CHAPITRE IV

Techniques

Avant de passer à l’exposé des observations et des examens qui s’y rapportent, nous donnerons un bref aperçu des techniques que nous avons mises en jeu pour l'examen des exsudats et des transsudats que nous avons étudiés.

Outre l’examen cvtologique après centrifugation qui fut effectué sur chaque liquide, nous avons d’abord pratiqué la réaction de Rivalla, sous sa forme classique d’une part, avec les modifications apportées par Daumas et Lautier d’autre part.

Réaction de Rivalta classique. — Dans un verre à expérience contenant 50 ©. c. d’eau ordinaire, on verse une goutte d'une solution d'acide acétique cristallisable à 50 %. On agite et on laisse tomber dans le réactif ainsi préparé, le plus près possible de la surface de l’eau acidulée, une goutte du liquide examiné. Nous avons pratiqué cette réaction en examinant le liquide par transparence à la lumière du jour, devant une fenêtre. Dans ces conditions, la réaction était considérée comme positive lorsque, dans le liquide, apparaissalient des stries blanc bleuâtres, opalines, lactescentes, descendant au fond du verre en décrivant des spirales analogues à de la fumée de cigarette. Lorsqu'on observait des stries incolores, analogues à celles que produit une solution fortement sucrée, versée dans de l’eau, nous considérions la réaction comme négative.

Réaction de Rivalta modifiée suivant la technique de Daumas et Lautier. — Le verre à expérience, rempli d’eau distillée, est placé dans une chambre noire constituée par une caisse carrée de 40 cm. de côté, dont les parois ont été tapissées de papier noir. Cette caisse, ouverte sur sa face verticale, du côté de l’observateur, est également perforée sur sa face gauche, de façon à laisser passer un rayon lumineux émanant d’une lampe électrique de 50 bougies, enfermée dans un cône métallique réflecteur. Ces rayons lumineux viennent traverser le verre à expérience rempli d’eau distillée. En laissant tomber une goutte du liquide examiné dans le verre, on observe l’apparition de stries analogues à celles décrites lorsque la réaction de Rivalta classique est positive. On dilue alors le liquide au 1/15°, au 1/20°, au 1/50°, au 1/100°, au 1/150°, etc., et on laisse successivement tomber une goutte de ces dilutions dans l’eau distillée du verre. Les stries deviennent de moins en moins nettes et finissent par ne plus se produire, lorsqu'on atteint une certaine dilution. C’est ce qu’on appelle l'extinction de la réaction de Rivalta à l’eau distillée. On remplace alors l’eau distillée par la solution acétique et on laisse tomber une goutte du liquide dilué dans ce liquide acidulé. Les auteurs considèrent comme exsudats les liquides donnant la réaction de Rivalta dans ces conditions et comme transsudats ceux pour lesquels la réaction reste négative.

Nous avons ensuite essayé d'appliquer le principe de la réaction de Moritz, en modifiant légèrement la technique préconisée par cet auteur. À cet effet nous mesurions dans un petit vase à précipitation cinq centimètres cubes du liquide examiné et à l’aide d’une burette graduée, préalablement garnie d'acide acétique cristallisable ; nous laissions tomber goutte à goutte cet acide en observant les modifications qui survenaient dans le liquide. Nous obtenions d’abord la formation d'un louche ou d’un précipité qui disparaissait ensuite plus ou moins complètement. Nous notions les résultats obtenus avec les différents liquides.

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Dôsage de l’albumine de Patein. — On mesure, dans un vase à précipitation, trente centimètres cubes du liquide à examiner, préalablement centrifugé. Par addition d’eau distillée, le volume du liquide est ramené à 100 €. c. On ajoute alors au liquide de l’acide acétique pur cristallisable préalablement dédoublé, jusqu’à réaction acide au tournesol. La quantité d'acide nécessaire est variable, mais V à X gouttes suffisent habituellement. Il se produit aussitôt un trouble plus ou moins marqué. On laisse déposer le tout pendant 24 heures. Au bout de ce laps de temps, le précipité est rassemblé et présente des aspects variables suivant les cas (comme nous le verrons plus loin) : tantôt on à un précipité complètement rassemblé au fond du vase et présentant un aspect blanchâtre, pulvérulent, tantôt on à un amas floconneux surnageant même et venant adhérer aux parois du vase. On filtre alors le liquide sur un filtre préalablement desséché et taré dans un pèse-filtre. Après filtration, on vérifie que le filtrat ne donne plus de trouble par addition d'acide acétique (auquel cas le liquide serait à nouveau filtré). Le précipité est alors lavé à l’eau distillée, puis à l'alcool et à l’éther ; il est ensuite desséché sur le filtre, dans une étuve à 100°, puis dans un exsiccateur à acide sulfurique. Il est enfin pesé dans le pèse-filtre. Du poids obtenu il est aisé d’obtenir le poids par litre d’albumine de Patein contenue dans un exsudat ou transsudat.

