II. Gonococcus

Ainsi nous allons décrire une forme d’infection génitale où l’on rencontre le gonococcus à l’état de pureté, et cependant Doléris a écrit récemment : je ne veux pas m’arrêter à l’hypothèse d’une

gonococcite pure acquise, ce qui doit être excessivement rare. Certes

ce genre d'infection n’est pas fréquent, mais il existe et les dissidences des auteurs à son sujet dépendent, sans aucun doute, de l’incertitude des procédés d'investigation, de l’ignorance même de la biologie du microbe. Sommes-nous si peu instruits qu'il faille dire, avec Dohrn: le gonococcus n’a pas de valeur diagnostique, car on ne sait pas le caractériser, et l’examen ne peut porter sur tous les points qu’il est en droit d'atteindre ?

Il y à peu de temps encore, l’assertion de Dohrn était peut-être fondée : après l'engouement immédiat qui suivit la découverte de Neiïsser (1879) et qui fit rapide justice des contradictions d’Eklund, la réaction était venue. On avait affirmé trop tôt, dans ce bel élan qui poussait les médecins à trouver pour chaque forme morbide ancienne un microbe spécifique. Les preuves n'étaient pas irréfu-

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tables; les arguments ne manquaient pas aux sceptiques; on en venait à douter. Pourtant, Neisser, entouré dune brillante phalange de bactériologistes, avait décrit soigneusement la forme, le mode;de division des cocci, et même publié des essais de culture en partie positifs. Mais les esprits consciencieux de Bumm, de Steinschneider, qroique convaincus de l'action du gonococcus, se montraient plus exigeants et voulaient établir la spécificité sur des données plus précises. Cette œuvre à été la leur : ce sont leurs travaux, joints à ceux de Roux, de Wertheim, de Legrain, de Hogge, de Finger, qui ont définitivement fixé les caractères du microbe. De 1879 à 1895, la lutte a été vive : le nombre des publications parues en ces quinze années en témoigne. Aussi la tâche est-elle épineuse, de démêler la vérité, si l’on ne contrôle soi-même chaque conclusion. Notre opinion s'appuie sur plus de 300 examens complets de pus gonococcique.

À. Morphologie. — Le gonocoque de Neisser est un diplocoque. A un grossissement faible et sans coloration, il apparait sous la forme d’un ovoïde de 1,25 » de long et 0,7 u de largeur. Au fort grossissement et après coloration, ces microparasites paraissent nettement séparés en deux parties égales par une ligne claire, par une fente. Chaque moitié a une face externe convexe et une face interne plane ou légèrement excavée, rappelant ainsi une fève de café, un pain au lait (semmel des Allemands), Eschbaum décrit les deux grains englobés par une capsule amorphe, hyaline, que ne colorent pas les couleurs d’aniline, et qui se détache en blanc sur le fond légèrement teinté de la préparation; assez nette sur les micro-organismes libres, elle se distinguerait malaisément à l'intérieur des cellules.

Le pléiomorphisme de ce microbe est d’ailleurs à l’étude : Brôse, Wertheim, ont vu de petits globules de grandeur et de forme irrégulière, à peine colorables, aussi peu analogues que possible au type primitif dont ils sont cependant des dérivés, puisqu'ils ont pu régénérer la forme classique par transplantations successives, par rajeu=

nissement des cultures (1892). Nous-même avons à plusieursreprises constaté ces aspects particuliers du gonocoque, induisant en erreur au premier abord, mais décelés par transport dans un milieu favorable (sérum-agar). La connaissance de ces formes d’involution, soupçonnées aussi par Touton, Turro, etc., sera un avantage incontestable.

Legrain attribue au gonococcus une mobilité propre, complexe, due à la combinaison de trois mouvements : un de translation assez lent, un d’oseillation autour du mouvement de translation comme axe, enfin un mouvement derotation, grâce auquel chaque élément occupe alternativement le plan supérieur et le plan inférieur de la préparation.

Ces microbes ne se rencontrent généralement pas isolés, encore moins en chaïnettes. Leur groupement est caractéristique : ils se réunissent en amas, et non-seulement le nombre d’individus que renferment ces constellations microbiennes représente un chiffre pair, mais encore ce nombre est souvent divisible par quatre, Ce dispositif dépend du mode spécial de division qui a été décrit par Neisser. Chaque diplocoque se divise dans une direction perpendiculaire à la fente médiane ; ils donnent ainsi des figures de sarcine, et chaque paire forme de nouvelles tétrades qui restent au voisinage les unes des autres.

