DUR CUT
Il est évidemment nécessaire de réhydrater ce milieu de base pour lemploi.
Dans un ballon, on met donc le milieu-poudre au contact de l’eau distillée dans la proportion de 75 g. de produit pour 1.000 cc. d’eau; on agite et on porte à l’ébullition: la poudre se dissout et on obtient un milieu jaune clair, formant un léger trouble. Il faut se garder de filtrer et on le répartit en agitant avant de mettre en tubes.
2° Préparation de la solution-étalon de Pantothénate de Calcium.
Les Laboratoires Difco, indiquant la dose de 0,10 y de Pantothénate pour 10 cc. de milieu comme étant la plus favorable, nous avons réalisé une solution renfermant 0,1 y par cc., et, pour ce faire, nous avons pesé, par exemple, 0,1 gr. de Pantothénate et fait 3 dilutions successives à 100 cc.
3° Etablissement des gammes d’essais.
Dans des tubes à essais stériles, on répartit le milieu de base, à raison de 5 cc. par tube. Puis, on ajoute des quantités croissantes de solution-étalon ou de dilutions variables de Protéolysat. On complète toujours à 10 cc. de volume final, à l’aide d’eau distillée.
Gamme étalon.
00 CEE EE SRE OI PET PRE peste 1 2 SATA, BAR G 7 cc CC cc CC; cc cc (a LE Ce ë .
Milieu de base ........ 5 5 DAUES 5 NME Solution étalon ....... 0 0,2 0,4 | 0,6 0,8 ee Eau distillée .......... 5 4,8 | 46.| 44 | 4,2 4 3,8
Ce qui donne une gamme s'étendant de la façon suivante: 0 y — 0,02 — 0,04 — 0,06 — 0,08 — 0,1 — 0,12 y de Panto-
thénate, le premier tube servant naturellement de Témoin.
Pour simplifier les manipulations, nous avons, au début de nos essais, préparé des dilutions du milieu Protéolysat à 2%, dilutions que nous avons stérilisées et qui ont servi ensuite lors de chaque dosage. Ceci nous permettait d'ajouter toujours 1 ec. de la dilution voulue, au lieu de fractions de Protéolysat pur de plus en plus petites et, par conséquent, réduisait considérablement les erreurs relatives de pipettage.
Po oi Ee.
Gamme des dilutions de Protéolysat.
Tubes N° | 1: | 2. | 3. | 4. EE | | & L ne ne | Milieu de base ..... DICC-O ME ECC MINOR CC: SNCC-AMMONCC- | | | Titre de’ dilution ic. rico mie eric 1-cc.
Protopuridil 1/20/4175 tdile210 | dil.
à 2% | | 1/100 | | î | Hau distillée "1... AACC A ETAGE: | A ec. ACC: 4 çc.
Les tubes sont soigneusement bouchés au coton cardé et disposés à l’autoclave, pendant 5 minutes à 120° (ne pas stériliser au delà, une température supérieure pouvant altérer le milieu).
4° Préparation de la suspension microbienne.
Pour conserver les souches dont nous avons besoin, nous les repiquions tous les dix jours sur le milieu Difco, désigné sous le terme: «Bacto-Micro-Assay-Culture-Agar>, milieu également déshydraté, et qui, après réhydratation, donne un milieu solide nutritif, d'aspect voisin de celui de la gélose, que l’on ensemence en tubes inclinés. C’est à partir de ces souches
que nous pratiquions les ensemencements appropriés à nos expériences.
En ce qui concerne le dosage du Pantothénate, 2 h. avant la date prévue pour l’ensemencement des tubes à essais du titrage, nous avons repiqué la souche de Lactobacillus arabinosus (à partir de la souche d'entretien) sur un autre milieu Difco désigné, lui, sous le terme de «<Bacto-Micro- Inoculum>, bouillon également utilisable pour toutes les bactéries que nous avons employées.
De même aspect que les autres, il se réhydrate selon le mode habituel. Milieu mutritif, dépourvu de facteurs de croissance, il permet la croissance du microorganisme grâce à l’apport de traces de Vitamines provenant du milieu <Bacto-Micro-Assay-Culture-Agar», prélevé lors du repiquage. Le «Bacto-Micro-Inoculum> apportera au milieu du dosage moins de facteurs susceptibles de fausser les résultats.
