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glycérine. On neutralise avec de la soude au 1/10 jusqu’à légère alcalinité et, comme avec le Liquide de Raulin, on solidifie par la gélatine ou la gélose.

Tous ces liquides ou solides sont placés dans-des tubes ou des vases de culture, bouchés au coton et recouverts d’une capsule d’étain. Une stérilisation à 110° pendant un quart d'heure est toujours suffisante et on évite ainsi d'obtenir des pommes de terre pâteuses et des liquides troubles.

MiLiEux SPÉCIAUX.— Afin d'étudier l’action du chlorure de sodium sur certains microorganismes des fromages, nous avons, après divers essais infructueux, été amené à préparer un milieu de culture à l’aide d’un liquide de Raulin neutre dans lequel nous avons remplacé le saccharose par 3,5 °/, de caséine soluble et 5°/, de sucre de lait (doses correspondant à celles qu’on trouve dans un lait normal). Ce liquide était additionné de sel marin à des doses variant de 0,502/, à 3007, et de 12 à 15°/, de gélatine, les cultures en stries nous permettant de mieux observer le retard apporté au développement des moisissures par le chlorure de sodium.

Nous avons pour ces mêmes essais employé : 1° du fromage blanc frais salé aux mêmes doses et stérilisé à 110° pendant un quart d'heure; 2° du lait stérilisé, après avoir reçu de semblables additions de sel marin; 3° du bouillon stérilisé également salé.

Précédemment, nous avons employé sous le nom de milieu caséine-lactose une simple solution dans l’eau distillée, de 3,5°/, de caséine soluble et de 5°/, de sucre de lait, additionné de 120/, de gélatine.

Examen microscopique.

Il a été fait avec ou sans coloration. Dans ce dernier cas, on peut monter simplement à l’eau la préparation,

ou recourir à la méthode de CrooksHaNk. On dépose une soutte de glycérine sur une lame et une goutte d'alcool sur une lamelle, on immerge les filaments mycéliens dans l'alcool, on renverse la lamelle sur la glycérine et on porte le tout sur une flamme jusqu'à l'apparition de bulles gazeuses.

La coloration peut être obtenue avec les solutions très étenduées de Fuchsine de Ziehl, de Thionine phéniquée de Nicolle, de Bleu de méthylène, de Violet de gentiane, de Safranine ou d’Éosine. Le colorant de choix est le Bleu lactique, dont la conservation est indéfinie et Femploi très facile; il a l'avantage de fournir des préparations transparentes. Pour le préparer, on dissout à froid 0 gr. 15 de Bleu coton (bleu C* B. Poirrier), dans 100 grammes d'acide lactique pur, et on filtre. Une gouttelette placée sur une lame et chauffée, jusqu'à production de légères vapeurs, colore le contenu cellulaire en bleu foncé et parfois la membrane en teinte plus claire. Le colorant triple de GuéGuEx [27}, employé comme le bleu lactique, permet de voir les matières grasses colorées en orangé vif, Famidon en violet, et le glycogène en brun acajou, le tout tranchant vivement sur le fond bleu du protoplasme.

Cultures Cellulaires,

Pour connaître le mode de développement et de fructification du champignon, nous l’avons cultivé en cellule suivant la méthode de Van TiëGHem. Un anneau de verre est fixé, à l’aide d’un peu de vaseline, .sur une lame flambée. On met quelques gouttes d’eau dans ce petit récipient, afin de retarder la dessication de la culture. Puis, à l’aide d’un fil de platine recourbé on dépose à la face inférieure d’une lamelle, préalablement flambée, une large goutte de Liquide de Raulin stérile. On ensemence et on dépose cette lamelle, à la manière d'un couvercle, sur l'anneau dont la paroi supérieure a été recouverte

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d'une niince couche de vaseline, qui assurera l’adhérence de la lamelle. On peut ainsi observer les diverses phases du développement du champignon avec des objectifs forts, à sec. Pour des grossissements plus élevés, on porte la lamelle ensemencée tournée vers le haut, dans l'alcool absolu ce qui empêche les conidies de trop se détacher de leurs fragiles supports ; on monte ensuite à la glycérine ou l’on colore comme pour les cultures en masse.

MENSURATION. — Nous avons dessiné quelques formes de champignons, développées dans nos cultures en gouttes, à l’aide de la chambre claire de Malassez et au grossissement indiqué. Basides, stérigmates et conidies sont mensurés, le # étant pris comme unité.