LS GERS
Tillmann et ses collaborateurs nous a fort surpris, et cela d'autant plus que, comme nous l’avons dit dans notre historique, il paraissait bien établi que le tryptophane: était susceptible de donner lui aussi une réaction xanthcprotéique qui d’ailleurs se comportait différemment de la réaction fournie par la tyrosine lorsqu'on alcalinisait le milieu.
Cependant une remarque de Môrner [23, note de la page 204] avait attiré notre attention. Ce dernier dit en effet que, après chauffage de 5 minutes, 5 milligrammes de tryptophane dissous dans ro cc. d’acide azotique dilué ne donnent aucune coloration quand la quantité d’acide azotique pur contenu dans ces 10 cc. n’atteint pas o cc. 5.
Aussi nous fûmes amené à penser que dans cette réaction la concentration de lacide azotique intervenait peut-être. C’est pourquoi nous avons institué une série: d'expériences dans lesquelles nous fimes réagir une quantité constante de tryptophane avec une quantité également constante d’acide azotique en faisant varier simplement la concentration de cet acide. |
Voici comment furent réalisées ces expériences : Dans une série de tubes à essais de 15 %, X 15 %% de diamètre nous introduisions o cc. 2 d’une solution de NO'H :oN et une quantité d’eau variable pour chaque tube. Ayant ainsi constitué une gamme où la même quantité de NO'H se trouvait en une dilution graduellement croissante, nous ajoutions, dans chaque tube, o cc. 25 d’une solution de tryptophane à 2 grammes pour 100 cc., soit s milligrammes. Tous les tubes étaient portés en même temps au bain-marie bouillant et l’on notait le changement de teinte
en fonction du temps. Au bout de 10 minutes, on refroidissait les tubes et on les complétait à 20 cc. Voici en un tableau le résumé de nos expériences :
Chaque tube contenant O ce. 2 de No®H10N et 5 mg. de tryptophane
Cm3 d'eau } Fours der ae Couleur = Au bout de
chauffage 4
1 (e) I0N jaune foncé brunût. 1 minute
2 2 N jaune foncé 2 D
3 Ë 0,4 N jaune CODE
4 7S 0,266 N à peine coloré 45 »
5 10 02 N incolore ASE)
6 20 0,1N incolore 45 - »
Les teintes obtenues en 1, 2 et 3 sont comparables. La teinte obtenue avec le tube 4 est très faible. La conclusion qui se dégage de ces expériences c’est que pour que la réaction xanthoprotéique se produise avec le tryptophane, il est nécessaire que la concentration de l’acide nitrique ne soit pas inférieure à un titre déterminé, qui est compris entre o,4N et o,266N, soit en NofH 25 gr. 2 et 16 gr. 8 par litre.
Donc s’il est exact que le tryptophane donne la réaction xanthoprotéique, celle-ci ne se produit qu’en un milieu nitrique de concentration en acide bien plus élevé que pour la tyrosine. Nous nous expliquons donc que dans les conditions indiquées par Tillmann, Hirsh et Stoppel, il nous aït été impossible d’obtenir cette réaction, mais nous ne pouvons expliquer comment les auteurs obtiennent cette réaction dans les conditions spécifiées par eux.
LT OMRER Addition de nitrite de sodium.
Par contre, même en milieu nitrique décinormal, nous avons obtenu immédiatement une coloration jaune en ajoutant du mitrite de sodium.
On peut, d’ailleurs, dans cette réaction substituer l’acide sulfurique à l’acide nitrique : on obtient des colo- ‘ rations aussi bien pour le tryptophane que pour la tyrosine. Malheureusement ces dernières sont peu comparables à la solution de m-nitrophénol, en particulier pour la tyrosine.
Doses opiima de nitrite de sodium.
Nous avons essayé de fixer la dose optima de nitrite de sodium nécessaire à la réaction xanthoprothéique sur le tryptophane, en opérant avec des doses croissantes de NO*Na.
À des volumes constants d’une solution de tryptophane à 25 milligrammes pour 100 cc. de NOŸH O,IN nous avons ajouté des quantités variables de nitrite de sodium. Pour une quantité inférieure à 1 milligramme pour 100 cc. de solution nitrique de tryptophane, nous n’avons obtenu aucune coloration. Cette dernière ne s’est développée qu’à partir de cette dose, toutefois elle ne fut que très faible et ce jusqu’à la dose de o gr. 05. À partir de cette quantité la teinte s’est établie d’une façon très nette. Nous avons condensé nos observations dans le tableau suivant :
SOLUTION DE TRYPTOPHANE OBSERVÉE SOUS $ %, ET ADDITIONNÉE POUR 100 CM° DE SOLUTION NITRIQUE DE :
NONa|NO?Nal NONa [INONal NONa |[NO?Na 0g.05 |0g.10| 0g.20 |0g.40| 0g.60 |0g.85
Solution de m. nitrophénol à 10 mgr. [47-45 |5,5-5,5 | 7,1-7,3 |8,8-8,3 716 2|Teintes p. 100 cc. dilué|50-5,2 | 5,6 7,6-7,0-7,5 |8,7-8,6 | 6,0 non
x : 7,7-8,0-8,0 Cup au tiers, pour éga- re de pe = "= lité de teintes [M=48/M=5,5| M=7,5 [M=86| M=6,6 | rables
Nous avons ainsi constaté que la quantité optima de nitrite de sodium pour le tryptophane était de o gr. 40.