Pour éviter les causes d'erreur inhérentes à cette méthode, nous avons, pour chaque liquide examiné, pratiqué deux déterminations différentes.

Chacun des liquides fut également soumis à la réaction de Gangi et à celle du collargol, dont nous avons déjà eu l’occasion de décrire les techniques, en même temps que nous éludiions leur origine. Nous ne reviendrons donc pas sur ce sujet, mais nous dirons quelques mots sur une réaction nouvelle préconisée par Corsonello, réaction que nous avons essayée, sans succès d’ailleurs, dans tous les cas qui se présentèrent.

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Réaction de Corsonello. — Elle consiste simplement à mettre en présence du liquide à examiner quelques gouttes du sang du malade, ou même du sang d’un autre sujet (le sang étant prélevé au doigt par simple piqûre). Les exsudats provoqueraient l’hémolyse qui, par contre n'apparaîtrait pas, le sang étant mis en présence d’un transsudat. Hâtonsnous d'ajouter que, d’après Corsonello, cette réaction ne dépendrait pas tant des protéines que de la teneur en lipoïdes du liquide et de l’hypotonicité habituelle des exsudats par rapport au sang.

Etudions maintenant les techniques suivies pour la

sérine :

recherche du rapport ——— et conséquemment de la globuline

pression osmotique. Comme nous l'avons déjà indiqué, le taux des diverses albumines fut obtenu par détermination du taux d’azote correspondant.

Pour chaque sérosité, trois déterminations s’imposaient :

1° Détermination de l’azote total du liquide : N°, le chiffre obtenu correspondant à l’azote des diverses albumines (sérine et globuline) et à l’azote non protéique.

2° Détermination de l’azote contenu dans le liquide après précipitation de la globuline : N°, le chiffre obtenu correspondant à l’azote de la sérine et à l’azote non protéique.

3° Détermination de l’azote non protéique, après précipitation des protéines : N°.

Ces données obtenues, il était facile de calculer la quantité d’azote correspondant à la totalité des protéines et à chacune d’entre elles. En effet, nous avions :

AOL LOLA IDE OUTRE. 7 22% 05 due 0 mo. e N,—N, FPE) CS CA M 0 CPP TE CPE N>—N; Nrotedenid slobines....t. 0... N;—N;

Pour passer de la valeur en azote au poids correspondant des matières albuminoïdes, un même coefficient, 6,5,

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était utilisé. Le dosage de l’azote total protéique et non protéique s’effectuait sur le liquide préalablement centrifugé.

Le dosage de l'azote de la sérine élait pratiqué sur ce même liquide après précipitation de la globuline par le sulfate de magnésie à saturation. A cet effet, nous avons utilisé des ballons jaugés de 25 c. c. où nous placions 2 c. €. 5 de liquide centrifugé, auquel nous ajoutions une quantité suffisante de sulfate de magnésie pulvérisé pour obtenir la saturation. Nous complétions jusqu'au trait de jauge à l’aide d'une solution saturée de sulfate de magnésie. Le tout était abandonné au repos pendant 24 heures, puis agité et filtré. Nous avions ainsi un liquide dilué au 1/10°, contenant l'azote de la sérine et l’azote non protéique que nous dosions.

Le dosage de l'azote non. protéique s’effectuait après précipitation des albumines par une solution d’acide trichloracétique à 30 % ajoutée à volume égal au liquide préalablement centrifugé. Après filtration, on avait un liquide dilué de moitié contenant l’azote non protéique.

Pour les différentes déterminations de la valeur de l’azote, nous avons utilisé la méthode de Kjeldahl dont nous rappellerons le principe : l’acide sulfurique concentré décompose à chaud les matières organiques avec transformation de tout leur azote en ammoniaque qui reste fixé à l’état de sulfate. Le dosage de cet ammoniaque permet de réduire la quantité totale d’azote contenu dans les substances étudiées.

