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XX 20 Calcul — Er rat X 0,843 donne en milligrammes

la proportion de tryptophane contenu dans les 20 cc. d’hydrolysat.

Le facteur 0,843 représente l'intensité de coloration développée par le tryptophane si l’on désigne par 1 celle de la tyrosine.

Remarque. — Il est essentiel d'employer, pour la séparation du tryptophane, un sulfate mercurique très pur, exempt de sulfate mercureux et autres sels susceptibles d’influencer le réactif de Folin. Ce sel pur est obtenu par la méthode de Folin et Cioccalteu.

Préparation du sulfate mercurique pur

Principe. — Contrairement au sulfate mercurique, le sulfate mercureux est insoluble dans l’acide sulfurique faible. On utilise cette propriété pour éliminer le sel mercureux. Le sulfate mercurique est alors précipité de sa solution par addition d’acide sulfurique concentré. Cette dernière opération doit être répétée plusieurs fois pour obtenir le sel pur.

Technique. — Introduire dans un cristallisoir pyrex de 4 litres 1.000 gr. de sulfate mercurique et 150 cc. d’acide sulfurique concentré. Agiter jusqu’à obtention d’une pâte homogène. Ajouter alors de l’eau distillée peu à peu en agitant constamment avec une spatule de verre ou de porcelaine, jusqu’à ce que la pâte obtenue précédemment ne

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reste plus adhérente au récipient (Il faut employer de 1.700 à 1.800 cc. d’eau pour dissoudre le sulfate mercurique). On obtient alors une suspension plus ou moins grise que l’on jette sur un bon filtre placé au-dessus d’un récipient de 4 litres. La filtration est lente; si on obtient un liquide trouble le repasser à travers le filtre. La coloration du filtrat est due au fer contenu dans le sulfate mercurique primitif.

Ajouter peu à peu, au filtrat, en agitant, 450 cc. d’acide sulfurique concentré. Il se produit un grand dégagement de chaleur; aussi faut-il placer le récipient dans de l’eau froide. Au début, le précipité blanc qui se forme se redissout, puis, au fur et à mesure de l’addition d’acide, se reforme rapidement. Recueillir, par décantation, environ 100 cc. du liquide surnageant et lui ajouter ro cc. d’acide sulfurique concentré. S’il se produit un précipité abondant, ajouter encore de l’acide sulfurique à la mixture primitive. Cependant 450 cc. auront dû être suffisants. Refroidir et filtrer sur un entonnoir de Büchner à travers un papierfiltre renforcé. Rincer avec 400 cc. d’une solution d’acide sulfurique à 25 volumes pour 100 volumes d’eau et aspirer à la trompe. Chasser le précipité dans un cristallisoir de A litres. Ajouter 450 cc. d'acide sulfurique concentré, mélanger de façon à obtenir une pâte homogène et dissoudre comme auparavant par addition graduelle d’eau.

À ce moment la filtration est le plus souvent inutile parce que la solution est complète; cependant si la solution n’est pas absolument claire, la filtrer. Répéter la précipitation par addition d’acide sulfurique comme pour le premier filtrat, refroidir, filtrer et rincer avec une solu-

tion froide d’acide sulfurique (1 volume d’acide pour 3 volumes d’eau). Chasser le précipité dans un cristallisoir sec, au moyen d’une spatule de verre; y ajouter peu à peu et en agitant ‘500 cc. d’un mélange à parties égales d’alcool et d’éther, mélanger parfaitement et filtrer sur un Büchner. Pour cette dernière filtration, il n’est pas nécessaire d’employer un filtre renforcé. Rincer le cristallisoir avec très peu d’alcool-éther, que l’on verse sur. le précipité, mais il importe de ne pas pousser le lavage plus loin. Il suffit, en effet, de très peu d’eau ou d’humitité, pour pratiquement, tout l’acide sulfurique a été ainsi enlevé. Ce précipité ne se produira pas si les instructions sont bien suivies.

Placer le précipité sur une assiette de porcelaine poreuse neuve. Placer cette assiette sur une double couche de papier-filtre, loin de toute ‘atmosphère humide et laisser sécher à la température du laboratoire. Rendement 750 grammes.

Nous avons suivi cette méthode en opérant sur 250 gr. de sulfate mercurique ordinaire Rhône-Poulenc et nous avons obtenu 180 gr. de produit. Ce qui nous donne un rendement de 72 % au lieu de 75 %.

Contrôle de cette technique.

Nous avons d’abord vérifié cette méthode en opérant des précipitations de tryptophane à partir de ses solutions par le sulfate mercurique et en déterminant, d'autre part,

les proportions de tyrosine et de tryptophane contenus dans un mélange des deux.

En premier lieu donc, nous avons opéré sur un poids de tryptophane de 3 milligrammes, auquel nous avons fait subir tous les traitements indiqués par Folin, y compris l’hydrolyse.

La réaction comporte de longues manipulations maïs est assez satisfaisante, puisque le dosage colorimétrique au moyen du réactif des phénols, nous avons obtenu un chiitre de tryptophane égal à 2 mg. 50 alors que nous opérions sur 3 mg. En second lieu, nous avons fait un mélange de 8 mg. 5 de tyrosine avec 2 mg. 2 de tryptophane. Les dosages successifs nous ont donné 2 mg. 55 de tryptopbane et 8 mg. 44 de tyrosine.