Nous avons opéré les mêmes essais pour la tyrosine et nous avons constaté que non seulement l’addition de nitrite de sodium ne nuisait pas au développement de la coloration, mais que, au contraire, une quantité de sodium égale à Oo gr. 20 provoquait la réaction la plus intense. C’est pourquoi nous avons adopté pour la tyrosine et le tryptophane la quantité de o gr. 20 de nitrite de ‘sodium.
Durée du séjour au bain-marie.
Nous avons constaté qu’en présence de nitrite de sodium le temps de séjour au bain-marie bouillant de 2 heures amenait, en particulier pour le tryptophane, une altération des solutions qui rendait leur coloration tout à fait impropre à des comparaisons avec le m-nitrophénol. La tyrosine au contraire n’a pas paru souffrir de ce séjour prolongé au bain-marie ; elle atteignait d’ailleurs son maximum de coloration bien avant les deux heures prévues.
Nous avons donc étudié pour le tryptophane les variations de l'intensité de coloration en fonction du temps de séjour au bain-marie bouillant et avons appliqué à la tyrosine les conclusions que le tryptophane nous a suggérées.
Nous avons opéré sur 25 milligrammes de tryptophane en solution dans 100 cc. de NOH O,IN, additionnés de « gr. 20 de nitrite de sodium, puis nous avons neutralisé selon la méthode décrite précédemment, le pH final étant donc théoriquement de 7.
Voici les résultats que nous avons obtenus :
Temps de séjour au | Solution de trypto- | Solution de m. nitrophénol diluée au bain-marie bouil- phane (Hauteurs tiers. Hauteur en centimètres pour lant. en centimètres). égalité de teintes.
20 minutes TT SAS OL OM
50 minutes 8,4 -8,1-89-87 M 60 minutes 7:1:- 7,3 -7,6- 7,0=17,5 8,0 - 8,0
00 minutes 120 minutes 6,2 0 AS 6,7 M = 6,6 Parfois teintes non comparables.
Nous avons ainsi constaté que le meilleur temps de séjour au bain-marie était de 50 minutes. Nous avons adopté le chiffre de 45 minutes de bain-marie bouillant.
Remarques sur la neutralisation des solution nitrées.
Pour neutraliser ces solutions, Tillmann, Hirsh et Stoppel ont indiqué l’emploi de la touche au tournesol. Pour notre part, nous avons préféré employer le bleu de
bromothymol en solution sodique à o gr. 40 pour cent (r), dont, le virage est plus net et s'effectue dans la zone cherchée, c’est-à-dire entre les pH 6,0 et 7,6. Nous avons préparé avec cette solution des papiers réactifs, et nous avons choisi comme terme exact de la neutralité le moment où une addition d’alcali provoque sur ces papiers une coloration franchement bleue. Il suffit d’ailleurs d’un peu d'habitude pour obtenir rapidement la neutralité.
Stabilité de la teinte des solutions nitrées et neutralisées.
La stabilité de la teinte des solutions de matières albuminoïdes nitrées selon la technique indiquée pour la tyrosine et le tryptophane parait suffisante, si l’on en juge d’après les essais suivants effectués sur la tyrosine, avant même que notre méthode ne soit au point :
Solution de tyrosine à 25 mg.
pour 100 cc. d'acide azotitique O,1N, additionnée de O0 g. 85 de 'No2Na. Hauteurs en centimètres pour égalité de teintes.
Solution de m. nitrophénol à 10 mg. pour 100 cc.
Hauteurs en centimètres
Comparaison effectuée au bout
20 minutes 4 CE ASE 7 60 minutes 4 1,6 - 1,4 - 1,4 6 jours 4 1 AE 0-17
Nous avons opéré de même avec le tryptophane.
re fe 07e PAUSE ÿ
(1) O gr. 10 de bleu de bromothymol dissous au mortier dans 4 cc. 3 de NaOH N/20 et complétés à 25 cc. avec de l’eau distillée (Clark [2]).
Solution de tryptophana à 25 mg.
pour 100 cc. de Solution de m. nitro-phénol
Comparaison NO3H 9,1N additionnée à 10 mg. pour 100 ce. effectuée au bout de |de 2 mg. 5 de nitrite Hauteurs en centimètres de sodium pour égalité des teintes
Hauteurs
en centimètres
24 heures 5 25-027 2025 7 jours 5 2,0 -2,3-2,2 - 2,4 - 2,4
