A) MISE AU POINT DE LA TECHNIQUE

D'abord faut-il fixer le tissu ? LEULIER et NoEL [225] immergent directement un fragment de tissu dans l’alcool à 35° et pensent qu’à cette dilution l'alcool est encore capable de fixer très correctement les pièces. Les éthers du cholestérol (nous l'avons vu plus haut) apparaissent à l’état cristallisé par simple action du formol. Il est préférable de les avoir d’emblée cristallisés, il faut donc fixer par le formol à 10 p. 100 dans le sérum physiologique.

La pièce, au sortir du formol, est laissée quelques heures dans l’eau physiologique, puis immergée dans une solution de digitonine à 1 p. 400 dans l’alcool à 50°. C’est la pièce qu’il faut immerger et non les coupes qui se désagrègeraient rapidement : la faible dimension de la pièce facilite la pénétration. — Il importe que la digitonine soit en solution dans l'alcool faible.

L’alcool est en effet préférable au réactif de Camr- . NADE formolé [161] (formol 18, alcool 9, acétone 73), recommandé par PARAT [255]. Des essais comparatifs nous ont montré que l’acétone dissolvait rapidement une partie des lipides de la corticale; le Soudan III ne donne alors qu’une faible coloration, et la digitonine ne précipite plus que de rares cristaux. Le même réactif de CAMINADE, où l’on a substitué de l’eau au formol, donne naturellement des résultats encore plus médiocres sur les pièces qui n’ont pas été préalablement fixées.

Enfin, l'alcool, solvant de la digitonine, doit être

So

de titre faible. LeuriIER ET NoEL [225] ont montré que l’alcool fort, solvant des éthers du cholestérol, refoule ces éthers vers l’intérieur de la corticale. Nous nous sommes demandé si l’alcool faible, en pénétrant dans le tissu, n’apportait pas un trouble analogue. Deux fragments voisins ont été prélevés dans une surrénale, fixés, puis l’un a été immergé dans une solution de digitonine, l’autre d’abord coupé à congélation, et ses coupes soumises à l’action précipitante. Dans ces coupes, il ne peut plus être question de refoulement, la pénétration se faisant directement. Or, une coupe du premier fragment se montre superposable à une coupe du deuxième fragment au point de vue de la répartition du cholestérol et de ses éthers.

Le tissu ne peut évidemment qu'être coupé à congélation, l'inclusion à la paraffine enlevant intégralement les lipides; Îles coupes, minces, seront alors montées dans la glycérine gélatinée avec ou sans coloration.

Comment examiner la coupe ainsi préparée ? Par action de la saponine il a dû se former des cristaux de complexe, qu’il faut détecter et localiser de manière précise.

La lumière polarisée est le réactif le plus sensible que nous possédions. C’est elle qui détecte avec le plus de finesse le complexe cristallisé. Mais ce complexe a une double réfringence relative, très infé-

rieure à celle des éthers du cholestérol (1) aussi fau-

(1) Nous nous sommes’ assuré que les éléments primitivement biréfringents étaient constitués uniquement par des lipides: leur entière solubilité dans l’éther ne laisse aucun doute à ce sujet.

TVR | + CE

dra-t-il bien distinguer.

Nous avons vu que la chaleur éteint la biréfringence des éthers du cholestérol, tandis que celle du complexe persiste. L'idéal est d'utiliser une platine chauffante à 70°, comme celle décrite par LEHMANN (d’après MauGuIN [231]), le complexe demeure seul visible, sous sa forme cristalline en aiguilles paraissant groupées autour d’un axe : çà et là dans la corticale, des gouttelettes donnent la croix de polarisation. À cette température, on ne saurait confondre le complexe encore cristallisé et biréfringent avec les éthers du cholestérol et les phosphatides (V. PATZELT [256 }).

Après ce refroidissement le complexe apparaît encore seul cristallisé, au milieu de gouttelettes présentant la croix de polarisation. Ce sont les éthers et les phosphatides qui sont demeurés liquides : leurs petites sphères liquides se déplacent, fusionnent entre elles, ce qui enlève alors tout intérêt à la préparation.

Un second moyen de caractériser le complexe est d'utiliser des solvants, capables de dissoudre les éléments lipidiques biréfringents sans toucher au complexe. A cette fin nous avons utilisé l’éther, mais les lipides fixés se dissolvent plus difficilement dans l’éther qu’on pourrait le croire; il faut changer deux fois au moins l’éther pour obtenir une coupe optiquement vide. Et les solvants organiques ne sont pas sans nuire, surtout lorsque leur action est répétée, sur l’état cristallin du complexe cholestérol-digito-

nine.

A la méthode des dissolvants se rattache l’emploi du Soudan III. Plusieurs auteurs signalent que la biréfringence des éthers du cholestérol ne résiste pas au Soudan, tandis que le bleu de Nil ne l’altère pas. Nous avons pensé que la différence de solvant de ces matières colorantes pouvait expliquer en partie ce phénomène curieux. Tandis que le bleu de Nil est utilisé en solution aqueuse, le Soudan s'emploie en solution dans l’alcool à 70°.

Dans une coupe colorée au Soudan, le complexe se détache plus brillant, inaltéré, sur un fond jaune orange, d’où les éléments biréfringents primitifs ont disparu, ou présentent tout au moins un éclat très atténué.

Quoiqu'il en soit, qu’on utilise la chaleur, les solvants ou les colorations, il faudra surtout développer les moyens d'améliorer l’examen au microscope polarisant. Les manuels de techniques (LANGERON [216|, BEHRENS-KLEY [153]) indiquent la règle à suivre dans les cas où la biréfringence est minime.

La coupe a été montée sur une lame neuve, propre, sans défaut aucun, lame, lamelle, glycérine gélatinée doivent être soigneusement contrôlées à la lame de gypse (FIELD et ALSBERG |[180]). Le microscope polarisant qui ne transmet environ que le quart de la lumière qu’on lui fournit (perte de lumière dans les nicols) doit être très éclairé. L’œil de l’observateur est abrité par un écran noir.

Enfin on pourra pratiquer l’observation en s’aidant d’une lame sensible donnant le rouge de premier ordre. Certains corps à réfringence très faible, pres-

ER * : De

que invisible entre les nicols croisés sont cependant décelables grâce à leur action sur la teinte de polarisation de la lame sensible.