DRE

locale durant 8 jours. Un lapin ayant reçu 500 millions de bacilles + o cc. 5 de sérum absorbé, puis, 10 jours après, 1000 millions de bacilles tués sans sérum, ne présente pas de réaction. 14 jours après, il est éprouvé avec 4 doses mortelles de bacilles vivants el ne présente qu’un peu de parésie. De plus, son sérum se montre antitoxique.

Relevons, à ce sujet, que c’est la première fois que

nous trouvons Ja vérification d'une vaccination par la recherche du pouvoir antitoxique d’un sérum de l'individu vaéciné. Cette méthode est fort inléressante pour vérifier l’immunisation de l’homme et nous aurons l’occasion de la revoir.

. En 1918, BŒHNCKkE, HAMBURGER et SCHELENZ publient les essais de leur vaccin, le fameux « Dysbacta » qui, dans la bibliographie allemande, souleva bientôt une poussière de. communications dans laquelle il est fort difficile de voir clair. Le « Dysbacta » est un mélange de bacilles de SxiGa, de Flexner et de Hiss, tués par un séjour de 30 minutes à 37° dans l’eau phéniquée à 1 %, mélange additionné de toxine et d’antitoxine. Près de 100.000 personnes sont injectées 2 ou 3 fois, à 6 jours d'intervalle. Les injections sont suivies de rougeur locale, de tuméfaction et d’endolorissement du bras. La température a atteint 38° dans 5 % des cas. La présence d’agglutinines dans le sérum est démontrée, mais les auteurs reconnaissent eux-mêmes que cela a peu de: valeur. [| manque au Dysbacta » une base expérimentale solide.

RD POELE re

b) DES vACGINS RENDUS ATOXIQUES PAR DES PROCÉDÉS CHIMIQUES OÙ PHYSIQUES ;

Ce sont deux auteurs anglais, RUFFER et WirzMo- RE qui, en 1908, ont, les premiers, cherché à neutraliser la toxicité des vaccins antidysentériques par un procédé chimique. |

Se basant sur le fait que les toxines bactériennes, lorsqu'elles sont digérées artificiellement par de la pepsine et de l’acide chlorhydrique, perdent leur toxicité en quelques heures, ils cherchent avec quelle forme de toxine et au bout de combien de temps de digestion la toxicité est abolie sans que le pouvoir antigèné soit altéré.

Rurrer et WiLLmore préfèrent une émulsion de bacilles chauffée une heure à 57° à cause de sa toxicité plus stable. Une dose mortelle de cette émulsion, digérée pendant 12 heures puis alcalinisée, ne produit aucun symptôme.

Ces deux auteurs notent que l’émulsion primitive est précipitable par le sérum spécifique et que l’émulsion digérée, quoique privée de son pouvoir toxique, conserve la propriété d'être clarifiée par le sérum. Ce fait est peut-être à rapprocher des phénomènes que nous aurons à examiner plus tard, au chapitre de la floculation.

Dans le même travail; nous lisons plus loin : « Une dose minima mortelle, rendue sans danger par la digestion, confère néanmoins de nouvelles proprié-

tés au sérum d’un animal auquel on l’injecte. Il devient agglutinant et antitoxique, et l'animal résiste à l’inoculation de 5 à ro doses mortelles. Les injections répétées ne donnant aucune réaction confèrent une très forte immunité (20 doses mortelles) qui apparaît très rapidement (6 jours) ».

Huit ans plus tard, DEA et ADAMSON, pour Im9difier les propriétés toxiques sans atténuer le pouvoir antigène, eurent l’idée d'employer l'Eusol (1) que des auteurs anglais utilisaient alors pour combattre des toxémies ou des septicémies.

Dès les premiers essais, les auteurs se rendent compte que l’Eusol n’est pas bactéricide in vitro et sont obligés de tuer préalablement les bacilles par l’action de la chaleur. La préparation du vaccin de DEAN et Apamson devient donc la suivante : « Préparer une émulsion de 200 millions de bacilles par C.C., chauffer une heure à 58, 60°. Mélanger avec une quantité égale d’une solution fraîchement préparée d’Eusol à 1/500 dans l’eau physiologique. Laisser 24 heures à la température de la salle. Injecter sous la peau de l’homme une première dose de 1 cc., une deuxième, 10 jours après, de r cc. d’une émulsion contenant 200 millions de bacilles par ce. traitée de la même façon et enfin une troisième dose de 200 millions ou plus, stérilisée par !la chaleur mais non traitée par l'Eusol ».

