CHAPITRE VI

Recherches ayant pour but de déterminer l’action du Radium sur lAspergillus fumigatus FRESENIUS cultivé sur milieu riche en matières nutritives

Par nos recherches effectuées antérieurement et décrites dans les deux chapitres précédents, nous avons conclu que le radium exerce une influence nocive en général et sur les appareils reproducteurs, où l’activité vitale est la plus forte, en particulier. Nous trouvons dans ces phénomènes d’abord une preuve que l’action du radium sur un organisme est en rapport avec l’activité vitale de ses cellules et augmente proportionnellement et en raison dirécté avec cette activité. (Théorie de BERGONIER et TRIBONDEAU). --"

Nous voyons en outre qu’il se manifeste une énergie tendant à faire apparaître des modifications morphologiques et biologiques sur l’organisme étudié et qui s’observent en premier lieu sur les appareils reproducteurs; de semblables phénomènes énergétiques peuvent être remarqués dans d'innombrables cas en Cryptogamie. Chaque fois que nous soumettons une espèce à des conditions de vie différentes, la forme de la reproduction tend à évoluer la pre: mière; une levure qui se multiplie ordinairement par bourgeonné? ment, cultivée pendant quelques jours sur des milieux très nutritifs, rajeunit et devient très vigoureuse; soumettons-la ensuite à l’inanition en la cultivant sur blocs de Plâtre : la culture cherchant à assurer sa vie pourra former dans ses cellules des ascospores. ‘:°°

Cet exemple montre qu’il convient de fournir à l’organismé cryptogamique une vitalité accrue afin de lui donner les réserves énergétiques nécessaires pour supporter l'influence d’un agent étranger et accomplir les transformations vitales indispensables à la conservation de son espèce. Notüs avons donc en suivant l’exemple déjà classique des levures pensé favoriser le phénomène modificateur produit par le radium en donnant à notre Aspergillus l'énergie nécessaire à une nouvelle évolution en le cultivant sur des milieux riches en matières nutritives. Nous souvenant aussi des travaux de P. Barry sur l’influence favorable exercée par quelques terres rares réparties à de faibles concentrations dans les milieux de culture, nous avons, d’un autre côté, pensé par l’addition de ces substances augmenter la vigueur de l’organisme en essai. Vu aussi les travaux d'ÉLLINGER et GANS montrant l’augmentation de l'action du radium sur les cellules par l’adjonction dans les tissus

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ambiants de sels à poids atomiques élevés. Nous avons décidé de composer un milieu renfermant des traces de sulfate de thorium qui répond à ces deux conditions. |

Il nous fallait faire un choix entre plusieurs milieux connus comme favorables à la poussée des Périsporiacées.

Dans la composition du milieu cinq éléments étaient à considérer :

les éléments minéraux, l’aliment hydrocarboné, l’aliment azoté,

la réaction du milieu,

la consistance du milieu.

Pour les raisons données plus haut, nous étions obligés d’abandonner le milieu de Raulin; ce milieu, renfermant une grande quantité de sels minéraux différents, nous aurait voilé l’action du thorium; en outre ce milieu contient une assez forte dose de potassium — élément dont nous connaissons depuis les travaux de NaDsoN l’action antagoniste vis-à-vis du radium; de plus le milieu solide de Raulin ne permet pas la mise au point au pH optimum cultural pour la culture de l’Aspergillus fumigatus.

Le milieu de Sabouraud ne nous a pas non plus semblé approprié au but proposé; la décomposition des peptones par l’assimilation de l'organisme engendre des principes albuminoïdes qui auraient pu fausser les réactions ultérieures causées par le radium. Aussi d’après les travaux de Sabouraud même l’élément hydrocarboné entrant dans la composition de ce milieu renferme une certaine quantité d'éléments minéraux non définis jusqu’à présent et si, pour la préparation du milieu on s'adresse à des produits purs, DESCOURAUX dans ses récents travaux l’a prouvé, on prive le substratum des sels qui constituaient précisément la constante minérale du milieu. Nous avons voulu éviter des déboires dans ce sens et, ne connaissant pas les éléments minéraux des sucres impurs, nous avons préféré abandonner ce milieu.

Depuis les travaux de NÆGELI et de PASTEUR on connaît la valeur alimentaire pour les champignons inférieurs des milieux végétaux; ces organismes trouvent dans ces milieux les principes ternaires et quaternaires élaborés par d’autres végétaux qui ont les mêmes besoins nutritifs et qui les ont accumulés dans des organes de réserve. Ces aliments sont donc directement assimilables sans grande dépense d’énergie de la part de l’organisme saprophyte, qui a toutes ses forces à sa disposition pour un développement et une reproduction luxuriante.

