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Mettre 1 cc. de ces dilutions dans 9 ce. de bowllon. Titre final :

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Ensemencer. KHtuve à 37°. 24 heures.

La lecture se fait par rapport à une gamme étalon 1dentique réalisée avec une Péniciline de titre connu.

Pour obtenir le coefficient du titre de la solution de Pénicilline inconnue, on divise le titre de la solution par celui de la Pénicilline étalon. On divise donc le titre de la dilution du premier tube qui n’a pas poussé (de cette solution) par le titre de la dilution du premier tube qui n’a pas poussé de la Pénicilline comme étalon.

Exemple : Si pour l’étalon c’est le tube 4 qui n’a pas poussé et que pour la solution à titrer ce soit le tube 6 ; on divise 1/35 (T. 6) par 1/25 (T. 4) soit 35/25 — 1,4! Ce qui représente le coefficient de l'Unité de la Pénicilline à titrer.

On multiplie ce coefficient par la dilution faite pour obtenir le titre par ce. Soit une dilution au 1/10.000" et un coefficient de 1,4, la solution contient 10.000 X 1,4 — 14.000 U.O. par cc.

Pour faire un titrage plus serré, 1l suffit, au lieu de passer de 0 ce. à 0,5 cc. d’eau bidistillée, de placer des tubes intermédiaires, avec 0 - 0,1 - 0,2 - 0,3 etc. Le titre au lieu d’être donné à 1.000 U. près, l’est alors à 200 U.O. près pour les Pénicillines en titrant 10.000 au ec.

MÉTHODES NÉPHÉLOMÉTRIQUES L’appréciation de la pousse mierobienne qui se fait entre 16 et 24 heures, de préférence 18, peut être observée à l’œil dans le cas le plus courant. Mais plusieurs auteurs ont cherché à rendre la lecture plus précise en la mesurant au photomètre,.

C’est Forsrer qui le premier fit l’étude turbidimétrique de l’inhibition par la Pénicilline. Joszyn, en 1944, compare deux séries de tubes contenant l’un une Pénieilline étalon, l’autre la Pénicilline de titre inconnu ensemencée avec une culture de streptocoque et maintenue à 37° pendant quatre heures. Il mesure l’opacité au colorimètre photo-électrique. La comparaison des deux courbes donne la teneur en U.O.

Boxxer-Maury avec le biophotomètre enregistreur de Bonnet-Maury et Walen étudie de façon complète l’évolution de l’opacité des tubes au cours d’un titrage. La photométrie permet de définir de façon précise la dilution limite ; la densité optique du bouillon limpide étant de 0,100 environ, on considère qu’une augmentation de 10 %, soit 0,110 correspond à une pousse difficilement appréciable à l’œil. Cependant, il n’existe pas de dilution limite vraie. Celle-ci varie suivant l’heure à laquelle l’observation est faite et si l’on attend suffisamment tous les tubes finissent par pousser. D’où l’importance de l’heure de la lecture qui doit être fixée exactement. De plus, le phénomène de la croissance bactérienne en milieu contenant de la Pénicilline'ne se rapproche pas de la courbe habituelle. Boxner-Maury a montré qu'après une croissance initiale, il y a lyse, puis prolifération post-lytique. Ces différentes phases étant du reste très variables suivant le nombre de germes ensemencés. Avee des concentrations faibles, c’est uniquement la phase de croissance post-lytique qui est notée.

Ces méthodes de dilution en raison de la quantité de liquide qu’elles nécessitent (difficile à se procurer avec les liquides organiques), en raison aussi des très faibles concentrations contenues en général dans ces liquides, ne peuvent pas être employées telles qu’elles. Ce sont elles qui donnent pourtant le maximum de précision que l’on peut attendre de ces titrages biologiques. Boxner-Maury rapporte qu’en opérant convenablement, la méthode de