(x) L’Eusel est la solution aqueuse du produit obtenu en mélangeant intimement du chlorure de chaux finement broyé et de l’acide borique en poudre.

SO eee

Les conclusions sont les suivantes : « 1° la toxicité d'une émulsion de bacilles de Shiga peut être énormément réduite ou même complètement détruite par l’action d’une solution diluée d'Eusol ou d'un peroxyde d'hydrogène. 2° L’injection d'une petite quantité de cette émulsion, rendue atoxique, est suivie de la production d’un degré d’immunisation satisfaisant (5 à ro doses mortelles chez le lapin). En 1918, RANQUE et SENEZ traitent des émulsions de bacilles de SGA, par l’iode qui stérilise les bacilles et atténue leur toxicité, et neutralisent ensuite l’iode par l’hyposulfite de soude.

Des animaux sensibles supportent des doses massives de ce vaccin et l'injection sous la peau ne provoque chez l’homme que de faibles réactions locales. Il est regrettable que l'épreuve d’immunilé n'ait pu être faite.

En 1919, Frouix et Moussarr publient une note sur « l’action des sels de terres rares sur les bacilles dysentériques » dans laquelle nous lisons que le sulfate de lanthane, légèrement bactéricide, est antitoxique vis-à-vis du bacille de Shiga. En ne tenant pas compte des travaux de Dirrnorn et LOEWENTHAL pour la raison énoncée dans le paragraphe précédent, nous arrivons au travail de JôTTEN. « Sur l’emploi de bacilles dissous par l'antiformine pour l'obtention d’un sérum actif agelutinant ». Nous y voyons qu’une solution à 0,05 % d’antiformine stérilise complètement une culture de bacilles de Shiga en 10 secondes ; qu’une émulsion, tuant, par voie veineuse, au trentième d'anse, le lapin en 24 heu-

res, est rendue atoxique pour cet animal par addition d’un volume égal d’une solution d’antiformine à 4%. Le mélange est neutralisé par l'acide sulfurique et déchloruré par le sulfite de soude avant injection. Enfin, nous y trouvons un tableau compatif montrant que c'est l’émulsion qui a subi l’action d'une solution à 2 % durant 30 secondes qui confère au sérum @e fapin le plus haut pouvoir agglutinant (1/16.000). Il est regrettable que ce travail n’ait pas été poursuivi relativement au pouvoir antitoxique du sérum et à la possibilité d'extension du procédé à la vaccination.

En 1922, CoPPINGER et ROBERTSON, se basant sur les expériences de THomson démontrant que si on dissout des bacilles dans de la soude à 10 % ou de l’antiformine on obtient, en neutralisant par un acide, un précipité qui a perdu tout pouvoir toxique mais a gardé ses propriétés antigènes, cherchent à obtenir ce précipité avec une émulsion des bacilles de Shiga. Les deux anglais arrivent à ce but par un moyen qui ne manque pas d’ingéniosité. Ils choisissent l’ammoniaque concentré comme liquide alcalin propre à attaquer les bacilles, puis après r2 heures de séjour du mélange à 37° ils effectuent la neutralisätion au moyen d'acide sulfurique à 20 %. Cet acide, se combinant avec l’ammoniaque, donne du sulfate d’ammoniaque et lorsque la neutralisation est faite, ce dernier produit un gros précipité. L'inoculation de ce précipité à des lapins montra que la toxicité était sensiblement réduite, alors que

le pouvoir antigène était conservé. [2

Des doses de 0,5-1 et 5 cc. injectées sous la peau, à 7 jours d'intervalle, immunisent le lapin contre 10 à 20 doses mortelles. Toutefois la dose de o ce. 25 du vaccin injecté dans la veine tue le lapin. La toxicité est donc loin d’être totalement abolie.

En 1925, Vioze, étudiant l’action du chlorure d’or, constate que l’action d’une solution à 1 % rend, au bout d’une heure de contact, une culture de bacilles de Shiga absolument inoffensive pour le lapin.

P. Duran», à la même époque, compare trois formes de vaccins antidysentériques

Des bacilles chauffés 30 minutes à 58° tuent ia souris à la dose de 100 millions de bacilles injectés dans le péritoïne. d

Des bacilles stérilisés par l’éther tuent, à la même dose. Il faut, par contre, 900 millions de bacilles tués par 0,5 % de formol pour obtenir.le même résultat.

Duran» vaccine des souris avec les 3 vaccins Gil neutralise le formol du troisième au moyen d’ammoniaque étendu (indicatéur phénolsulphophtaléine). Les doses nécessaires pour protéger la souris se sont montrées à peu près égales pour les deux pr-miers, d'un tiers plus fortes pour le vaccin formolé.

