CHAPITRE IV

De la Toxicité des Produits: d'Autolyse et de Lavage des Cultures sur milieu solide

C’est à ConraDi que nous devons la démonsiration de l’action toxique du produit de l’autolyse aseptique des bacilles de SniGa. Get auteur cultive le bacille sur la surface d’une gélose nutritive dont” nous avons donné la composition précédemment. Au bout de 20 heures de séjour à l’étuve, la culture

‘est récoltée et placée dans des tubes à centrifuga- tion, additionnée des deux tiers de son volume d’eau physiologique. Gette émulsion épaisse est laissée au repos de 24 à 48 heures (au maximum) à 37°5, puis décantée, Le liquide obtenu est dilué dans 5 fois son volume d’eau physiologique, puis filtré sur bougie Berkefeld. Conrapr évapore ensuite ce filtrat à 35° dans le vide jusqu'à réduction au 1/5o° de son volume. L'auteur signale qu'une aulolyse de plu:

?, 4 Patay

on

de 48 heures lui a toujours fourni un filtrai moins toxique que celui qu'il obtient avec la technique sus-indiquée. L'addition de chloroforme pour tuer les bacilles avant autolyse ne lui parait pas avantageuse non plus. NeissEr et SuiGA confirment celte découverte et disent obtenir un produit toxique en émulsionnant une culture sur gélose dans 10 ce. d’eau physiologique, chauffée à 60° pendant une heure, en laissant cette émulsion 48 heures à 37° et en Ja filtrant sur bougie Reichel. /

La même année (1903), VaiLLARD et DoPprTer obtiennent par décantation un liquide toxique eu émulsionnant dans l’eau des cultures sur gélose tuées par le chloroforme ou le:chauffage à 55°, et en les soumettant à l’autolyse à 37° durant 20, 30 où 4o jours.

En 1905, LUDKE, congelant des bacilles de Shiga au moyen d'air liquide, les triture dans un mortier, les émulsionne dans l'eau physiologique et filtre «rt bougie cette émulsion (Procédé de MACFADYEN et RowLanb). Le filtrat est très toxique pour le lapin.

Mais en 1906, KraAUS et DoErR déclarent : «, Une autolyse n’est pas nécessaire pour obtenir la toxine du corps des bactéries », s'appuyant sur ce fait qu'én agitant la récolte d’une culture sur gélose dans l’eau physiologique durant quelques minutes, puis en filtrant sur filtre Reichel, ils obtiennent un liquide toxique. Nous discuterons ce point de vue dans le chapitre relatif à la nature de la toxine dysentérique. |

DEEE.

BESREDKA, la même année, émulsionne dans l'eau physiologique une culture sur gélose de 18 heures. Cette émulsion est chauffée à 60° durant une heure, puis desséchée dans le vide. o gr. 4 de corps de microbes sont alors triturés avec o gr. 15 de CI Na, puis Où ajoute 20 cc. d’eau. Le tout est ensuite centrifugé : le liquide limpide est doué de toxicité. FLEXNER et SWEET emploient le procédé de NEIssER et SHiGA. KOLLE, HELLER et bE MESTrRAL décrivent: sous le nom « d’eau de lavage » un liquide toxique obtenu par le procédé de Kraus et Dorrr. C'est également ce que PANE et LoTrr dénomment « agressine ». SELTER, en 1910, a essayé. les différentes techniques ci-dessus et déclare qu’il a -obtenu les meilleurs résultats en chauffant à 6o° durant deux heures une émulsion d’une culture sur gélose qu'il filtre après ce chauffage. C'est ce qu'il nomme « extrait 60° ». OLrrsky et KLIGLER utilisent le procédé de NEISSER et SHIGA.

Hirszrezv dose sur le lapin des « extraits » obtenus de façons diverses

1°) Extraits non chauffés : filtrés, dose mortelle, o;1 ; centrifugés, dose mortelle, 0,05.

2°) Extraits chauffés, .filtrés, dose mortelle, 0,5.

Le liquide obtenu en centrifugeant une émulsion : de bacilles non chauffés serait donc le plus toxique, mais HirszFeLp ne dit pas s'il est rigoureusement privé de bacilles.

NeureLp, à la Société des Nations, mentionne les bons résultats qu'il a obtenus par lautolyse et le la-

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vage, soit en eau physiologique, soit en eau distillée. Enfin, Shiga, dans son deuxième rapport à la Société des Nations, compare les différents procédés. Pour cela, il prépare deux émulsions de cultures de 4 heures sur gélose, l’une en eau physiologique et l’autre en eau distillée, à raison de 2 mgr. de bacilles pour 1 ce. d’eau.

