CHAPITRE IV

Etude

de l'organisme sur différents milieux.

Afin d'étudier les propriétés de notre parasite sur les différents milieux de culture, nous l’avons ensemencé sur milieu de SABOURAUD maltosé, milieu de SABOURAUD glucosé, pomme de terre, carotte, jus de pomme de terre gélatiné et gélosé ; gélatine, banane, pomme de terre glycérinée, sérum coagulé, albumine d'œuf, etc.…., quant aux substrats solides.

Nous avons aussi étudié sa croissance sur quelques milieux liquides tels que bouillon de viande, bouillon glycériné, liquide de RaAuLIN neutre, liquide de Rauzi acide, milieu de RAULIN glucosé, eau de malt, moût de bière, bouillon maltosé. Toutes ces cultures ont été disposées à + 280, température optimum de croissance pour notre organisme.

Ci-dessous nous indiquerons les principaux caractères culturaux du parasite sur ces différents milieux.

Milieu de Sabouraud maltosé.

Sur ce milieu à + 28°, 48 heures après l’'ensemencement on remarque l'apparition de quelques colonies légèrement jaunâtres; le 3° jour ces éléments commencent à confluer et le 6° jour on note que tout le milieu se couvre d’un tapis jaunâtre assez lisse, un peu festonné sur les bords; par la

as EL:

suite l’enduit visqueux s’épaissit jusqu'à atteindre 2 mm. environ de hauteur.

Les préparations microscopiques effectuées à divers moments au moyen de ces cultures nous ont montré des formes arrondies, globuleuses, de 4 u, 5 à 6 u de diamètre, semblables à celles que nous avions eu l’occasion d’observer, lors de nos cultures en goutte pendante. A aucun moment, dans ces préparations, nous n'avons eu l’occasion de déceler de formation sexuée à asques. Le bourgeonnement de notre espèce se fait très rapidement sur le milieu de SaABouRAUD maltosé qui doit être retenu comine très favorable.

Milieu de Sabouraud glucosé.

Sur le milieu de SABOURAUD glucosé, notre levure manifeste sa croissance à la fin du 3° jour après l’ensemencement ; la poussée se fait plus lentement que sur le milieu précédent ; les colonies punctiformes restent isolées les unes des autres pendant 5 à 6 jours et ce n’est que vers le 8° jour que nous constatons leur fusionnement. L'aspect macroscopique, à ce moment, est très voisin de celui de la culture sur le milieu précédent ; notons cependant une teinte générale plus pâle ; une épaisseur moindre du tapis qui atteint au maximum 1 mm. 5 de hauteur.

L'examen microscopique ne fournit rien de particulier à signaler : nombreuses formes rondes bourgeonnantes ; pas d’asques.

Pomme de terre.

A la température de + 28°, on obtient une culture assez luxuriante qui débute quarante-huit heures après l’'ensemencement ; elle est formée de colonies punctiformes légèrement jaunâtres qui confluent le 6° jour en donnant naissance à un enduit moins homogène que pour les cultures effectuées sur les milieux de SaBourauD maltosé et glu-

Mn

cosé. En effet les bords sont moins épais que le centre ; ils sont lisses.

Le 15° jour on constate un renforcement dans la coloration de la culture ; en aucun cas nous n’avons remarqué de pigmentation de la pomme de terre elle-même. Dans les vieilles cultures l’enduit devient efflorescent et prend un aspect plutôt mat.

A l'examen microscopique, nombreuses formes globuleuses ayant les dimensions déjà observées, bourgeonnant à l’une de leurs extrémités ; rares formes ovales : pas d’asques.

Carotte.

Les remarques que nous venons de faire à propos des cultures sur pomme de terre peuvent s'appliquer à la carotte ; toutefois la croissance sur ce dernier milieu estelle un peu moins rapide.

Gélatine.

