I. Dosage du cholestérol

Le dosage du cholestérol total s’effectue facilement et avec une précision relative par la méthode colorimétrique de GRIGAUT. Mais la distinction du cholestérol libre et du cholestérol éthérifié ne peut se faire que par la méthode de Winpaus, méthode pondérale précise.

1) TECHNIQUE COLORIMÉTRIQUE (GRIGAUT [191 /]).

Le cholestérol des tissus extrait par l’éther après homogénéisation des tissus par l’alcool sodé au bainmarie est dosé en solution chlc formique en utilisant la réaction de LIEBERMANN-Bu. cHARD. On compare avec une solution chloroformique de cholestérol de titre connu et traitée dans les mêmes conditions.

a) La prise d'essai, 0,50 à 1 gr. de tissu, additionnée de 30 cc. d'alcool à 70° sodé à 1 p. 100, est introduite dans un petit erlenmeyer en pyrex de 100 cc. et placée au bain-marie bouillant. Le liquide contenant le fragment de médullaire noircit rapidement (adréna-

ro

line), tandis que le fragment de corticale, en particulier chez le cheval, communique à la solution une coloration jaune plus ou moins accentuée (pigments). Il faut surveiller l'opération : il se produit parfois une mousse abondante qui peut s'échapper du récipient, ce qui occasionne des erreurs. Lorsque le volume du liquide a été réduit de moitié et que le tissu est entièrement dissous, on laisse refroidir et procède à l'extraction.

b) Extraction.

Le liquide est entièrement transvasé dans une ampoule à décantation. L’erlenmeyer est rincé deux fois avec 10 cc. d’éther; l’ampoule est bouchée et retournée trois fois avec précaution. Après un repos de 15 minutes, on décante et on lave avec 20 cc. d’eau qu’on fait glisser le long des parois de l’ampoule. Nouveau repos de 15 minutes. Si la ligne de séparation entre la couche éthérée et la couche aqueuse n’est pas nette, on la détermine en ajoutant une goutte de solution alcoolique de phtaléine du phénol. I est bon d'effectuer un second lavage. La dernière décantation doit être effectuée lentement, en plusieurs fois, surtout vers la £n; il ne doit pas rester trace, après repos, de liquide aqueux au-dessus du robinet. À ce moment, l’ampoule bouchée et tenue dans la paume de la main est retournée, et le robinet brusquement ouvert. Le liquide aqueux retenu par capillarité dans le bec de l’ampoule est expulsé. On fait alors passer dans un petit cristallisoir de forme haute, le contenu de l’ampoule qui est lavée deux ou trois fois à l’éther. Cet éther de lavage est

Rhone

naturellement joint aux autres liqueurs. On laisse s’évaporer le tout, doucement, à l'air libre.

c) Dosage.

Le résidu bien sec, généralement incolore est repris d’abord par 2 ce. de chloroforme qu’on introduit dans un tube de verre étroit et gradué à 5 ce. Le bécher est rincé plusieurs fois au chloroforme que lon transvase dans le tube de verre pour compléter à 5 cc. En même temps, on introduit dans un autre tube gradué 5 ce. de solution témoin (solution chloroformique de cholestérol à 0,06 p. 100). Dans chacun des tubes on ajoute 2 ec. d’anhydride acétique, et trois gouttes normales d'acide sulfurique concentré et pur. On retourne les tubes. La coloration d’abord rose puis bleue passe rapidement au vert et atteint son maximum d'intensité après 25 minutes. On compare alors au colorimètre.

Soit p, la prise d’essai; t, le chiffre du colorimètre pour le témoin; s, le chiffre du colorimètre pour le tube en expérience : la quantité de cholestérol total contenu dans 1000 gr. de tissu frais est donnée par la formule :

pes Si nous avons fait figurer dans ce travail cette

Cholestérol p. 1000 —

technique, tout à fait classique, c’est surtout pour insister sur les précautions nombreuses qu’elle demande et qui ont été très bien décrites par FRÉCHIN 1183]. Pour qu’il y ait vraiment correspondance entre l'intensité de coloration et la teneur en cholestérol,

il faut se mettre à l’abri de nombreuses causes d’er-

reur, Car beaucoup de facteurs influencent cette réaction.

1°) La lumière active la coloration, c’est pourquoi AUTENRIETH et FuNk ![147! opèrent la réaction dosimétrique dans l'obscurité tandis que ScauLrz [272] en histochimie obtient les plus belles colorations sur les coupes longuement exposées à la lumière solaire.

2°) La durée est un facteur important et le dosage doit avoir lieu au moment de l'intensité maxiüna. La marche de la réaction vers son maximum varie avec la quantité d’acide sulfurique ajouté et sa qualité; aussi faut-il opérer de façon rigoureusement semblable et pour le témoin et pour le tube en expérience.

»°) Les réactifs sont le facteur essentiel. Le chloroforme doit être anhydre et sans alcool. Aussi le chloroforme anesthésique ne peut-il être utilisé. L’acide sulfurique doit être concentré et pur. On le distribue au compte-gouttes normal et jamais avec un flacon compte-gouttes qui «< ramasse » l'humidité atmosphérique, et dont les premières gouttes ne sont qu’un acide fortement dilué. II va sans dire que les tubes où se pratiquent la réaction doivent être absolument secs.

La technique de GRrIGAUT employée en observant ces précautions donne des résultats satisfaisants. Elle nous a permis de mener à bien, en opérant par série de 4, un assez grand nombre d’expériences dont les résultats se révèlent d’une constance largement suffi-

sante pour étayer nos conclusions.

Répartition du cholestéroi total

(dosage colorimétrique).

Cholestérol p. 1000 de tissu frais.

SURRÉNALES DE MOUTON.

dans les: capsules surrénales de Mammifères

JIT

corticale

médui- corti- médul- corti- médullaire cale laire cale laire 4.85 2.96 3.45 3.18 6.52 DO 410) 6.45 4.39 6.99 3.24 3.80 3.97 2,87 a 21 4.76 2.56 22 a ANS 6.52 4.35 a 9 R 9 2 « 419 3.82 5.17 a 2.30 5.46 4.30 9] SL Eoitl a 3.66 4.86 4.27 a 3.70 552 a 3.69 4.04 TZ) 3.95 a 5) 4.10 3:99 6.60 3.96 a 3.96 4.30 à 3.10 6.18 3.60 5.83 a 3 4.68 4,10 3.68 sg 3.19 4.97 4.27 sd 2.60 4,19 SURRÉNALES DE CHÈVRE.

ITS 2710 5.61 a 4.08 7.50 5.24 IT | 5.60 5.30 «a 3.84 5.01 4,74 LEHTS 1.83 ||

RRÉNALES DE Bœur.

AOL.

SURRÉNALES DE CHEVAL.

corti- médul- corti- médul- corti- médulcale laire cale laire cale laire 2.73 4.09 Il 38.20 12.90 14.5 11.60 2.94 34.07 14.8

2.80 3.95 7.60 9.2 16.40 JR DIT 4.05 Ila S 8.33 2 17.30 2.13 4.50 SURRÉNALES DE