INFLUENCE DE CONCENTRATION EN AZOTE DANS LE LIQUIDE NUTRITIF

a) — Croissance sur milieu renfermant une dose de sulfate neutre

d’ammonium supérieure à la dose normale

Deux séries expérimentales sont faites sur milieu de CZAPEK normal, en présence de glucose (3°) et de 2°, de sulfate n. d’ammonium.

Résultats expérimentaux — L'organisme se dévelonpe normalement, mais la sporulation active se manifeste assez précocement

Les résultats sont réunis dans le Tableau V.

La disparition du glucose est complète à 143 heures environ.

Dans le liquide nutritif l'absorption du phosphore minéral suit deux phases en tous points superposables à celles sur milieu normal, le minimum du taux coïncidant avec la disparition du sucre.

Dans le mycélium le phosphore minéral s'accumule régulièrement jusqu’à l'autolyse.

Le phosphore sous forme d'esters ainsi que le phosphore lipidique et le phosphore résiduel augmentent rapidement jusqu'à la sporulation, puis durant la sporulation active il y a ralentissement et ils atteignent ensemble leurs maxima respectifs à la période de consommation totale de l’ose.

Enfin le phosphore nucléique présente une évolution en tous points comparable à celle sur milieu équilibré: dès le début de

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la croissance jusqu’à la sporulation il y a synthèse rapide, il atteint son maximum à la fin de cette période, puis durant la sporulation active il diminue lentement jusqu’à l’autolyse.

Donc en présence d'un excès d'azote dans le milieu de culture le métabolisme phosphoré de la Mucédinée n’est perturbé ni qualitativement ni quantitativement.

Les bilans de phosphore se bouclent avec des pertes de 3,72 à 9,78% pour la première série et de 2,49 à 6,027, pour la seconde série.

b) — Croissance sur milieu renfermant une dose de sulfate neutre

d’ammonium inférieure à la dose normale

Deux séries expérimentales sont faites sur milieu salin de CZAPEK normal en présence de glucose (3°) et de 0,20% de sut fate n. d’ammonium.

Résultats expérimentaux —

Le champignon se développe bien, mais on note tout d’abord une diminution du volume du mycélium par rapport à celui obtenu sur milieu normal, et, l'absence de sporulation active.

D'autre part la vitesse d'utilisation du glucose est réduite considérablement.

Les résultats sont réunis dans le Tableau VI. Le glucose est consommé totalement à 216 heures.

Dans le liquide nutritif après une rapide diminution du phosphore minéral on a une stabilisation avec maintien sur un palier jusqu’à la consommation du glucose. Le manque d'azote agissant pour stopper l'assimilation du phosphate, ce résultat est donc comparable à celui obtenu sur milieu hyper-glucosé.

Dans le mycélium le phosphore minéral évolue cumulativement comme sur milieu normal.

Le phosphore sous forme d’esters après une rapide augmentation se stabilise brusquement et diminue ensuite très lentement.

Le phosphore lipidique augmente rapidement et reste à un niveau constant jusqu'en fin de croissance.

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Le phosphore nucléique après une rapide et importante synthèse se stabilise puis diminue jusqu’à l’autolyse.

Enfin le phosphore résiduel évolue comme sur milieu normal.

Ces différents résultats sont donc qualitativement conformes à ceux obtenus sur milieu hyper-glucosé en ce qui concerne les quatre formes organiques de phosphore tissulaires. Ils le sont qualitativement et quantitativement en ce qui concerne le phosphore minéral du mycélium: ils démontrent le rôle important que joue la concentration en azote dans l'intensité de l'assimilation phosphorée.

Ainsi jusqu’à 72 heures environ l’évolution des différentes formes de phosphore dans la culture totale est absolument superposable à celle sur milieu normal mais ensuite le manque d'azote provoque une perturbation dont seul le phosphore minéral du mycélium n’en ressent pas les effets.

Les bilans de phosphore présentent des pertes comprises entre 2,14 et 5,93% pour la première série et entre 1,72 et 4,57% pour la seconde série.

c) — Discussion des résultats obtenus sur milieux déséquilibrés

en sulfate d’ammonium

Cette méthode des milieux déséquilibrés en azote a été utilisée antérieurement par SCHNUECKE [67]. Dans une première expérience il prend le double de la dose d'azote et le double de la dose de phosphore et constate que l'absorption de ce dernier par le mycélium varie peu en valeur relative, que la source azotée soit de nature minérale ( (NH,) :SO,, KNO,. ) ou de nature organique (urée). Dans une seconde expérience il utilise la dose normale de phosphore en présence du double, puis du triple de la dose d'azote (KNO,) ce qui provoque une augmentation dans l'absorption du phosphore par le mycélium en valeur relative et absolue. Nos résultats ne sont donc pas conformes à ceux de l'auteur allemand; la différence en est-elle imputable à la nature chimique de la source azotée? Il est regrettable que ce savant n'ait pas utilisé une source d'azote ammoniacale comme il l'avait fait pour ses expériences antérieures.

Si l’on examine les résultats obtenus sur milieu hyperazoté on s'aperçoit que rien n'est modifié dans l'assimilation normale du phosphore et dans la répartition de ses différentes formes

dans le mycélium au cours de la’‘croissance. En particulier l’évolution du phosphore nucléique est en tous points comparable à celle sur milieu normal, les acides nucléiques ne représentent donc pas une réserve azotée. Ce point de vue est absolument conforme aux conclusions de TERROINE et collaborateurs qui, par variation du taux de sulfate n. d'ammonium allant de 5 D. 1000 à 100 p. 1000 ne constatent aucune augmentation dans la teneur en azote des mycéliums récoltés [74]. La Mucédinée ne fait pas de réserves d'azote [72], il est donc normal que le taux de phosphore nucléique ne varie pas. Durant la sporulation on assiste encore à la dégradation progressive des nucléoprotéines se traduisant par la baisse du phosphore nucléique. Les trois autres formes organiques de phosphore se comportent comme sur milieu normal, en particulier on se rend compte que la concentration en phosphore lipidique ne dépend que de la concentration en azote dans le mycélium et non de celle du milieu extérieur [601]. En définitive, comme l’école de TERROINE l'a montré, il y a chez le microorganisme un équilibre azoté se traduisant par l'impossibilité de constituer des réserves d'azote: une dépense azotée inéluctable existe comme chez les organismes supérieurs. Cet équilibre azoté se traduit, dans le mycélium, par un équilibre phosphoré: l'organisme au cours de sa croissance doit utiliser ses protéines et en particulier ses nucléoprotéines pour couvrir ses besoins énergétiques, et la diminution du taux de phosphore nucléique représente cette dépense phosphorée inéluctable.

Si maintenant on examine les résultats obtenus sur milieu hypo-azoté on ne peut que confirmer les conclusions que nous avons émises à propos de l’évolution du vhosvhore sur milieu hyper-glucosé. A partir du stade d'inanition azotée on observe un brusque arrêt dans l'assimilation du phosphore, le mycélium doit alors dégrader ses nucléonrotéines, ses acides nucléiques et ses nucléotides protoplasmiques: le phosphore nucléique et le phosphore sous forme d’esters voient alors leurs concentrations respectives baisser. Seul le phosphore lipidique garde une valeur constante prouvant, d'une part l’inaptitude des phosphoaminolipides à servir d’aliment azoté et, d'autre part l'importance du maintien de leur intégrité.

Une seule forme de phosphore tissulaire n’a pas varié ni dans son évolution, ni dans sa concentration, c'est le phosphore minéral: il reste absolument indépendant de toute variation du rapport carbone / azote.