REMARQUE

Nous nous sommes demandés si les résultats obtenus

ne seraient pas plus favorables en utilisant une méthode d’hydrolyse diastasique des matières protéiques. Comme nous l'avons déjà dit plus haut, l’on serait en droit d’attendre d’une telle méthode une hydrolyse moins brutale, car le contact prolongé de la soude concentrée avec les matières protéiques pendant des périodes variant de 12 à 18 heures et pouvant même aller jusqu’à 26 heures (caséine) ne donne-t-il pas des produits de transformation susceptibles d’influer sur la réaction colorée ?

Nous avons donc pensé à utiliser une méthode décrite par Mac Farlane et Fulmer.

Méthode de Mac Farlane et Fulmer [20] Description de la technique :

Une quantité voisine de 1 gramme de matière protéique est mise à digérer pendant 10 heures à 37° avec 50 cc. d'HCI N/10 contenant o gr. 20 % de pepsine. Au bout de ce temps, neutraliser le digesté avec 5 cc. de NaOHN et ajouter 5 cc. d’une solution de trypsine à 6 % dans de la soude décinormale. Poursuivre Ia digestion pendant 24 heures, au baïin-marie, puis détruire l’activité des deux enzymes par un chauffage à 75-80° pendant 5 minutes. Acidifier le digesté avec de l’acide sulfurique, diluer à 100 cc. et filtrer. Auparavant on aura eu soin d’ajouter une petite quantité de kaolin à la liqueur de façon à obtenir un liquide clair à la filtration.

Opérer ensuite la réaction de Folin et Cioccalteu sur

une quantité de liqueur variant de 1 à 8 cc. suivant la matière protéique utilisée (voir page 97).

Remarque :

1° La digestion par enzyme introduit dans la réaction des quantités de tyrosine et de tryptophane qu’il est nécessaire de doser dans un essai préalable. Pour cela, les auteurs conseillent de faire un témoin en opérant sur les ferments en l'absence de matières albuminoïdes, mais additionnés de quantités connues de tyrosine et de tryptophane. Par différence on en déduit les quantités de tyrosine et de tryptophane contenues dans les ferments. Par la suite, au cours des différents dosages, il suffira de déduire ces dernières quantités pour connaître les chiffres exacts de tyrosine et de tryptophane contenues dans les matières albuminoïdes.

2° Les auteurs conseillent, en outre, de faire précéder la digestion trypsique de l’action de la pepsine qui a l'avantage, à leur avis, de libérer très rapidement la plus grande partie du tryptophane.

Nous avons suivi exactement cette méthode, sauf en ce qui concerne l’emploi de la trypsine. Nous avons pensé que la trypsine U. S. P. indiquée par les auteurs pouvait être remplacée sans inconvénient par une bonne pancréatine Codex ; c’est pourquoi nous nous sommes contentés d'opérer une solution de pancréatine pure à 6 % dans de la soude décinormale.

Avant d’entreprendre la séparation de la tyrosine et du tryptophane nous avons voulu vérifier si l’hydrolyse par

sm 30

ferment améliorait les résultats obtenus précédemment par les réactions de Millon, xanthoprotéique et Folin- Greenberg. Nous avons donc opéré ces trois réactions sur la liqueur d’hydrolyse, nous avons obtenu les résultats suivants, exprimés en tyrosine :

Indice de Indice Indice de Millon-Zuwerkalow| xanthoprotéique F'olin-Greenberg Hydrolyse Hydrolyse Hydrolyse

NE ou eu UE So CN p' ferment alcaline|p' ferment alcaline |p' ferment alcaline (1) () (à)

Albumine d'œuf... | 6,23 5,30 | 5,72 442 | 6,74 7,15 Gélatine ...... 0 022 HO 220120 0,229| 0,022 0,632 Caséiné. .L..000 5,73 6,09 | 5,66 6,14 | 6,32 6,35 Edestine .... ne 7S 4,04 | 3,85 4,62 | 3,64 6,17 Fibrine ......... . | 6,16 5,07 | 5,86 5,20 | 8,26 8,10

(1) Défalcation de la quantité d'amino-acides amenée par les ferments.

Sauf en ce qui concerne l’albumine de l’œuf et la fibrine pour lesquels on obtient des résultats un peu supérieurs, on constate que la méthode d’hydrolyse par ferments ne semble pas présenter, dans le cas de matière protéique isolée, d'avantages bien nets. Tous les chiffres obtenus sont de même ordre de grandeur (1) et dans ces conditions il nous semble préférable de considérer comme plus pratique l’hydrolyse alcaline ; il est en outre difficile de distinguer parmi ces trois modes opératoires, celui qui constitue le dosage le plus exact.

(1) Nous considérons la valeur obtenue pour l’édestine par la réaction de Folin-Greenberg comme aberrante.