Les amas que nous venons de décrire se trouvent dans le pus, en partie dans les espaces inter-cellulaires, mais aussi dans les cellules de pus. {1 y a des leueocytes dans le protoplasma desquels il existe un ou quelques groupes périnucléaires ; ailleurs le nombre en est plus considérable ; les cocci recouvrent le noyau, atteignent de toutes parts le bord de la cellule, mais ils ne dépassent jamais cette limite, ce qui exclut l’idée d’une simple superposition aux globules blancs. Il n’est pas rare de voir se rompre les cellules ainsi bourrées, mettant les micro-organismes en liberté. Assez fréquemment on rencontre dans les préparations de nombreuses cellules épithéliales plates, recouvertes de gonocoques en amas; mais ici

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la liaite cellulaire est largement dépassée, et ce simple fait prouve qu'ils ne sont pas situés à l'intérieur du protoplasma, mais simplement superposés à l'élément épithélial. Wertheim prétend avoir décelé les microbes dans la profondeur même des parois de la trompe; cette affirmation a besoin d’un contrôle qui n’a pas encore été produit.

Pour se rendre compte des caractères que nous avons tracés, des artifices sont nécessaires : il faut recourir aux procédés de coloration. Or le gonocoque présente une grande affinité pour les couleurs basiques d’aniline; il se colore facilement par le violet de méthyle, le violet de gentiane, la fuchsine, le bleu de méthyle... D'autre part, il se décolore très rapidement par l’alcool ou les acides ; il ne prend pes le Gram, et, comme tel, la thionine, le bleu de toluidine, après fixation dans une solution de tannin à 10 p. 100, d’après le procédé de M, Nicolle, lui conviennent très bien (Roux). Les méthodes de double coloration donnent de bons résultats : entre autres, celle de Klein; signalée par Finger. Les lamelles chargées de pus sont plongées dans un mélange d'alcool et d’éther (parties égales); au bout de #0 minutes, on les soumet 10 à 45 minutes à une solution d’éosine et de bleu de méthyle (0 gr. 5 d’éosine dans 100 gr. de solution aqueuse concentrée de bleu de méthylène). On lave à l’eau, on sèche et on examine dans le baume de Canada. Le gonocoque et les noyaux cellulaires apparaissent en bleu ; le protoplasma prend une teinte saumon.

Quelques particularités de ?examen des glaires gonococciennes féminines sont à signaler, Îl est bon d'examiner le pus en couche aussi mince que possible; pour bien l’étaler sans briser les leucocytes, Carry recommande de placer une goutte sur une lame de verre stérilisée, de l’écraser avec une deuxième lame stérilisée qui adhère par capillarité, puis de séparer brusquement les deux lames en les tirant dans le sens de la tranche, chacune d’un côté. Assez souvent le liquide est très chargé en graisse, surtout quand il s’agit de glaires utérines : il est utile, dans ce cas, de verser sur la lame

autant d'éther sulfurique qu’elle peut en supporter, de renouveler deux ou trois fois cette tactique ; une fois la préparation lavée, fixée et colorée, le microbe apparait très nettement.

B. Biologie. — Si le gonocoque se laisse aisément colorer, il s’est montré longtemps rebelle aux cultures (Vibert et Bordas), mais, seule, notre technique imparfaite en est responsable : un microbe a le droit d’exiger un milieu approprié à son évolution. Il cuflit d’ouvrir la thèse de notre ami, le docteur Bosc, pour se faire une idée des essais aussi infructeux qu’innombrables des bactériolologistes. Ici plus qu'ailleurs, appréciation des résultats est difficile ; cependant, comme le dit très bien Finger, il faut se montrer sceptique, et souvent le seul critérium qui serve de base est la simplicité de méthode, la facilité de réussite, avouées ingénument par Krause, Leistikow, Sternberg, Oppenheimer, Kreiss, ete

C’est Bumm, le premier, qui semble avoir obtenu des cultures pures de vrai gonococcus, à l'abri de tous reproches. Une goutte de pus était ensemencée sur du sérum sanguin, retiré du placenta et stérilisé ; léprouvette était laissée à l’étuve à la température de 37° C. En un jour, les cocei s'étaient déjà notablement multipliés et le point d’inoculation avait augmenté de volume. Une goutte de cette sécrétion, cultivée et ainsi repeuplée de gonocoques, était réensemencée sur une fiue couche de sérum : une nouvelle culture poussait. Après deux ou trois jours, le développement s’arrétait : ‘on devrail donc renouveler sans cesse les ensentencements. A la surface du sérum, la culture se présentait sous forme d’une couche mince, presque incolore, vernissée, unie, ayant la tendance caractéristique de s'accroitre par prolongemernts déchiquetés, nombreux, à boris raides, tombant à pic. Un réensemencement sur bouillon pepto-gélatiné, sur agar, fournissait toujours des résultats négatifs. Pen‘lant quelques années pourtant, on n’enregistre aucun succés. Seul Aufuso (1891) réussit des cultures dans du liquide d’hydrocèle. Enfin Wertheim (1892) indique un progrès, obtenu à laide des cultures sur plaques. [l ensemence sur du sérum de sang humain