L'injection de 1 milliard 1/2 de bacilles de Shiga formolés n’a pas donné de réaction notable chez l’homme.

Mais en 1924, avaient été publiés les remarquables travaux de Ramon sur l’anatoxine diphtérique, dont les résultats si intéressants eurent bien vite

leur répercussion dans le domaine qui nous intéresse.

En France, LESBRE et VERDEAU additionnant un filtrat d’une culture de trois semaines en bouillon Martin de 0,3 % de formol du commerce, puis en ‘e chauffant à 40° durant 0 jours, constatent que cette « anatoxine » est tolérée par des lapins aux doses de 2 cc. injectées sous la peau à: trois reprises et à 5 jours d'intervalle. Trois ingestions de 8 cc. ont, par contre, déterminé,un amaigrissement mar: qué et une paralysie transitoire. Cette anatoxine ne paraît pas stable aux deux auteurs car une nouvelle addition de formol ou l'addition de 2 % de lessive de soude augmentent sa toxicité. Ils constatent que la proportion de 0,6 % de formol mise d'emblée donne un produit atoxique stable. Des lapins vaccinés avec cette anatoxine ne présentent aucun trouble et résistent à une dose mortelle. De nouveaux essais ont montré à LESBRE que deux inoculations de son anatoxine, pratiquées à 7 jours d’intervalle, suffisent pour protéger l’animal ; et que, par contre, une seule injection, même supérieure aux deux échelonnées, ne donne qu'une ébauche d’immunisation.

Ses esssais d’immunisation par la voie digestive, faits sur le lapin sont démonstratifs à ce sujet.

GLoTov, à Moscou, utilise un bouillon de PH 8,4 avec peptone Chapoteaut, qu'il filtre sur papier au bout de 21 jours de culture. Il ajoute 4 % de formol et le chauffe à 4o° durant 25 à 35 jours. Il a également employé des «anatoxines totales », bouillon non filtré formolé.

Grâce à ces anatoxines il vaccine des souris et des lapins et montre que le sérum de ces derniers a des propriétés antitoxiques. Ayant essayé les diverses voies d’inoculation, Glotov conclut que la vaccination par voie veineuse ou sous-cutanée donne une immunité plus forte que la voie. intradermique ou intestinale.

Enfin, l’auteur s’est injecté o cc. 5 d’anatoxine et n’observe qu'une légère rougeur et un peu de pru- T1

Au Brésil, ARLNDO DE Assis, faisant une étu:le

analogue, conclut :

1° Le formol atténue la toxicité pour le lapin des bouillons de culture du bacille de Shiga filtrés sur bougie.

2° Cette atténuation est Plus rapide et plus grande à 37° qu'à la glacière.

3° Il a été possible de réduire 100 fois la toxicité d’une toxine de Shiga en bouillon avec 0,25 % de formol et 3 jours à 37°.

4° L’atténuation de la toxine n'a jamais été complète ni avec la concentration élevée de formol (r %) ni avec le formol et la température de 37°. On ne peut donc la désigner sous le nom d’anatoxine.

5° La toxine dysentérique atténuée par le formol a permis d'obtenir en 20 jours l’immunisation contre l’inoculation expérimentale de bacilles de Shiga vivants et virulents. |

Presau’en même temps J. Dumas, G. Ramox et S. BiLAL adressent à l’Académie des Sciences un mé-

moire donnant les résultats d'une longue série de travaux. Nous y trouvons des fails précis :

Un filtrat de culture en bouillon de 15 jours, tuant par voie veineuse à 0,0 par kgr. est additionné de 0,4 % de formol du commerce et soumis durant 4o jours à la température de 37°, 10 vec. de celle anatoxine, injectés dans la veine du lapin, n'occasionnent aucun trouble.

L'injection sous-cutanée de o cc. 5, puis, 8 Jours après, de 1 cc. de ce produit, immunise le lapin contre l’inoculation, 16 jours plus tard, de 8 doses mortelles de filtrat de bouillon injectées dans la veine ou de 6 doses mortelles de culture en bouillon de 24 heures sous la peau.

Un exposé très complet de ces travaux doit paraitre prochainement dans les annales de l'Institut Pasteur. Nous nous permettons de le résumer ici Le produit toxique utilisé est un filtrat de culture en bouillon-peptone Chapoteaut alcalinisé, laissée 15 jours à 37°. Ce filtrat est mortel pour le lapin à la dose de o cc, o2 par kgr. lorsqu'il est injecté dans la

veine.

