CHAPITRE V

ÉTUDE COMPARATIVE DES DIVERSES MÉTHODES ÉTUDIÉES DANS LES CHAPITRES PRÉCÉDENTS

Les résultats obtenus par la méthode de Folin et Marenzi étaient donc encourageants et nous nous sommes alors proposés d'examiner dans quelle mesure les résultats étaient comparables lorsqu'on introduisait dans cette méthode, en en conservant le cadre, c’est-à-dire, lhydrolyse alcaline et la séparation du tryptophane par SO‘Hg, les méthodes étudiées précédemment. Autrement dit nous avons essayé d'appliquer à l’hydrolysat en plus des dosages de Folin et Marenzi.

1° Avant la séparation du tryptophane, la méthode de Zuwerkalow [33] étudiée au chapitre I, et celle de Greenberg [11] étudiée au chapitre IT.

2° Après séparation du tryptophane, le dosage du tryptophane exclusivement par la méthode de Tillmann, Hirsb et Stoppel [30] telle que nous l’avons mise au point au chapitre nI. HE

Nous n’avons pu, sans grande complication, y ajouter le dosage de la tyrosine par la réaction xanthoprotéique,

car comme dans la solution de la matière protéique on se irouve en présence d’un sel mercurique, il s’opère une réaction de Millon.

Technique utilisée 1° Hydrolyse.

La quantité de matière protéique que nous employons est de 200 mg. (concentration double de celle indiquée par la méthode primitive, à cause des nombreux dosages). Nous mettons en dissolution ces 200 mg. dans 2 cc. de soude à 20 % de NaOH pure, dans un tube pyrex bouché et surmonté d’un condensateur, en chauffant légèrement. Nous portons au bain-marie bouillant pendant r4 heures. Nous diluons alors à 10 cc. La liqueur est légèrement trouble.

2° Détermination de l'indice xanthoprotéique (voi page 83). Technique :

Nous opérons le mélange suivant dans une fiole conique pyrex :

3 cc. de la sol. précédente, soit 60 mg. de matière protéique.

Acide azotique pur D — 1,332 q.s.p. neutraliser.

100 cc. d’acide azotique N/10.

o gr. 20 de nitrite de soude.

Nous portons au bain-marie bouillant 45 minutes. Le

volume est alors, en général de 102-103 cc. Nous portons au pH 8,6. Nous constatons au comparateur qu’il faut pour cela ajouter à 5 cc. de la solution albuminoïde : x cc. 3 de NaOH à 5 %. Nous obtenons donc un volume total de 6 cc. 3. Nous portons au colorimètre de Duboscq. Nous obtenons les résultats suivants :

HAUTEURS EN MILLIMÈTRES Solution albuminoïde Sol. de m. nitrophénol pure NAT H’ Calcul :

Comme la solution de métanitrophénol est à 100 mg. pour 1.000 cc., on peut dire que la teneur x, de ces 6 cc. 3 de solution tamponnée exprimée en métanitrophénol pur est donné par le rapport

x H 6,3 = ee

Or x, exprime la valeur en métanitrophénol de 5 cc. de solution albuminoïde nitrique, donc 102 cc. ont comme valeur :

LOXET OZ É

ce qui représente la valeur en métanitro-

phénol de 60 mg. de matière protéique.

Pour 100 mg. on aura donc :

Or, nous avons établi au chapitre IV que, au pH 8,6, la valeur en m. nitrophénol de 1 mg. de tyrosine est de 4,75. La quantité de tyrosine contenue dans 100 mg. de matière protéique sera donc exprimée par :

LOCTI02 XCTOO

5 X 60 X 4,75 Il est évident que le chiffre trouvé par ce procédé est arbitraire puisque la valeur en métanitrophénol calculée représente, non seulement la tyrosine, mais aussi le tryptophane, dont la valeur particulière m. nitrophénol n’est que 1,46 par milligramme.

3° Détermination de l'indice de Millon Zuwerkalow modifié (voir page 42).

Technique :

Nous opérons le mélange suivant :

Matière protéique sodée : o cc. 5, soit 10 mg. d’albu-

mine.

Acide sulfurique 7N pour neutraliser. o cc. 27 Acide acétique Le een 21CC.73 Sulfate mercurique en solution à 10 %

dans SO 2 RD RIRE PRES 2 CC:

Nitrite de soude en solution à 0,5 %. II gouttes

Nous portons au bain-marie bouillant 1 minute. Nous laissons la coloration s'établir pendant 15 minutes et nous comparons au colorimètre avec une solution de tyrosine à o ing. 4 par centimètre cube.

Nous obtenons comme résultat :

HAUTEURS EN MILLIMÈTRES Solution de matière protéique Solution étalon de tyrosine H | H

Calcul : soit x le poids de tyrosine correspondant à 10 mg. de substance protéique, on peut écrire :

H’ d’où x — 0,4 ——

et pour 100 milligrammes de matières protéiques :

4° Détermination de l'indice phénolique de Folin et Greenberg (voir page 49).

Technique :

Nous opérons le mélange suivant :

1 cc. de solution albuminoïde , soit 20 mg.

2 cc. de NaOH 5N.

3 cc. de réactif de Folin et Cioccalteu.

Eau distillée q.s.p. 50 cc.

Nous comparons au colorimètre après 2 heures de repos, avec 2 cc. d’une solution de tyrosine à o mg. 4 par centicube.