EXPÉRIENCE PRÉLIMINAIRE N

Des mycéliums sont obtenus en 8 jours sur milieu habituel à la carotte. Les uns sont recueillis sur filtre tarés, séchés et puis pesés. D’autres sont soumis à des contacts avec de l’eau bidistillée, stérile, suivant notre technique habituelle, pendant un temps variable, puis entraînés sur filtres tarés, séchés et pesés.

Les résultats indiqués sur le tableau 53 montrent une diminution de poids.

TABLEAU 38 Durée du lavage Poids des mycéliums à l’eau.

3 Jours 0.2830

0 0.3000 cn:

3 heures 0,2100

24 heures 0.1820

3 Jours 0.2180

Une véritable autolyse se produit donc pendant ce temps de contact avec uniquement l’eau pure. C’est pourquoi nous intitulerons ce chapitre « Influence de la protéolyse préalable ».

Pour être sûr que l'influence du pH ne troublera pas nos résultats nous avons fait pour les mycéliums abandonnés le temps le plus long (3 jours) des expériences à des pH variables.

EXPÉRIENCE N° 24. -— Influence de la protéolyse préalable. Des mycéliums obtenus sur milieu à la carotte sont divi-

sés en 3 groupes en vue de lavages en des temps différents en suivant notre technique habituelle avec de l’eau distillée stérile.

Nous avons employé le milieu habituel (voir page 38). Les solutions étaient ajustées soit à pH=—2,7 soit à pH—4.2.

Les milieux ont été distribués dans des fioles d'ERLENMEYER en suivant les indications suivantes : :

Groupe À. 5 fioles ont subi 4 lavages en 3 heures suivis d’une substitution du liquide précédent ajusté à pH — 2,7. Elles sont alors placées à l’étuve à 27°.

Groupe B. » fioles ont subi 4 lavages en 24 heures. Les deux derniers étant effectués l’un à la suite de l’autre afin d’éliminer toute trace de NH° de protéolyse. Substitution avec le liquide nitrate ajusté à pH—2,7. Les fioles sont alors placées à l’étuve à 27°.

Groupe C. — 10 fioles sont soumises à 6 lavages en 3 jours. Les trois derniers lavages étant effectués l’un après l’autre afin d'éliminer toute trace de NH3 de protéolyse.

Les fioles contenant les mycéliums sont alors divisées en deux. Une partie reçoit comme liquide de substitution la solution nitratée précédente ajustée à pH — 2,7 (CG). L'autre une solution ajustée à pH — 4,2. Toutes sont placées à l’étuve à 27° (C:).

Dans chaque série les fioles sont retirées les 6, 24 et 48° heures. On pèse le mycélium après séchage à l’étuve, on prend le pH, et l’on dose PN/NO* et N/NH5 dans le milieu de culture.

Le titrage des témoins est relevé sur le tableau 39.

TABLEAU 39 Séries pH N/NO*° en mmgr.

A 2,78 34 Bu, 2871 | 34 C 4,27 34 Ce 2,26 33,7

Les chiffres relevés sur le tableau nous montrent des résultats différents de ceux de WARBURG qui d’ailleurs s’était placé dans des conditions différentes.

1° Nous voyons que quel que soit le pH du milieu de substitution le mycélium laissé trois jours au contact de l’eau voit diminuer considérablement son pouvoir d’absorption de l'ion nitrique. La faculté d’assimiler le nitrate va en décroissant au fur et à mesure que le temps de lavage augmente. En 48 heures 25 mmegr. sont fixés dans la série À, 18 dans la série B et 7 seulement dans chacune des séries C.

2° Dans là série À tant que le pH reste dans une zone acide, l’ammoniaque formée passe du mycélium dans le milieu extérieur (près de 5 mmgr. en 24 heures pour un pH au dessous de 4). Mais dès que le milieu devient moins acide, l’ammoniaque formée reste à l’intérieur de la cellule, celle-ci peut effectuer sa synthèse protéique et le mycélium augmente de poids.

Pour un pH voisin de 5 on ne retrouve plus que 1 mimgr. de N/NH, tandis que le mycélium, presque stationnaire de 6 à 24 heures augmente brusquement dépassant 50 ctg.

5 8° Dans la série B le mycélium assimile encore l’acide nitriduel mais moins fortement que dans la série précédente ; ce qui amène une alcalinisation moindre du milieu. Le pH reste constamment en deçà de la limite d'utilisation des ions NH ainsi formés. Cette NH: reste dans le milieu extérieur: plus de 5 milligrammes à la 48: heure; et le mycélium augmente peu de poids:

Voiles substitués après un temps variable de lavage par des milieux N/10 en NO:K et ajustés à deux séries de pH différents, 2,7 et 4,2.