Ce liquide toxique est additionné d’une solution de formaldéhyde à 4o % ; à raison de 6 cc. par litre, puis placé à l’étuve à 37°. Sous l’action combinée du formol, de la température et du temps, le pouvoir toxique de ce liquide s’atténue. Au bout de 15 jours il est nécessaire d’en injecter 5 ce. dans la veine de l'oreille pour entraîner la mort d’un lapin.

Après un mois, l'animal qui reçoit ro ec. de cette

LOG ee

anatoxine dysentérique reste légèrément prostré durant 24 heures, perd un peu de son poids, puis reprend rapidement son poids et son allure habituels.

La dose optimum de formol est 6 ce. pour x litre. Des quantités inférieures : 2, 3 ou 4 cc. sont insuffisantes puisque la toxine ainsi traitée, au bout d’un mois de séjour à 37°, est mortelle pour le lapin aux doses intraveineuses de 5 à 6 cc. | À

Si, par contre, des doses plus fortes (7 à 8 cc.\ sont ajoutées, le produit obtenu a bien perdu sa toxicité, mais ses propriétés antigènes sont également diminuées. Les ‘auteurs n’ont jamais observé l'instabilité signalée par LESBRE et VERDEAU.

Des lapins reçoivent sous la peau, à 8 jours d’intervalle, 0,5 et 1 cc. de cette anatoxine. Aucune lé: sion locale ; léger amaigrissement. Deux semaines après, les animaux supportent 4, 6 et même 8 doses mortelles de toxiques dysentérique ou l'injection sous cutanée de 3 à 4 doses mortelles d’une culture de 24 heures en bouillon.

Les propriétés antigènes de l'anatoxine sont altérées par un chauffage de 45 minutes à 65°, se conduisant en cela comme les autres vaccins étudiés préalablement. :

Des essais de vaccination humaine ont été pratiquées sur sept volontaires.

Une injection de 0,5 d’anatoxine dysentérique a d'abord été poussée sous la peau de la face externe de la cuisse, déterminant presque instantanément

une très légère douleur qui dure seulement quelques secondes. Tout redevient absolument normal jusqu’au troisième jour où une légère induration apparaît au point d'injection, cette induration est douloureuse à la pression, elle dure de 2 à 6 jours suivant les individus, mais n’occasionne aucune perturbation fonctionnelle. Il n’y a jamais de réaction générale. [l n'y à pas de fièvre, pas d’albuminurie. Huit jours après la première injection, une deuxième de r cc. a été pratiquée ; certains sujets ont réagi comme la première fois, d’autres qui n'avaient rien eu ont réagi localement et enfin d’autres n’ont eu aucune réaction. Les sérums des sujets vaccinés, recueillis trois semaines après la vaccination possèdent des propriétés antitoxiques manifestes.

o cc. 2 de-ces sérums neutralisent in vitro une. deux, trois et même quatre doses mortelles de 1oxines.

Les résultats obtenus élant très encourageants, la vaccination à laide de l’anatoxine dysentérique de Dumas, RAMON et BILAL a été essayée sur une plus grande échelle.

31 officiers-élèves du croiseur « Jeanne d’Are » se sont soumis bénévolement à cette vaccination. Celle-ci étant trop récente, nous ne pouvons qu’en tirer les éonelusions au point de vue'réaction. Le médecin principal Hamer, arbitre impartial, écrit : ones En somme, l'injection d'analoxine dysentérique n'a déterminé. chez les 4r officiers vaccinés que des réactions locales légères et aucune réaction d’or-

7 Patay

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dre général, les phénomènes sont incomparablement moins prononcés que ceux déterminés par l’injection de vaccin typhoïdique. L’injection d’anatoxine dysentérique n’a provoqué aucune indisponibilité de service, même partielle. »

Enfin, tout récemment, nous avons eu sous les yeux le travail de KrAuUs, Awokt el Kovacs : « Sur l’immunisation active avec des filtrats atoxiques. » Ces auteurs pensent que dans la formation des poisons il y à un stade d’atoxicité pendant lequel le produit, inachevé comme toxine, serait cependant bon antigène. Ils essaient d'appuyer leur théorie sur 6e fait que des doses répétées de 1 à 5 cc. d'une culture en bouillon de deux jours, filtrée sur papier, injectées dans la veine de l'oreille de lapins, les immunisent contre deux à trois doses mortelles de toxine.

