MULET 3.80 4.58 IIIa 39 18 IV 18.5 d
RRÉNALES DE VEAU.
SURRÉNALES DE PORC.
corti- médul!- corti- médul- corti- médulcale laire cale laire cale laire 4,11 6.52 7.85 6.53 II 8.10 6.30 8.98 6.98 4.10 5 18.70 6.49 6.90 4,28 ES) 11830 Il 6.66 9.09 2.91 4.65 9.99 7.31 7.04 Flu (sg) 9.96 7.69 3.46 2.80 (sd) 6.25 8.17 (sg) | 11.20 5,55 232 3.86 (sd) 9.83 8.62 7.94 7.10 3199 4,47 (sg) 12.66 1492 7.88 9.30 (sd) 9.28 8.40 4.11 5.91 :
LÉGENDE : Le dosage a été effectué soit séparé- 4.95 6.21 ment sur la surrénale droite (sd) ou la surrénale re ë gauche (sg) du même animal (sd)-(sg), soit sur l’ensemble des deux surrénales du même animal 6.97 6.99 (a), soit sur un lot moyen.
Lorsque divers dosages concernant à la fois les
lipides et le phosphore ont été effectués sur un méme lot, le numérotage des séries permet d’établir une comparaison.
RUN Nes
2) TECHNIQUE PONDÉRALE (WiINbAUS [289]).
Le cholestérol et ses éthers sont libérés de leurs combinaisons protéidiques par l’alcool bouillant, qui les dissout au cours d’une longue extraction dans. l'appareil de Kumagawa. Le liquide d’extraction est souvent utilisé à la fois au dosage du cholestérol et au dosage du phosphore lipidique. La part destinée au dosage du cholestérol est divisée en deux : dans l’une, après purification, on précipite par la digitonine le cholestérol libre, et dans l’autre, après saponification et purification, on précipite le cholestérol total.
Tel est le principe de la méthode que MAYER et SCHAEFFER [234] ont utilisée dans leurs recherches, en combinant l’extraction au Kumagawa, et la pré-
cipitation par la digitonine :
a) Prise d'essai.
À partir de l’échantillon bien homogénéisé, on effectue une prise d’essai de 5 gr. environ, que l’on broie finement avec du sulfate de soude anhydre, jusqu’à obtention d’une poudre homogène, (Dans nos toutes premières expériences où seul le cholestérol était dosé, la pulpe après pesée était d’abord desséchée à l’étuve et pulvérisée ensuite avec du sulfate de soude anhydre. La pulvérisation était plus facile et la poudre fine qui en résultait s’épuisait plus rapidement, mais outre la perte de lipides qui peut se produire à l’étuve (TERROINE [276]), l'emploi
ultérieur du même liquide d’extraction pour le
dosage du phosphore lipidique nous a fait aban-
donner cette pratique).
b) Extraction par l'alcool.
La poudre est introduite aussitôt dans une cartouche pour extraction dont la partie inférieure est déjà munie d’une couche de coton. La poudre ellemême est surmontée d’une mince couche de coton, qui doit être au moins à % em. du bord. Il ne faut pas trop tasser et laisser à la partie inférieure, entre la cartouche et son support, un espace de 1% em. au moins pour permettre le siphonage.
On introduit dans le ballon du Kumagawa 40 cc. d’alcoo!l (1) à 95° et une bille de verre, et on fait glisser dans le col le porte-cartouche. On dispose le ballon, ajuste le réfrigérant, dont on a légèrement vaseliné la partie inférieure rodée qui bouche le ballon.
L’extraction est aussitôt mise en train. On la laisse se poursuivre régulièrement à raison d’une vingtaine de siphonages à l’heure pendant 12 heures. En réalité, 8 à 10 heures sont seulement nécessaires et ce n’est que par sécurité que l’opération est poussec à douze heures (2).
On transvase alors le liquide encore chaud dans un ballon jaugé de 55 cc., on rince le ballon d’extrac-
tion à l’alcool chaud, que l’on réunit au liquide ex-
(1) L'alcool à 95° par son point d’ébullition élevé est un meilleur solvant que l’éther ou le chloroforme.
(2) Nous avons à peu près régulièrement contrôlé l’extraction; même lorsque l’extraction n’a duré que 8 heures, la poudre résiduelle ne contient plus, après ce temps, trace de cholestérol.
Ero0ctes
tractif. On laisse refroidir et complète avec de Paicool à 95° au trait de jauge.
Le contenu du ballon jaugé est ensuite réparti de la façon suivante :
20 cc. pour le dosage du cholestérol libre;
20 cc. pour le dosage du choïestérol total;
10 cc. pour le dosage du phosphore lipidique (voir plus loin).
1°) Pour doser le cholestérol libre, certains auteurs effectuent aussitôt la précipitation. Nous préférons pratiquer d’abord une reprise à l’éther. Le liquide est évaporé au demi et introduit dans une ampoule à décantation, ainsi que l’éther de lavage du ballon et 10 cc. d’eau pour favoriser la séparation des couches. Après deux lavages et deux décantations, la solution éthérée est finalement reçue dans un erlenmeyer et évaporée à siccité au bain-marie à 50° environ.
Le cholestérol libre est ainsi prêt à être précipité.
2°) Pour doser le cholestérol total il faut d’abord saponifier puisque la digitonine ne précipite que le cholestérol libéré de ses éthers. On introduit dans un ballon muni d’un réfrigérant ascendant (l'appareil de Kumagawa dont on a enlevé la cartouche, convient très bien), la solution alcoolique de cholestérol et une solution alcoolique de KOH N/25 en quantité variable suivant la teneur présumée en cholestérol éthérifié.
La saponification doit durer 2 h. à 2 h. 30, pendant lesquelles le liquide doit être maintenu à l’ébullition.
La saponification terminée, on distille l’alcool et
