APPLICATION AU TITRAGE DE LA SENSIBILITÉ D UN' GERME

Si la méthode HEaTzey n’est surtout utilisable en clinique que pour doser la Pénicilline de l’urine ou celle des exsudats à forte concentration, elle est, par contre excellente pour déterminer la Pénicillo-sensibilité des germes si importante à connaître. Si l’essentiel de la méthode reste le même, nous verrons que l’ensemencement peut se faire très différemment.

Méthode de la « Cup » en gélose de L. P. GArroD

Nous l’empruntons à un article de L. P. Garron et B. SUREAU illustré notamment de photographies qui mettent nettement en relief les résultats. Le principe se rapproche beaucoup de celui des méthodes utilisées pour le titrage d’une Pénicilline inconnue ; il est toujours basé sur la diffusion de la Pénicilline en gélose et la production de cercles d’inhibition proportionnels à la sensibilité du germe.

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Technique : On coule en boîtes de Pérrr le milieu approprié à la croissance du germe à étudier, gélose au sang par exemple. Deux rondelles d’environ 8 mm. de diametre sont découpées sur ce milieu avec un emporte-pièces à bouchons stérile, On dépose à la surface de la gélose l’inoeulum à étudier et on l’étale sur toute la boîte. Enfin, avec une pipette Pasteur, une goutte d’une solution faible de Pénicilline est placée dans chacune des « cups ». La concentration de la solution doit être de une unité par ce. pour l’une et de 10 U.O. par cc. pour l’autre.

FLEMING recommandait en décrivant ce procédé de sceller le fond des « cups » avec une goutte de gélose afin d'empêcher la Pénicilline de s’infiltrer entre la gélose et le fond de la boîte de PÉTRI.

On couvre la plaque et l’on met à l’étuve à 37°. Si dans le matériel étudié (du pus par exemple) il existe des bactéries sensibles à la Pénicilline, nous verrons qu’elles ne se développent pas aux alentours des gouttes de Pénicil- Eine et du diamètre de la zone d’inhibition, nous pourrons déduire le degré approximatif de sensibilité. L'emploi de gouttes de concentrations différentes est utile, car s’il existe dans le pus deux germes de sensibilités différentes dont l’un soit très sensible et l’autre peu sensible, la croissance du germe sensible est inhibée aux alentours des deux cupules, tandis que le germe peu sensible se développera autour de la goutte qui contient une U.O. par ce. Cette technique a l’avantage de permettre à la fois d’isoler le ou les germes d’une suppuration et de rechercher approximativement leur sensibilité à la Pénicilline, et cela même dans le cas d’associations microbiennes et sans qu'un diagnostic bactériologique précis ait été fait de l'affection. Il est même possible de chiffrer grossièrement cette sensibilité puisque l’on sait que la sensibilité du staphylocoque standard est de 22-24 mm. pour 1 U.O. par ce. et de 40 mm. environ pour 10 unités.

La cupule peut être placée au centre de la plaque et les germes ensemencés en rayons autour de ce centre en

os,

ensemençant en même temps deux souches de sensibilité connue, l’une très sensible, l’autre très résistante. La longueur de la zone inhibée mesure la sensibilité.

Méthode du canal. « Gutter test » de FLEMING

Lasseur, de Nancy, a fait une étude de plusieurs germes par cette méthode et il propose la technique suivante : Dans des boîtes de Pérrr de 190 mm. d ediamètre, très planes, on distribue 200 ce. de gélose à 3 % de pH 7,2. Pour éviter des gouttes de condensation inévitables avec une aussi grande masse de gélose, on garnit l’intérieur du couvercle de plusieurs disques de papier filtre. On laisse refroidir pendant environ deux heures pour permettre à la gelée d’être très cohérente et adhérente aux parois du verre afin de faciliter le découpage du canal. Celui-ci est fait à l’aide d’un scalpel stérile qui permet d’enlever une bande médiane de gélose de 20 mm. de large environ. On coule ensuite dans le canal un mélange de gélose et de Pénicilline de titre connu en les portant ensemble à une température entre 40 et 45° degrés, ce qui per met de les mélanger intimement. Deux heures après, on pratique l’ensemencement avec un tampon de coton monté sur un écouvillon stérile légèrement recourbé. Ce procédé assure un ensemencement meilleur que le fil de platine et laisse une trace visible même si les bactéries ne se développent pas. Là aussi, la sensibilité peut être grossièrement chiffrée par la longueur de la zone d’inhibition des stries et on peut comparer la souche à étudier avec des souches de sensibilité connues.

Méthode des disques de papier

Analogue à la méthode de Vixcenr, cette méthode a été adaptée par Lasseur et ses collaborateurs à l’étude des sensibilités des souches microbiennes. Il emploie des carrés de un centimètre de côté composés de plusieurs épaisseurs de papier filtre réunies par un fil, susceptibles d’ab-

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sorber 0 ce. 1 d’une dilution de Pénicilline de titre connu LEO EAIO0 UC 0:

De toutes ces méthodes, celle des cupules, qui par son ensemencement en masse du produit pathologique à étudier permet à la fois de se rendre compte de la sensibilité de tous les germes et même de les séparer, constitue la méthode de choix en clinique quand on veut donner une réponse rapide. Cependant, quand on possède la souche isolée, la méthode de dilutions que nous verrons plus loin, nous a semblé préférable, car elle permet de fixer le taux d’inhibition minimum et par conséquent la dose thérapeutique avec plus de précision.