DOSAGE DE LA PYRIDOXINE DANS LE PROTEOLYSAT A
La Pyridoxine s’est révélée être un facteur de croissance indispensable à diverses bactéries: Lactobactériacées (L. casei), Streptocoques, Staphylocoques. M. WELSCH note que «par traitements aux rayons X, on a obtenu des mutants de Neurospora sitophila et Neurospora crassa, incapables de synthétiser la Vitamine B6, au moins dans certaines conditions».
Nous citerons les méthodes de WicLiaMs, EaxiN et Mc Manan (42); et celle de ATKIN, SCHULTZ, WILLIAMS et FREY (43), toutes deux basées sur la croissance d’une souche de Saccharomyces, en proportion de la teneur du milieu en Pyridoxine.
Il nous a paru intéressant d'essayer la méthode de STOKES, LARSEN, WOODWARD et FOSTER (44), dont le principe est le suivant: «Le poids de mycélium formé par une souche de Neurospora, dans des conditions rigoureusement définies, est proportionnel à la concentration du milieu en Pyridoxine.»
Le milieu de base que nous avons employé est désigné sous le terme: «Bacto-Pyridoxine-Assay-Medium». 11 est préparé par les Laboratoires Difco, d’après la formule de STOKES, LARSEN, WOODWARD et FOSTER, modifiée par BARTON-WRIGHT; il est entièrement dépourvu de Pyridoxine.
I faut le réhydrater à raison de 50 g. pour 1000 cc. d’eau distillée.
Solution étalon de Pyridoxine.
En utilisant ce milieu, l’ordre des essais les plus effectifs se trouve entre 0,2 et 0,8 y de Pyridoæine: nous avons donc préparé une solution-étalon contenant 20 y pour 100 cc. soit 1 y /5 cc. au lieu de 1 y /1 cc. ce qui permettait de quintupler la quantité de solution à ajouter pour l’établissement des séries d’essais, évitant une trop petite mesure à la pipette, et risquant une erreur relative plus petite.
SHO0f=pinse
Etablissement des gammes.
Nous avons utilisé, pour la culture du Neurospora, des petites fioles de Fourneau, cylindro-coniques, qui mrettaient à la disposition du mycélium une plus grande surface libre de liquide en contact avec l’air.
Nous avons procédé comme dans le cas de tubes à essais: dans chaque fiole, nous disposons 5 cc. du milieu de base, nous y ajoutons alors la quantité voulue de solution-étalon ou de dilution de Protéolysat, et, nous complétons toujours à 10 cc. de volume final par fiole, à l’aide d’eau distillée.
Gamme-étalon.
ne REP An PES an ASS Meet ec. | cc. | ce. | ec. | ce | cc:
