HISTORIQUE PARTICULIER DU P. H.B

Wright, en décembre 1900 et en mars 1901, décrit sa technique sur la possibilité de pouvoir déterminer une estimation quantitative du P. H. B. : cette technique consiste à mettre en présence dans des tubes capillaires des volumes égaux de sang et de dilutions microbiennes en suspension dans un milieu de culture.

Pendant trois jours, ces tubes capillaires sont mis à l’étuve. Au bout de ce laps de temps, on examine au microscope le nombre de colonies qui ont poussé, puis le contenu de chacun de ces tubes capillaires est étalé sur une boîte de Petri. Suivant les cas, l'on constate pour les dilutions successives un développement ou une absence totale de colonies avec toutes les transitions entre ces deux extrêmes.

Wright, à la suite des travaux d’Oppie, étudie les rapports du pouvoir antitryptique du sang avec le P. H. B.

Oppie avait démontré en 1906 que les leucocytes libèrent en se détruisant des substances annihilant le pouvoir antitryptique normal du sang; en effet le sang possède le pouvoir de neutraliser la trypsine : ainsi il suffit, pour empêcher la peau d’un opéré atteint de fistule pancréatique d’être digérée par le suc pancréatique, de la recouvrir de compresses imbibées de sang de cheval : grâce au pouvoir antitryptique, la trypsine du suc pancréatique est détruite et les escharres n’apparaïissent pas.

De nombreux auteurs (Bayliss) avaient mesuré ce pouvoir antitryptique. Un auteur anglais (Golla) a démontré également que la diminution ou laugmentation du pouvoir antitryptique était parallèle aux phases positives et négatives du P. H. B.

L'étude du pouvoir antitryptique du sang représente donc un élément de plus pour la mesure des défenses de l'organisme contre l'infection et Wright en 1917, d’une séries d'expériences sur le développement d’un bacille de la gangrène gazeuse (bacille de Welch) dans les milieux artificiels de culture, dans le sang circulant et dans le sang in vitro, tire les conclusions suivantes : le bacille de Welch ne peut se développer dans le sang que grâce à la présence : a) d’un facteur mécanique; b) d’une diminution du pouvoir antitryptique; c) d’une diminution de la réserve alcaline du sang.

Le facteur mécanique est représenté par la possibilité qu'ont ies microbes de s’agglutiner les uns aux autres et de déterminer ainsi un foyer éminemment favorable à la pullulation microbienne.

D'autre part, chez les animaux qui ont la possibilité de survivre à l'injection de bacilles de Welch, on constate une légère diminution suivie d’une augmentation de la réserve alcaline, ainsi qu’une montée en flèche du pouvoir antitryptique du sérum.

Dans le cas où l’animal ne peut survivre à l’inoculation des bacilles de Welch, on assiste à une diminution brutale de la réserve alcaline et du pouvoir antitryptique.

Ces différentes constatations ont d’ailleurs été retrouvées par Wright sur les blessés de la Grande Guerre qu’il examinait en qualité de chef de laboratoire à la station de Boulogne. Dès que la réserve alcaline et le pouvoir antitryptique diminuaient de façon à rendre acide la réaction du sang, on assistait à une pousse extrêmement rapide des colonies microbiennes dans le tissu sanguin. Pour Wright, le pouvoir antitryptique représentait pour l'organisme un moven puissant de défense contre les infections.

Les différentes techniques concernant l’étude de la R. A. et du pouvoir antitryptique ont été décrites dans le livre de Wright, écrit en collaboration avec Colebrock (Teats and capillary tubes).

En 1917, Wright constatait également que les solutions hypertoniques avaient la possibilité de retarder l’émigration leucocytaire et de diminuer le pouvoir antitryptique du sang. Repre-

Ro es

nant les études concernant la méthode de Carell et Dakin, appliquée aux plaies de guerre, il constatait que cette méthode agissait au mieux sur les plaies infectées, en faisant intervenir deux mécanismes : le premier concernant l’antiseptique faible n’altérant en rien les cellules de l’organisme indispensables à la lutte microbienne, et le second se rapportant aux éléments chimiques, ne diminuant pas d’une façon notable le pouvoir antitryptique du sang.

Wright est d’avis que dans la lutte contre l'infection, on doit chercher, d’une part à agir avec un antiseptique faible, à pouvoir modéré sur les micro-organismes et n’altérant pas les cellules chargées de la lutte contre l'infection, et d'autre part, à exciter au plus haut point les réactions phylactiques de lorganisme.

En 1919, lors de la réunion de la 5° Conférence chirurgicale interalliée pour l'étude des plaies de guerre. Wright précise tous les termes nouveaux de sa terminologie pour désigner les mécanismes de défense contre lintection. 11 dénomme, à la suggestion de Lord Moulton, Pouvoir Phylactique, le pouvoir général de défense de l'organisme. Les agents phylactiques seront representés par les leucocytes et les substances bactéricides du sang liquide. Le transport de ces agents phylactiques vers le foyer d'infection prend le nom de Cataphylaxie, Toutes conditions qui empêchent ce transport seront nommées influences anticataphylactiques. Le renforcement des réactions phylactiques devient la réaction Epiphylactique. Le foyer infectieux prendra le nom de foyer ecphylactique. Plusieurs facteurs vont réaliser ce foyer un facteur mécanique, Pagglutination des microbes, deux facteurs chimiques, la diminution du pouvoir antitryptique du sang et la diminution de la réserve alcaline.

Enfin, Wright étudie le pouvoir bactéricide du pus des plaies. IT constate que le sang provenant des plaies en voie de guérison possède un excellent pouvoir bactéricide, tandis que le pus provenant de plaies profondément infectées, présentait une diminution marquée de ce pouvoir. Sur une boîte de Petri on ensemence d’une façon homogène une culture microbienne, Sur une lamelle on dépose une goutte de pus provenant d’une plaie en bonne voie

de guérison, sur une autre lamelle on dépose une goutte de pus provenant d’une plaie profondément infectée. On retourne ces deux lamelles de façon à ce que les deux gouttes de pus soient mises en rapport direct avec la gelose ensemencée. On porte le tout à l’étuve pendant 24 heures et l’on constate que le pus provenant de la plaie à pronostic favorable détruit un grand nombre de colonies staphyiococciques, tandis que le pus provenant de la plaie infectée a favorisé le développement des colonies microbiennes.

Wright dénomme la première culture une biopyoculture ou biocytoculture, tandis que la seconde prend le nom de nécropyoculture ou nécrocytoculture,

Dans un autre article, publié en 1919, Wright précise que limmunisation obtenue par l’emploi de vaccin peut être non spécifique et cependant active. Il signale la possibilité de vacciner les sangs in vitro, et réalise la première immuno-transiusion, méthode qui aurait l'avantage, d’après lui, de pouvoir incorporer des quantités indéfinies de substances protectrices dans le sang du malade infecté.

En 1923, le même auteur donne, dans les Annales de l’Institut Pasteur, une vue d'ensemble sur les différentes méthodes de mesure du Pouvoir Bactéricide du sang.

Ces procédés peuvent être divisés en trois grandes catégories.

La première catégorie concerne les examens du sang total, la deuxième s'applique principalement au sérum, la troisième aux leucocytes et enfin une commune expérience combine ces trois procédés : c’est la méfhode chiastique, qui consiste à associer par croisement ces différents examens.

La mesure du P. H. B. est réalisée d’après Wright par la méthode des cellules-lames (Slide-Cells) particulièrement délicate et complexe.

Grâce à cette méthode, Wright précise que dans le tissu sanguin il existe deux mécanismes de défense. Le premier s'appelle Réaction Phylactique, le deuxième Réaction Epiphylactique. Ces deux réactions sont déclanchées en même temps par des concentrations diverses de suspensions microbiennes, De faibles con-

centrations ne provoquent aucune réaction de défense du tissu sanguin, des concentrations moyennes réalisent au maximum l'effet protecteur de ces mécanismes, par contre des doses plus fortes inhibent d’une façon totale le pouvoir défensif général du tissu sanguin. Les différentes concentrations produisent d’ailleurs une réaction variable ävec chaque sujet.

Grâce à cette découverte expérimentale, Wright explique ainsi le mécanisme de l’infection au cours de maladies à allure lente et de caractère chronique comme l’endocardite : le foyer écphylactique cardiaque mettrait en circulation dans le tissu sanguin au début des quantités extrêmement faibles de corps microbiens qui ne déclancheraient pas le mécanisme de défense du sang, celui-ci ne serait mis en œuvre que lorsque l’invasion du sujet aurait été profondément réalisée. Par contre, au cours de la pneumonie, l’allure cyclique de cette maladie serait due à la possibilité qu’aurait l'individu malade de pouvoir réagir grâce à des doses optima de microbes vivants, exaltant aw plus haut point les défenses de l'organisme attaqué.