Nous nous sommes donc adressés à ces milieux, mais ne pouvant employer des parties de végétal suivant la technique habituelle, nous avons préparé une décoction de carotte et ainsi obtenu un jus de carotte renfermant tous les principes nutritifs de cette plante. La concentration du jus était la suivante : 1 partie de carotte découpée pour 2 parties d’eau. Ainsi fixés sur les aliments de base, c’est-à-dire les éléments hydrocarbonés et azotés, nous avons ajouté aux traces d’éléments minéraux préexistants dans notre décoction du sulfate de thorium à raison de 1 pour 10.000, concentration

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indiquée par P. BaILLY pour obtenir le maximum de développement pour l’Aspergillus fumigatus. Restaient encore à résoudre les questions de la consistance et de la réaction du milieu: sachant par des expériences chimiques et des recherches sur l’organisation que les champignons n’assimilent que des matières nutritives en solution, nous avons préféré la gélatine à la gélose qui donne au milieu une consistance semi-liquide favorisant ainsi la dissociation électrolytique obtenue par l’action du radium sur le sulfate de thorium ; en outre comme protéine elle possède sur la gélose l’avantage suivant : au point isoélectrique en présence d’un sel, elle ne fixe sensiblement ni l’anion, ni le cathion de ce sel; le point isoélectrique est à pH — 4,7, pH optimum de croissance en ce qui concerne l’Aspergillus fumigatus. La préparation de la gélatine isoélectrique était effectuée suivant les théories de SGRENSEN et les expériences de LOEB. Ces travaux se basent sur les principes suivants : |

« Dans une série de vases on fait agir des solutions diversement concentrées d’acide azotique sur 1 gramme d’une poudre de gélatine en suspension dans de l’eau; le pH primitif dont on est parti était de 7. On recueille sur un filtre la poudre ainsi traitée et on la lave à l’eau (eau glacée de manière à éviter des agglutinations de grains); on se débarrasse ainsi de la solution acide retenue dans les interstices des grains. La poudre est ensuite portée dans une solution de nitrate d'argent, puis lavée à l’eau glacée. On la fait fondre à 40° et on ajoute de l’eau jusqu’à obtention d’un volume de 100 cc., une fraction de la solution est distraite alors en vue de la détermination du pH; le reste est exposé à une vive lumière dans des tubes à essai. On constate que seules noircissent, seules donc manifestent une fixation de l’argent, les solutions dont le pH est supérieur à 4,7, point isoélectrique de la gélatine. D’autres sels à cathions facilement décelables donnent quand on les emploie comme réactifs des résultats aussi nets; aux pH supérieurs à 4,7 et à ceux-là seulement les cathions sont fixés, c’est-à-dire qu'il se produit des gélatinates.

Des séries d'épreuves similaires réalisées cette fois avec des sels à anions facilement reconnaissables, tels que le Ferrocyanure de Potassium, montrent tout aussi clairement qu’au-dessous du pH 4,7 c’est l’anion et non plus le cathion du sel qui est fixé par la gélatine. On a donc à faire cette fois à des sels de gélatine.

Au pH = 4,7 par contre ni anion, ni cathion d’aucune sorte ne sont perceptiblement fixés. (Hallion).

Notre milieu a été préparé en tenant compte de ces méthodes.

Nous donnons ci-dessous la formule de ce milieu :

Saccharose pure cristallisée Poulenc... 5 gr. SUITE AE CROP PTT, DE URQETUC 0,01 gf.

Gélatine en poudre isoélectrique ...... 7,5 gt. RUE CATOLER Re ns o seen eee ie 100 cc.

Le milieu a été stérilisé à l’autoclave à 1102 pendant une demi-heure et les cultures sont pratiquées à l’étuve à +279; les techniques employées pour l’irradiation ont été les mêmes que celles

indiquées dans les chapitres précédents. Pour chaque tube destiné à l’irradiation nous avons employé un témoin servant de terme de comparaison. Sur les tubes témoins nous avons pu vérifier le résultat obtenu par P. Bari v; en effet la culture comparée avec une souche ensemencée sur milieu identique, sans thorium cependant, a montré un développement plus luxuriant, tout en gardant les caractères morphologiques d’identité. Nous avons alors pratiqué une irradiation à doses continues de 7,2 millicuries à la température du Laboratoire; l’examen des cultures irradiées a été effectué suivant nos méthodes habituelles : examen microscopique journalier des cultures irradiées, examen macroscopique et microscopique des cultures réensemencées du milieu irradié sur milieu de Sabouraud. Ces expériences nous ont montré que l’action du radium a été à travers ce milieu beaucoup plus faible que celle constatée dans nos recherches antérieures effectuées avec des doses identiques sur autres milieux; ce qui nous a conduit à recommencer les expériences en augmentant les doses de radium.

Dans ces nouveaux essais nous nous sommes adressés à des doses de 10 MC par centimètre carré à une distance de 2 à 3 mm. de la culture; nous avons donc décuplé les quantités de radium, ce qui représente une dose très massive. Les résultats d'examens microscopiques et macroscopiques ne nous ont pas encore donné satisfaction : sur milieu irradié même les appareils reproducteurs ont pris leur évolution normale, toutefois leur nombre est réduit; de nombreuse chlamydospores étaient visibles. L'organisme réensemencé sur d’autres milieux tels que pomme de terre, Raulin etc. a présenté un développement non retardé en comparaison avec des témoins non irradiés. Nous voyons donc que sur ce milieu très nutritif et excitant par la présence du thorium la croissance de l’organisme, la vitalité de celui-ci s’est accrue à un tel point que l’effet modificateur du radium n’a pu que faiblement se manifester. Deux hypothèses peuvent être émises pour l'explication de ces faits : en premier lieu l’action favorable du thorium a vaincu l’action nocive du radium malgré les doses massives employées; d’autre part nous pouvons croire que le thorium, par sa proche parenté avec le radium, a produit auparavant envers le champignon une sorte d’accoutumance, de sorte que l’organisme a été plus tard immunisé en quelque sorte contre l’action modificatrice du radium.