Chapitre VI

Extraction de l’Antibiotique

Dans un premier paragraphe, il sera question de quelques réactions, nous ayant permis de diriger par la suite l’extraction proprement dite.

Essai du jus concentré sur Bacillus subtilis.

Cet essai nous a été nécessaire pour pouvoir être sûrs de l’activité de notre antibiotique en solution concentrée. Jusqu’à présent nous avons travaillé sur du jus dilué et rien, à première vue, ne pouvait nous faire prévoir que l’activité inhibitrice du jus dilué se conserverait dans le jus après sa concentration.

Le jus normal obtenu à partir d’une infusion au 1/5 au moyen de la poudre est épuisé à l’éther comme d'habitude. En effet, c’est en milieu normal que l'extrait éthéré s’est avéré le plus actif.

L’éther a été évaporé et le résidu a été repris par une quantité d’eau ordinaire stérile correspondante au 1/100 du volume de l’infusion. On agite un peu, on chauffe légèrement. La chlorophylle ne se dissout pas. Avec la solution ainsi obtenue, on fait un essai au moyen de la méthode de Vitastain, méthode spécialement conçue pour examiner leffet antibiotique sur Bacillus subtilis (la méthode sera décrite plus loin). Dans une gamme de 6 tubes renfermant une culture de Bacille subtilis sur milieu solide, nous répartissons 5 gouttes, à raison d’une goutte par tube, aux dilutions suivantes 1/20, 1/10, 1/5, 1/2,5 et 1/1, dilutions par rapport à la solution concentrée, le dernier tube étant un témoin.

Or, dans les dilutions de 1/10, 1/5, 1/2,5 et 1/1, la croissance du Bacille subtilis est inhibée, tandis que pour une dilution de 1/20 il pousse normalement, ainsi que dans le tube témoin (voir photographie, fig. 3).

Fig. 2: A è 2j Vo, Le Fo JE (reproduction des tubes)

La substance antibiotique est non seulement active en milieu dilué, mais aussi en milieu concentré. Cette concentration fait même apparaître une action sur Bacillus subtilis qui était inapparente dans le jus dilué.

Premier éssai d’extraction.

L’extrait éthéré obtenu est évaporé à sec. Le résidu est épuisé à l’eau chaude et on filtre sur tale, la chlorophylle n’y passe pas ou peu. Le filtrat est réépuisé à l’éther ,l’éther est évaporé, on reprend avec de l’eau stérile qu’on chauffe légérement en agitant pour que tout se dissolve. On fait un essai par la méthode de Vitastain. L'activité a sensiblement diminué et nous sommes encore toujours en présence d’une certaine quantité de pigments. On fait passer le filtrat sur du charbon pour retenir les chlorophylle, xantophylle et carotène. Le filtrat épuisé à l’éther et l'extrait éthéré, étant traité comme d'habitude, ce dernier ne montre plus aucune activité de même que le charbon qu’on a épuisé également à l’éther. On en conclue donc que le peu d’antibiotique encore présent après filtration sur talc, est absorbé par le charbon qui ne le recède plus par la suite.

Re, de

Si nous examinons à nouveau les épuisements du jus en milieu acide et en milieu alcalin, nous voyons que l’antibiotique passe dans l’éther en milieu acide et reste dans le jus en milieu alcalin, c’est-à-dire est soluble dans l’eau en milieu alcalin. C’est sur cette propriété que sera basée toute notre extraction.