Sur ce milieu le développement est fort peu luxuriant et la croissance se fait avec lenteur : le 4° jour apparition des premières colonies assez chétives, punctiformes, qui ne s'étendent guère ; le 6° jour au voisinage de ces éléments la gélatine commence à se liquéfier ; par la suite les colonies s'étendent, mais la liquéfaction du milieu est totale le 15° jour.

L'aspect microscopique ne révèle rien de particulier.

Sur la banane et la pomme de terre glycérinée l’organisme se développe fort bien.

Sérum coagulé.

Malgré un grand nombre d’ensemencements, nous n’avons pu obtenir sur ce milieu aucune poussée de notre Saccharomyces.

Albumine d’œuf.

On a introduit dans des tubes contenant du bouillon de viande des petits cubes d’ovalbumine coagulée par la chaleur ; le milieu a été stérilisé à l’autoclave ; après refroidissement nous y avons ensemencé le champignon en étude ; on a disposé les cultures à la température de + 280,

Après 4 jours de culture, l’organisme commence à se développer, amorçant un voile à la surface du bouillon ; les tubes de blanc d'œuf sont intacts. Nous avons observé quotidiennement ces cultures et, même après un mois nous n'avons obtenu aucune modification, ni dans la forme, ni dans la coloration de nos cubes de blanc d'œuf, dont les bords sont encore intacts.

Cultures sur milieux liquides.

Bouillon de viande. — Sur bouillon de viande nous obtenons un voile léger le 5° jour après l’ensemencement ; il est très fragile et, à la moindre secousse, tombe au fond du vase de culture, laissant une petite colerette d’un blanc jaunâtre attachée aux bords. Si l’on prend de grandes précautions, de façon à ne pas disloquer le voile dans les premiers jours de sa formation, il semble se consolider par la suite et il s’épaissit, devenant moins fragile. Le bouillon se trouble et ce phénomène subsiste 5 à 6 jours ; après quoi le milieu s’éclaircit, tandis qu’un dépôt formé par la culture se forme au fond du tube. Ce dépôt est plutôt floconneux ; il peut atteindre 3 à 4 millimètres.

Liquide de Raulin neutre et acide. — Le 3° jour la culture. se manifeste par la formation d’un voile extrêmement fragile à la surface du milieu ; en même temps le liquide se trouble à peu près uniformément ; les jours qui suivent il s’éclaircit peu à peu et un culot se forme à la base. Quand le voile tombe il ne laisse pour ainsi dire aucun dépôt sur les parois du tube. Ces observations sont valables à la

RP

fois pour le milieu de RauLiN neutre et pour le liquide de RAGLIN acide.

Liquide de Raulin neutre maltosé. — Ce milieu est beaucoup plus favorable que le précédent et c’est très certainement la présence de maltose qui opère cette heureuse modification ; après 48 heures de culture, le parasite atteint déjà un développement appréciable se manifestant par un voile léger et un trouble important ; le quatrième jour un énorme dépôt se forme. Ce milieu mérite d’être retenu.

Moût de bière. — Le moût de bière, tout en étant un milieu moins favorable que le bouillon maltosé, permet cependant une croissance assez rapide de notre organisme ; le deuxième jour un début de culture se manifeste et le 3° jour un voile se forme; en même temps le milieu se trouble. L'aspect microscopique de ces cultures est identique à celui que nous avons observé sur les milieux précédents.

Bouillon maltosé. — Comme nous avons déjà eu l’occasion de le faire remarquer, le bouillon de viande maltosé constitue un excellent milieu ; le deuxième jour après l’ensemencement, la culture est déjà luxuriante et le voile presque complètement formé ; remarquons ici que sur ce milieu le voile est relativement résistant et que, même quand on soumet les tubes à l'agitation, il persiste en partie sous forme d’un anneau ou d'une colerette adhérent fortement aux parois du vase de culture.

Tels sont les aspects que le parasite prend sur les différents milieux de culture utilisés le plus communément dans les laboratoires de mycologie parasitaire.

Nous passons ensuite à l'étude de quelques propriétés biologiques de l'organisme.