SOLUTION SALE UT AM NURENTE 5 CC

BOMILIONELSA IN EU CIN AU RE 5 cc.

PAUSE OS D MNT REMISE 1.000 ce.

À justen letpH a€6.6 26.8:

Solution saline A:

Phosphate monopotassique (KH, PO*) — 25 9.

Phosphate dipotassique (K, H PO‘) — %5 g. Eau distillée — 250 ce.

Soluton saline B:

Sulfate de Magnésium (Mg SO“, 7 H20) — 10 g.

Chlorure de Sodium (CI Na) — 25 g.

Sulfate de Fer (Fe SO“, 7 H20) — 0,5 g.

Sulfate de Manganèse (Mn SO“, 4 H0) = 0,5 g.

Eau distillée — 250 cc.

La modification de BARTON-WRiGur et BooTx (26) comporte l’addition de Niacine, Acide pantothénique, Asparagine et Xylose.

Dans cette formule, SILBER et UNNA (27) remplacent l'extrait de levure par: Thiamine 10 g., Pyridoxine 10 g., Niacine 10 g., Acide pantothénique 1 g.

Nous avons employé le milieu Difco, spécialement réservé à cet usage. Sa composition qui répond à la formule indiquée par les auteurs de la méthode est modifiée de façon à renfermer la totalité des facteurs nécessaires à la croissance optimale du Lactobacillus cassei (sauf la Riboflavine, cela va sans dire).

Il suffit, pour l’emploi, de la réhydrater à raison de 48 g. de «Bacto-Riboflavine-Assay-Medium>, pour un litre d’eau distillée.

On porte à ébullition pendant 2 à 3 minutes.

Solution standard de Riboflavine.

Les Laboratoires Difco ont indiqué que l’ordre des essais les plus efficaces, utilisant le <«Bacto-Riboflavine-Assay- Medium», était compris entre 0,025 y et 0,15 y de Riboflavine; pour cette raison, nous avons préparé une solution étalon renfermant 0,1 y par cc. pour pouvoir réaliser facilement une gamme-étalon correspondant aux doses de: 0,025, 0,05, 0.075, 0,10, 0,20 et 0,30 y de Riboflavine par tube à essais de 10 cc.

Nous indiquons dans le tableau suivant les doses correspondantes en cc. de la solution étalon.

Gamme étalon.

| ; EM TIR 2 5 4. 5 6 7 Tubes N | ec. (e1e ec CC: ec (816) ce LE Te LA = Fe É Milieu de base ........ 5 | 5 5 | 5 5 5 5 Solution étalon ........ 0 | 0,25 | 0,50°| 0:75 1 2 3 Hans distilléeliiue.tu. 5 | 4,75 | 450-| 4,25.| 14 3 2 | Il

Gamme des dilutions de Protéolysat.

On bouche soigneusement les tubes et on passe le tout à l’autoclave à 120°, pendant 15 minutes.

Préparation de la suspension microbienne.

On ensemence un tube de 10 cc. de bouillon «Bacto- Micro-Inoculum> avec une dose de Lactobacillus casei prélevée à la culture d’entretien sur «Bacto-Micro-Assay-Cullure-Agar».

On dispose ce tube à l’étuve à 37°, pendant 24 h.; après ce temps d’incubation, on centrifuge aseptiquement; on décante le liquide surnageant et les bactéries formant le culot sont remises en suspension dans 10 cc. de soluté physiologique stérile. Il est nécessaire de diluer encore cette suspension au 1/20, toujours avec de l’eau physiologique; elle doit être alors légèrement trouble. Les tubes étant refroidis, on les ensemence alors au moyen d’une goutte de l’émulsion bactérienne; puis on place les cultures pendant 18 à 24 h. à 37°, pour réaliser le développement propice. On peut à ce moment procéder aux mesures, après avoir arrêté la croissance des cultures par un passage à la glacière d’une demiheure environ.

Mesures.

Nous avons utilisé, pour cette Vitamine, le filtre bleu 420 M et l'écran n° 4.

Voici réunis dans le tableau suivant les résultats obtenus:

Témoin — 25.

Solution vitamine-test :

DDR RE 0,075 + 56 eo Te DURE PAC SERRE 02 y — 67,4 — 95 — 424 HO RRS O CEA 7

Protéolysat à doser:

lice Prot pur:

= 109,27 025 — 530,2 1ACCAPTOLECL 72;

laCcProtl)2:

= 427 + 25 — 17 face Prot#1720;

— 129,505 =—"4,5 1ccmProtel/50!

— 26 (croissance presque nulle) 1=Ccc-Prot21/100:

— croissance nulle.

Riboflavine

L6,2 ER ne CD L'OROPR E O OCM Cie DEEE cicie

NOR E PÉORPEEEEEEEEEECEEEEEC :

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3 30 ea lore 7 6 ° ü à ü NT HOT re s C7 d 5 :

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NS 17 1 à & | | | | £ : ; à 10 : : ; ss 1 :

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. " £ er ———————+ Ve STE 5 & Concentrations | à I D: 2. 5 en y de riboflavine 1/. A pur

— mesures de la courbe étalon

— mesures des échantillons de protéolysat