seul, ou contenant des traces d’iode. SrockER [274] localisa le cholestérol dans les cellules de Küpfer; il basait sa technique sur la réaction à l’acide sulfurique formolé de UNNA et GOLODETZ [281] qui d’après ces auteurs ne détecterait que le cholestérol libre.

C’est surtout la réaction de SALKOWSKI-LIEBERMANN qu'on a adaptée à la détection histo-chimique du cholestérol libre et éthérifié.

In vitro, une solution chloroformique de cholestérol donne avec l’anhydride acétique et l’acide sulfurique une coloration rose devenant rapidement violette, et passant au vert.

Si l’on opère sur quelques paillettes de cholestérol, que l’on traite par une goutte d’anhydride acétique et une trace d’acide sulfurique, les cristaux prennent rapidement une belle teinte violette qui diffuse dans le liquide et vire bientôt au rouge.

Deux auteurs ont, à peu près à la même époque, appliqué cette réaction en histo-chimie animale, SCHULTZ en Allemagne, et ROMIEU en France.

SCHULTZ [272] fixe les tissus au formol très dilué et coupe à congélation. Les coupés sont exposées quelque temps à la lumière solaire, montées et très soigneusement séchées avec du papier buvard, (Pauteur insiste sur ce point). On verse ensuite sur la

coupe un mélange à parties égales d'acide sulfurique

et d’anhydride acétique, ou d’acide acétique glacial. On couvre aussitôt. La réaction est complète en quelques secondes. Les régions riches en cholestérol prennent une coloration bleu foncé qui ne dure que quelques heures.

Schultz a examiné les surrénales. Le cholestérol et ses éthers sont localisés dans les régions colorées par le Soudan; d’après l’auteur, cette technique respecterait les plus fines structures des tissus, localiserait parfaitement le cholestérol libre et éthérifié, mais ne donnerait pas de préparations durables.

RoMIEU [268) recommande une technique sensiblement analogue. Les pièces sont fixées au formol ou au Bouin sans acide acétique, et longuement durcies dans l'alcool à 95° (1). On coupe à congélation. La coupe déposée sur une lame est recouverte d’une goutte d'acide sulfurique concentré qu’on laisse agir selon le cas de 3 à 15 secondes. Si le cholestérol est abondant la coupe devient rapidement rose pâle ou gris rose. On arrête l’action de l’acide par deux ou trois gouttes d’anhydride acétique pur. On lave avec le même liquide pour chasser l'acide sulfurique. On recouvre la préparation d’une lamelle qu’on lute aussitôt à la paraffine. La coupe prend une teinte variant du rose foncé au violet diris.

Mais la teinte fonce rapidement. Après quelques heures, il ne reste sur la lame qu’un fragment de

tissu dilacéré et carbonisé par l’acide sulfurique.

(1) Cependant le cholestérol et ses éthers sont loin d’être insolubles dans l’alcool à 95°, d’autre part l’action de lalcool fort se traduit aussi par des phénomènes de refoulement des produits solubles vers le centre de la pièce (LEULIER et NOEL {225])