IT. — MÉTHODES DES DILUTIONS SÉRIÉES EN MILIEU LIQUIDE
DosAcE OxFOoRD. TITRAGE D’UNE PÉNICILLINE INCONNUE
Il consiste à faire des dilutions sériées du liquide à examiner avec du bouillon et parallèlement des dilutions de l’étalon de Pénicilline. On ensemence tous les tubes avec une quantité déterminée de staphylocoques dorés et on cultive à 37° de 18 à 24 heures. On prend comme base de calcul la moyenne entre la dilution du tube dans lequel la quantité de Pénicilline est suffisante pour inhiber la croissance bactérienne et celle où l’on constate une légère pousse microbienne.
On exprime en Unités Oxford (U.0.) ou « Unités Florey » ce pouvoir antimicrobien de la Pénicilline :
Une Unité Oxford est la quantité de Pénicilline qui, dissoute dans 50 cc. de bouillon à base d'extrait de viande inhibe entièrement la pousse d’une souche étalon de staphylocoques, où encore : la quantité de Pénicilline contenue dans 1 ce. d’une solution tamponnée de Pénicilline dont l’effet est tel que 0,02 Unités par cc., inhibe la crois-
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sance d’un staphylocoque choisi une fois pour toutes. On voit done que, en principe, une Unité Oxford correspondant à la dilution de 1/50", il serait inutile de faire le dosage comparativement à une solution connue de Pénicilline. En connaissant la dilution limite active d’une Pénicilline à examiner, on obtiendra son titre en Unités Oxford en divisant cette dilution par 50. Cependant, comme le phénomène d’inhibition est susceptible de varier dans certaines limites suivant le milieu et la souche employée, le dosage fait comparativement à une gamme étalon apporte un élément de précision qui n’est pas négligeable.
Technique (1) : Les dilutions se font en eau bidistillée stérile. Le milieu utilisé peut être du bouillon mais en raïson des variations possibles, FLEMING propose de remplacer le bouillon par une solution de glucose et de peptone.
Le titrage peut se faire en deux temps : un premier titrage lache pour voir la zone de virage et un titrage plus précis.
On fait une première dilution sériée de la Pénicilline à titrer, ramenée au taux approximatif de 1 U.O. par ce. dans de l’eau bidistillée. Un ce. de ces dilutions est ensuite porté dans 9 cc. de milieu que l’on ensemence enfin avec une goutte d’une dilution d’une culture de staphylocoque standard.
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(1) Nous remercions M”° GrumBacH, de l'Institut Pasteur, qui « bien voulu nous communiquer le détail de cette technique utilisée dans son Laboratoire, ainsi que la souche de staphylocoques Londres, qui nous « permis de faire nos dosages.