Nous avons utilisé pour la destruction des matières organiques le micro Kjeldahl. Cette destruction était opérée dans de petits matras soufflés à l’extrémité de tubes en pyrex. Une certaine quantité de liquide examiné (un à deux centimètres cubes suivant les cas) était exactement mesurée et introduite dans le matras ; on y ajoutait un centimètre cube d'acide sulfurique concentré et un très petit cristal de sulfate de cuivre destiné à servir de catalyseur d’oxydation. Le tout était chauffé jusqu’à dégagement de vapeurs blanchäires ; à ce moment, un petit entonnoir était placé dans Fou-

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verture du matras et le chauffage était poursuivi pendant un temps double de celui nécessaire pour obtenir la décoloration complète du liquide. Ajoutons que le dosage s’effectuail sur un centimètre cube pour l'azote total protéique et non protéique (N,), sur deux centimètres cubes pour l'azote de la Ssérine (N;) et pour l’azote non protéique (N:).

La destruction des matières organiques accomplie, il restait à doser l’ammoniaque. Le principe de la méthode est le Suivant : l’ammoniaque contenu dans le matras est déplacé par de la soude, et entrainé par un courant d'air produit par l'aspiration d’une trompe à eau, pour être recueilli dans un tube contenant un excès d’acide sulfurique titré. La distllation achevée, la quantité d’ammoniaque «déplacée est facilement évaluée par titrage en retour de l’acide sulfurique, à l’aide d’une solution titrée de soude et en présence d’alizarine comme indicateur.

Pratiquement, l’air, préalablement débarrassé de toute trace d’ammoniaque par passage dans un ballon contenant de l’acide sulfurique, est amené au fond du matras par un tube plongeant ; il s'échappe par un tube à boules, dont l'extrémité traverse le bouchon qui ferme le matras et maintient le tube plongeant en place. Après avoir traversé le tube à boules, l’air chargé d’ammoniaque est amené par un tube plongeant, au fond d’un tube contenant 10 c. c. d’acide sulfurique N/50. Entre la trompe à eau et le tube d’échappement de l’air qui vient d'abandonner l’ammoniaque, est intercalé un appareil régulateur permettant de faire varier l'intensité du courant d’air.

Immédiatement avant la mise en marche de l’appareil, on introduit dans le matras une quantité de lessive de soude suffisante pour obtenir une réaction nettement alcaline à la phénolphtaléine. D'autre part, tout le lemps que dure la distillation, le matras est maintenu dans un récipient contenant de l’eau à la température de 45°. Cette distillation est terminée au bout de 45 minutes. Le titrage en retour de l’am-

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moniaque s'effectue à l’aide d’une burette graduée au 1/20° de centimètre cube, contenant une solution N/50 de soude.

On emploie comme indicateur coloré une solution au 1/100°

d’alizarine. La zone de virage de cet indicateur étant assez étendue, il est indispensable de pratiquer le dosage en présence d’un témoin obtenu par mélange de 10 c. c. d'acide sulfurique N/50 et de 10 c. c. de soude N/50, auquel on ajoute II gouttes de la solution d’alizarine. On obtient ainsi la teinte répondant à la neutralité et on arrête le dosage lorsqu'on a obtenu cette coloration.

Le calcul à effectuer est des plus simples : 1 c. c. de la solution d’acide sulfurique N/50 correspondant à 0 mmgr. 34 d’ammoniaque ou à 0 mmgr. 28 d'azote, si n c. c. de soude ont été nécessaires pour obtenir la neutralisation, la quantité de liquide soumis à la destruction contient :

d'azote en milligrammes. Si le dosage a été effectué sur 1 c. c. de liquide on aura : (10-n) 0,28 grammes d’azote par litre.

Calcul de la tension osmotique. — Nous avons vu que Govaerts avait établi que tout se passait comme si une solution à un gramme pour cent de sérine donnait une pression de 7 cm. 54 d’eau et une solution de globuline au même titre une pression de 1 cm. 95 d’eau. Partant de leurs valeurs respectives en azote, la tension osmotique propre à chacune de ces albumines était donnée (pour 100 €. c. de liquide) par les formules suivantes :

Pression de la sérine :

(Na-N3) 7x 6,5 x 77,94.

Pression de la globuline :