un pus dont il a fait deux dilutions; puis il ajoute aux éprouvettes, renfermant 3 cent. cubes environ de ce sérum, la même quantité d’agar nutritive liquéfiée (2 p. 100 d’agar ; 1 p. 100 de peptone ; 0,5 de chlorure sodique) et répand le contenu sur des plaques. Au bout de 24 heures ordinairement, des colonies se développent sous forme de points gris blanchâtres, solides. Les colonies profondes, à contours irréguliers, sont jaunâtres, grossièrement bosselées, tandis que les colonies superficielles constituent, autour d’un point central compact, une mince pellicule. L’ersemencement ultérieur de ces colonies dans des tubes de sérum incliné donne lieu au développement de nouvellés colonies, minces, grises, punctiformes, à contours irréguliers, dentelés, semblables à celles décrites par Bumm.- Le transport sur gélose solidifiée aurait donné des cultures pures (Wertheim). Bumm, qui avait d’abord uié les résultats de Wertheim, les a pleinement confirmés

Mais ces méthodes ont encore des inconvénients : les manipulations longues et difficiles, l’emploi de sérum de sang humain ou de sang de bœuf, Ges raisons appelaient de nouvelles modifications. Elles ne se sont pas fait attendre. Pfeiffer enduit d’une couche superficieile de sérum humain de l’agar ou agar et glycérine en tubes ordinaires de Pétri.

Voici qu'uu point de technique vient d’être étudié, qui réalise un progrès sensible. Steinschneider avait signalé comme favorable le milieu urine (1893). D'autre part, Finger, Ghon et Schlagenhaufer observent que le gonococcus ne pousse pas toujours dans le mélange sérum-agar, et cela lorsque lâ réaction est alcaline ; il suffit d’acidifier, avec du phosphate acide de soude, par exemple, pour obtenir des colonies florissantes. Se rappelant lexpérience de Steinsch eider d’accord avec-certains faits de contagicn par l'urine, ils ont entrepris la culture sur urine normale acide. Is utilisent un milieu, composé de deux parties de bouillon de viaude avec 2 p. 100 d’agar et 4 p. 100 de peptone, auxquels ils ajoutent une partie d’urine ; la réaction de ce milieu peut être

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variée en toutes proportions et permet d'étudier les aptitudes du microbe. Les conclusions de leur travail sont les suivantes : les milieux de prédilection sont l'agar additionné, d'urine humaine, et l’agar additionné de sérum humain. Dans ce dernier milieu, les ensemencements réussissent plus sûrement, permettent de déceler de rares cocci qui ont échappé au microscope, mais les colonies sont moins vigoureuses et leur isolement, leur pureté, moins parfaites. L’infériorité partielle de l’agar-urine tient, sans aucun doute, aux variations de éomposition de l’urine.

Turro, d'autre part, a confirmé ces résultats et constaté la bonne adaptation du gonococcus aux milieux acides. C’est sur ce même milieu que nous avons fait des cultures avec un succès constant. La vitalité du gonococcus y parait assez longue, jusqu’à 71 jours (Turro), d'autant plus qu'il s’agit de générations à ascendance plus nombreuse. Ces conclusions nouvelles de Finger, de Turro, ont une grande importance au point de vue de la biologie du microbe dans les milieux vivants, dans les cavités génitales. D’autres rémarques non moins intéressantes ont été faites : la température la plus favorable est 36° ; au-dessous, jusqu’à 30°, il se comporte assez bien, mais si l’on descend à 25°, il décline rapidement; à 38°, d'autre part, sa vitalité est amoindrie, et à 39° il meurt en vingt-quatre heures. Ces chiffres ont été donnés par Wertheim ; certainement la résistance doit être plus forte dans les cultures à réaction acide. Dans les milieux naturels (pus, etc..…), à là température du laboratoire, les cocci meurent très vite. Leur dilution dans l’eau éteint promptement leur virulence.

Les propriétés pathogènes du gonocoque sont à l’étude, depuis qu’on obtient des colonies pures. Les tentatives d’inoculation datent des premiers essais de culture : elles étaient destinées à les contrôler. Si les résultats obtenus par Bockhart, Constantin Paul, Bokaï et Finkelstein sont susceptibles d'objections, tant sur la nature du microbe que sur l'affection provoquée, Wertheim, Bumm, Finger ont publié des faits positifs incontestables. Bumm