Nous pensons que KrAUS et ses collaborateurs n'ont point fait la démonstration de ce qu'ils avancent parce que :

1°) Leur filtrat de culture en bouillon n'est pas atoxique il est légèrement tfoxique, puisque avec une dose vaccinante (3 cc.) ils obtiennent une intoxication nelte (paralysie) ;

2°) Une dose submortelle d’un filtrat toxique immunise toujours, qu’il soit prélevé au début, au moment de la toxicité maximum ou après, la dose im-

munisante variant avec la toxicité. Kraus lui-même

le montre, car s’il lui faut 1 et 5 cc. d’une culture de 48 heures pour immuniser, une seule injection de

5 ce. d’une culture de 4 jours donne les mêmes résultats.

Nous-même avons immunisé contre 4 doses mortelles des lapins de 1.500 gr. avec o cc.o2 et o cc. 033 d’un filtrat de culture de 15 jours tuant à o cc. 05.

Ces faits prouvent seulement qu’il y a un parallélisme certain entre la toxicité et le pouvoir antigène. C'est d’ailleurs pour cette Yaison que nous avons classé la vaccination dans les « applications de la toxicité du bacille de Shiga ».

CONCLUSIONS

. Les vaccins stérilisés par l’action de la chaleur ou l'addition d’un antiseptique ne sont, à vrai dire, que des produits toxiques et, de ce fait, sont impropres à la vaccination de l’homme. |

Les vaccins sensibilisés se sont montrés, dans certains cas, sensiblement moins toxiques, mais il n'y avait pas de raison pour que l’antitoxine laisse intact le pouvoir antigène ; aussi les expérimentateurs furent-ils enfermés dans ce dilemne : Vacciner avec un produit neutre à tous points de vue ou injecter un vaccin d'autant plus toxique qu'il est bon antigène. | fa

Nous sommes donc amenés à porter toute notre attention sur les vaccins rendus atoxiques par des moyens physiques et chimiques. Les procédés de Rurrer et WiLLuore et de Ramon semblent avoir

HN OO0p——

donné les résultats expérimentaux les plus démonstratifs. Le premier présente le grand défaut de n'avoir reçu aucune confirmation depuis 1908.

Bien au contraire, | « anatoxine » a été simultanément essayée en trois points du globe fort éloignés les uns des autres, et les résultats ont été concordants. Dire que son étude est parfaitement au point serait exagéré. Une « anatoxine totale » faite en soumettant une émulsion de culture sur gélose à l’action du formol, de la chaleur et du temps (ces deux derniers facteurs ayant été négligés par P. Durand), nous donnerait peut-être des résultats encore meilleurs.

Nous pensons que la culture sur gélose âgée de 24 à 48 heures donnerait la meilleure anatoxine car cest cette culture qui, émulsionnée, donne la meilleure toxine. Procédant par étapes nous essayons actuellement la transformation en anatoxine d’un produit d’autolyse de 24 heures d’une culture sur gélose de 48 heures. Le liquide limpide obtenu, mortel pour le lapin, à la dose de o cc. or par kgr., transformé en. anatoxine, a sur l’anatoxine-bouillon l'avantage d’être presque exempt de produits étrangers. L’incorporation des vaccins dans un véhicule huileux paraît également d'un grand intérêt et pourrait peut-être s'appliquer fort heureusement à la vaccination par anatoxine totale (x).

(1) Nous entendons par là des corps de microbes toxiques soumis à l'action combinée du formol, de la chaleur et du temps puis desséchés el émulsionnés dans le véhicule huileux.

Nous ne voulons pas terminer le chapitre des vaccinations sans dire quelques mots de la recherche des sujets réceptifs à la dysenterie à bacille de Shiga.

Brokmann, en 1923, pratique dans ce but une injection intra-dermique de o cc. 1 d’une dilution à 3 % d’une toxine tuant le lapin à la dose de o cc. 1 par kgr.

Il constate quelques heures après une tache rouge vif qui 24 heures après est remplacée par un œdème rouge vif qui devient bleuâtre par la suite. Dans certains cas, il y a une petite hémorragie au bout de 48 heures et 8 jours plus tard une escarre insignifiante.

Les sujets à réaction négative ne présenteut qu'une petite rougeur qui disparaît en 48 heures.

La réaction est positive dans 8o % des cas.

En 1925, Brokman et Przesmycki publient de:

nouveaux essais. Ils indiquent que la réaction est due à l'élément toxique et ne se présente pas si on chauffe où si on neutralise la toxine par l'antitoxine. Les individus qui ont reçu du sérum antidysentérique ne réagissent pas. Les nouveaux-nés réagissent en moins grand nombre que les enfants âgés de quelques mois. Puis, à partir de la première année, le pourcentage des réactions diminue. Enfin, le sérum des individus qui ne réagissent pas aurait des propriétés antitoxiques.

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