Chaque émulsion est divisée en deux lots :

Il chauffe l’un à 60° durant une heure ; il additionne l’autre de chloroforme pour tuer les germes.

Les quatre espèces de suspensions sont laissées à la température du laboratoire durant 5 jours, puis centrifugées. Les liquides obtenus sont encore filtrés sur bougies Berkefeld avant d’être inoculés au lapin.

Les résultats sont les suivants :

1°) Filtrat de suspension saline chlorofor-

race dose borlelle ser LRO ER NES CNES 0,02 2°) Filtrat de suspension en eau distillée chlo-

rolomnée dose Dioriele ACER 0,03 3°) Filtrat de suspension saline chauffée,

oser mortelle terres er CESR RARE Se 0,2 4°) Hiltrat de suspension en eau distillée

chauftée, dosé- mortelle rc er MARRON

De plus, SHiGA compare le «produit de lavage » des bactéries vivantes (procédé de KRAUS et DŒRR) au « produit d’autolyse » de 7 jours (Procédé de Coxrabr, NeissER et SuiGa). Le premier ne tue pas à la dose de o cc.r intraveineuse, le second tue à la dose de 0,025.

Devons-nous conclure avec Shiga qu'il faut tuer les germes par le chloroforme et préférer la lente autolyse au lavage rapide? Les avis nous semblent trop partagés pour cela et il nous semble qu'un facteur primordial a été trop négligé. En effet, nous avons, en lisant toute la bibliographie, été frappés par ce fait que les auteurs qui ont recherché le meilleur milieu de culture pour l'obtention d’un filtrat de bouillon toxique ont tous observé, Conrapr excepté, le silence Le plus complet sur le rôle du milieu nutritif lorsqu'il s’est agi des cultures sur gélose, qu’elles soient employées en totalité ou pour autolyse.

Le rôle du milieu de culture doit pourtant être aussi grand ici que là. Nous en donnerons la preuve par une seule expérience. Sa netteté toute mathmatique suffira, au moins, à justifier de nouvelles recherches à ce sujet.

Nous avons fait trois bouillons :

1°) Un bouillon Martin ;

2°) Une décoction de viande de veau avec 1 % de peptone Chapoteaut ; À

3° Une décoction de viande de veau avec 2,5 % de peptone Chapoteaut, 0,5 % de phosphate monopotassique et 0,2 % de citrate de soude.

Ces trois milieux furent alcalinisés, chauffés à 120°, puis ajustés au PH uniforme de 8,8. Chacun d'eux fut ensuite additionné de 3 % de gélose, porté à l’ébuilition pour dissoudre celle-ci, réparti en boites de Roux et stérilisé à 110° durant 30 minutes.

La surface de ces trois milieux fut ensemencée d'une façon identique. Les trois cultures de 24 heures furent émulsionnées dans trois ballons contenant chacun autant d’eau distillée qu'il y avait eu de bouillon gélosé à être utilisé (ceci afin de com-parer le rendement « commercial », si l'on peut dire, d’une quantité donnée de bouillon liquide et sa transformation en gélose nutritive).

Les trois émulsions, additionnées de chloroforme, furent laissées à 30° durant 2 jours, puis filtrées sur bougies Chamberland F. | Voici les résultats des inoculations Gélose au bouillon Martin, dose mortelle par kgr 0:20!

Gélose décoction de veau peptonée à 10 0/00, dose mortelle par kgr : 0,04.

Gélose décoction de veau pept. à 25 0/00 + phosphate : 0,025. |

Le temps de culture à aussi une influence : Une culture de 48 heures sur la gélose à la décoction de veau peplonée à 25 0/00 et additionnée de phosphate a tué à la dose de : o,or.

L'alcalinité doit également entrer en ligne de compte : Un bouillon analogue ajusté au PH 5,5 ayant addition de gélose donne une culture de 24 h. qui, autolysée, ne tue pas à la dose de : o cc. 05.

(Voir protocole n° VD

CONCLUSIONS

Nous venons de voir la raison pour laquelle nous avons voulu, contrairement à l’ordre chronologique, étudier d’abord les cultures en, milieu liquide. Nos dernières expériences s’inspirent en effet, fort heureusement, des résultats acquis par l'étude du bouillon. La culture sur gélose étant essentiellement aérobie et donnant une récolte plus abondante et plus toxique dans un délai plus court que la culture en bouillon, il est évident que les bacilles devront être récoltés au bout de peu de: jours. Le temps exact reste à déterminer, ainsi que le temps et le procédé d’autolyse. Il est toutefois démontré qu’à l’aide de cultures sur milieu solide, nous pouvons obtenir des produits aussi toxiques que les filtrats de culture en milieu liquide, en un temps bien plus court.

MA Sa,