TABLEAU XXV

Ra. des pentoses et du rhamnose.

Solvant I Solvant II Arabinose 1 1 Xylose 1,25 0,81 Ribose 1,8 1,09 Rhamnose 2,2 1,09 RÉVÉLATEURS

Nous avons utilisé le révélateur à l’oxalate d’aniline indiqué par Horrocks [39]. Il donne avec les pentoses une tache rouge après cinq minutes à l'étude à 1100.

CHROMATOGRAPHIE QUALITATIVE.

MODE OPÉRATOIRE

On utilise des feuilles de papier de 13 cm. de large sur 26 cm. de haut. A cinq centimètres de la base on trace un trait parallèle à celle-ci. Sur cette droite on marque des points à partir de 2 cm. du bord, et ensuite tous les trois centimètres. Sur ces points sous déposons : de petites gouttes de la solution à étudier. Celle-ci contient : arabinose, xylose, ribose, rhamnose ; nous déposons également en un point une solution d’arabinose ; 2p. 1000. Ces opérations sont faites à l’aide de micro-pipettes calibrées. Si la solution est suffisamment diluée, nous déposons plusieurs gouttes en attendant chaque fois que la goutte précédente soit complètement sèche; cette dessication est rapide si on opère sur une platine chauffante, que nous recouvrons d’une plaque de porcelaine pour ne pas salir les chromatogrammes.

On procède à une chromatographie descendante de 48 heures avec le Solvant I et à une chromatographie ascendante de 24 heures avec le Solvant IT.

Les deux chromatogrammes sont révélés par le réactif à l’oxalate d’aniline. On peut effectuer une chromatographie à deux dimensions en combinant l’action de ces deux Solvants.

Front du Ligne de Solvant depart Arabunoce Ribose.Rhamnose Xylose Arabunose Xylose

Ribose

Rhamnose Ligne de depa rt

Fig. 5. — À gauche : Chromatogrammes obtenus avec le solvant II, chromatographie ascendante de 24 heures ; à droite : chromatogrammes obtenus avec le solvant I, chromatographie descendante de 48 heures.

RÉSULTATS

Par la révélation des spots avec le réactif à l’oxalate d’aniline, les pentoses donnent des taches rouges bien séparées ; chacun de ces sucres peut être caractérisé par son R4 ou son Rf. PARTRIDGE, le premier, a bien montré ce phénomène, Les résultats de cet auteur, que nous avons reproduits, sont résumés dans les figures Horo Te 0.

@ abunose

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@*hannos:

Fig. 6. — Chromatographie à deux dimensions. Sens I : chromatographie as:en-

dante de 24 h. avec le phénol ammoniacal; Sens 2 : chromatographie descendante de 48 h. avec le butanol ammoniacal.

CHROMATOGRAPHIE QUANTITATIVE.

Supposons que la solution à étudier contienne de l’arabinose et du xylose. Connaissant la quantité d’arabinose utilisé comme témoin, on déduit la quantité de xylose et d’arabinose de la solution à étudier.

MODE OPÉRATOIRE

On dépose sur un chromatogramme un certain nombre de millimètres cubes de solution à étudier : soit 10 mm®. En des points voisins, on dépose 5, 10 et 15 mm° de solution d’arabinose à 2 p. 1000, soit des quantités d’arabinose de 10, 20 et 30 y. On fait une chromatographie ascendante de 48 heures avec le Solvant I. On révèle à l’oxalate d’aniline.

RÉSULTATS

On peut déterminer approximativement le taux de la solution en chacun des sucres. Pour cela, on compare les taches fournies par la solution témoin d’arabinose et par la solution à étudier. Par la comparaison et l’appréciation de la grosseur des taches, on peut, comme l’indiquent GiBBoxs et BoisonAs [55], et comme l’a fait Pozson [56] pour les acides aminés, apprécier à l’aide de solutions témoins de concentration décroissante à combien de y correspond la tache fournie par le sucre étudié.

Fig. 7. — Chromatographie descendante de 24 heures avec le phénol ammoniscal de quantités croissantes d’arabinose.

En exagérant dans la figure n° 7 ci-contre, par un souci de clarté, la différence qui existe entre l'importance respective des taches, on voit que l’on peut dire que nous avons dans les 10 mm° de solution étudiée :

30 y d’arabinose et 30 y de xylose, soit 3 g p. 1000 d’arabinose et 2 g p. 1000 de xylose.

Transformations des vins en solutions propres à la chromatographie pour l’étude des sucres.

PRINCIPE

Il est sensiblement le même que celui que nous avons indiqué lors de l'étude du saccharose dans les jus de raisins. Il visera à obtenir. à partir des vins, une solution des sucres qui y sont présents. La seule différence tient à ce que le traitement que nous avons indiqué, devra pour être efficace, être précédé d’une élimination de l'alcool.

MODE OPÉRATOIRE

Rappelons-le brièvement.

900 ml. de vin sont soumis, après neutralisation par NaOH AN, à une distillation pour chasser l'alcool. Quand tout l’alcool est parti, on continue cette distillation jusqu'à concentration du vin au volume de 100 ml. |

A ces 100 ml. refroïdis, on ajoute 50 ml. d'extrait de Saturne. On mélange, on centrifuge. On recueille le liquide surnageant. Le précipité est remis en suspension dans 100 ml. d’eau distillée. On centrifuge. On recueille le liquide surnageant. On opère de même une seconde fois. On mélange les trois liquides ainsi obtenus.

On ajoute à cette solution 50 ml. d’une solution saturée de sulfate de sodium. On mélange. On fait passer dans le mélange un courant de CO? pendant cinq minutes. On laisse reposer quelques heures (dans nos expériences : une nuit). On filtre. On lave bien le récipient ; les eaux de lavage sont filtrés sur le même filtre. Le filtre est à son tour lavé avec de l’eau distillée.

La solution obtenue est évaporée sous vide à To — 500 jusqu’à consistance sirupeuse. Le résidu est trituré au mortier avec du

sulfate de soude anhydre en quantités suffisantes pour obtenir une poudre bien divisée.

Cette poudre est triturée dans un mortier avec 25 ml. de pyridine bien sèche, pendant dix minutes. On filtre sur papier. On lave le filtre avec de la pyridine. La solution pyridinée est évaporée à 3 ml. environ à basse température grâce à l’emploi d'une lampe à rayons infra rouges et d’un courant d’air produit par un ventilateur.

Le résidu est utilisé pour une étude chromatographique.