Injluence de la quantité de réactif

L'étude systématique de l’influence de la quantité de réactif nous a montré la cause de nos erreurs. Elle réside dans une insuffisance de réactif dans le cas où nous ajoutions une surcharge en tyrosine.

Nous avons pour cela successivement envisagé une série d’hypothèses que nous avons soumises à la vérification.

Nous avons pensé à voir à quelle phase de la réaction se produit cet empêchement, avec une solution contenant 74 mgr. 3 de gélatine (1) dans 5 cc. et amenée en fin de réaction à un volume de 50 cc. et avec une solution de tyrosine telle, que pour le volume de fin de réaction, elle en contienne o mgr. 8.

Nous avons fait réagir chaque solution séparément, nous les avons comparées au bout de 2 heures, nous avons mélangé des volumes égaux de chacune d'elles et nous avons comparé le mélange à la tyrosine primitive. Nous avons constaté que l'intensité de coloration du mélange est égale à la somme des intensités de chaque solution séparée. Donc, c’est bien au moment où le réactif phosphomolybdotungstique entre en réaction que l'erreur s’établit.

Nous avons poursuivi nos investigations dans ce

(1) Le pourcentage de gélatine que nous avons calculé pour cette réaction ainsi que pour les autres, a été obtenu en multipliant le chiffre d’azote total correspondant par le coefficient moyen : 6,25, également appliqué aux autres matières protéiques,

domaine en opérant sur des mélanges d’édestine et de tyrosine. Nous avons cherché à établir si l’édestine empêchait la tyrosine de réagir ou si la tyrosine gênait l’édestine. Nous avons fait agir le réactif sur l’édestine, puis une minute après nous avons ajouté la tyrosine Nous avons fait l'opération inverse en ajoutant de l’édestine à la tyrosine réagissant déjà depuis une minute. Nous avons constaté que dans chaque expérience l’addition faite en second lieu ne provoquait aucune nouvelle colcration, et que par conséquent le corps ajouté en second lieu ne réagissait pas.

Devant ces résultats, nous nous sommes donc demandés si la quantité de réactif entrant en jeu était suffisante.

Nous avons alors repris nos essais, en opérant sur une solution d’édestine à 1 gr. %. On constate que 5 cc. de cette solution renferment 2 mgr. 67 de tyrosine. En recommençant cette opération sur 5cc. de la même solution et en ajoutant, après addition du réactif, r mgr. 20 de tyrosine et en même temps x cc. de réactif, nous avons constaté que la tyrosine ajoutée réagit, que de 2 mgr. 67 la teneur en tyrosine de ces 5 cc. de solution passe à 4 mgr. 21, alors que, normalement, elle n’aurait dû être que de 2,67 + 1,20 — 3 mgr. 87. Donc ce centimètre cube supplémentaire de réactif a non seulement été utilisé par la tyrosine ajoutée, mais encore par l’édestine ; ce qui laisse donc supposer que le chiffre habituel de 3 cc. est insuffisant et que pour chaque protéine étudiée nous devrions trouver un indice de tyrosine supérieur à ceux déterminés jusqu’alors. On comprend donc maintenant

pourquoi nous ne retrouvions pas l’intégralité de la tyrosine que nous ajoutions à nos diverses solutions de protéines : c’est que nous n’utilisions pas suffisamment de réactif.

Nous avons donc repris nos expériences avec 5 cc. de solution d’édestine à 1 % en prenant 4 cc. de réactif au lieu de 3 ; dans d’autres essais, nous avons diminué la quantité d’édestine en laissant la quantité primitive de réactif. Voici les indices de tyrosine que nous avons calculés :

V 3° essai Édestine A7. Ce AN CC. rte R'ÉACE T e Arc: SCC GNCC.

Indices de tyrosine % en

milligrammes ......... 6,02 5,80 6,32

On peut donc dire que les conditions optima de réaction sont celles qui mettent en présence 30 mgs d’édestine avec 3 cc. de réactif.

Il résulte de ces expériences que, dans chaque cas, il faudra s’efforcer d'opérer pour chaque matière protéique dans le voisinage de ces conditions optima, c’est-à-dire employer une quantité de réactif suffisante pour révéler toute la tyrosine, mais insuffisante cependant pour donner une teinte verte. En particulier, lorsque nous voudrons vérifier par addition de doses croissantes de tyrosine les indices que nous aurons déterminés pour chaque protéine, il ne faudra pas que la somme globale de la tyrosine entrant dans chaque réaction s'élève au-dessus du chiffre maximum au-delà duquel les 3 cc. de réactif se sont révélés insuffisants,

Par exemple, lorsque, au cours des trois essais précédents, nous avons fait la réaction sur 50 mgr. d’édestine, le plus grand indice de tyrosine trouvé est un maximum pour nos 3 cc. de réactif. De là, il s’ensuit que si nous voulons refaire la réaction en ajoutant de la tyrosine à de l’édestine, il faudra que la concentration

6,32 du mélange en tyrosine ne dépasse pas

= a neT. 16

pour les 50 cc. sur lesquels nous opérons. Dans ces conditions notre réactif étant en quantité suffisante, nous devons retrouver toute la tyrosine ajoutée.