Ensuite, grâce à de nombreuses expériences, Wright prouve expérimentalement que le sang a le pouvoir de détruire avec une très grande intensité et très rapidement un nombre important de microbes mis en contact avec lui. 75 °, des microbes mis en présence de cet élément sont tués instantanément. Cette mise en contact est effectuée à la température extérieure du laboratoire. Les leucocytes ont la possibilité de fournir instantanément des substances opsoniques et bactéricides.

Dans la mesure du P. H. B., la mise en contact des dilutions microbiennes avec le sang sera donc très courte, une demi-heure environ.

Grâce à sa méthode du procédé chiastique, Wright précise qu’à la suite d’une infection, le pouvoir opsonique du sérum peut être élevé, mais que lindex phagocytaire des leucocytes peut être diminué.

Wright a également attiré lattention sur l’importance des doses vaccinales à employer lors des injections de vaccin, soit au cours des infections, soit dans un but de vaccination préven-

tive, Chez tout infecté, il existe un certain nombre de microbes vivants circulant dans le sang, si l’on ajoute grâce à une vaccination un nombre supérieur à la dose maxima de défense, la vaccination, loin de produire une action favorable, peut, au contraire, déclancher une phase négative apophylactique aggravant ainsi l’état de l’infecté.

Wright a étudié aussi le P. H. B. des tuberculeux en 1924. Chez les individus normaux, les leucocytes ont la possibilité de détruire les B. K., par contre chez le tuberculeux si un certain nombre de leucocytes possèdent également cette propriété, d’autres au contraire succombent à l’attaque du B. K. et deviennent un milieu de culture favorable à cet élément. Le processus tuberculeux se trouve ainsi propagé dans l'organisme et dans les cultures in vitro réalisées par Wright, cet auteur a constaté la formation de petites géodes du milieu de culture, dues à lattaque du B. K. sur les éléments constitutifs du tissu sanguin.

Depuis Wright, plusieurs auteurs français ont également étudié le P. H. B. Boez et Marneffe ont montré en 1933 que le pouvoir bactéricide du plasma et du sang total est étroitement fonction de la réaction du milieu, intense au-dessous d’un P. H. de 7,5, il décroît rapidement dans la zone du P. H. normal et disparaît au-dessous d’un P. H. de 7,2.

Ces auteurs ont également étudié l'influence de la concentration saline (NaCD sur le P. H. B. Le P. H. B. a son intensité maxima pour des concentrations en NaCI isotoniques comprises entre SetlON/ environ, en deca etau-delèrde cette/Zone, let P"H°B. diminue. En milieu hypotonique, il décroît au fur et à mesure que l’on tend vers la concentration saline zéro ; l’eau distillée est nettement défavorable à la bactériolyse. En milieu hypertonique, le pouvoir bactéricide est rapidement aboli dès que la concentration en NaCI dépasse 18 p. 1.000. Au taux de 25 et 30 p. 1.000, le NaCI se révèle comme un puissant agent de destruction du pouvoir bactéricide.

Brunberg, Mutternilch et F. Agasse-Lafon ont étudié de leur côté l’action du citrate de soude sur le pouvoir bactéricide du sang humain. Pour ces auteurs, le citrate de soude employé à

‘) Bonnet,

des concentrations de 20 p. 1.000 diminuait considérablernent le P. H. B., à 30 p. 1.000 ce dernier disparaissait complètement. Le résultat pratique de ces recherches est le suivant : quand le sang est recueilli pour une hémoculture, si l’ensemencement en bouillon ne peut être immédiat, il convient de citrater dans des conditions telles que la proportion de citrate de soude atteigne le taux de 30 p.,1.000 dans le mélange. En réalisant cette condition, on a Ja certitude que dans les septicémies du groupe colitvphique, par exemple, la culture ne sera pas empêchée du fait de l’action bactéricide que possède le sang puisque celle-ci est détruite par le citrate de soude au taux de 30 p. 1.000. Tout récemment, ces auteurs ont fait paraître un important travail résumant le résultat de leur recherche sur le P. H. B. et les applications pratiques qu'ils tirent de leur méthode concernant la diminution du P. H. B. au cours des hémocultures.

Carnot et Henri Lavergne ont étudié les modifications apportées au P. H. B. par le citrate de soude et leurs chiffres s’éloignent très peu de ceux trouvés par Brunberg, Mutternilch et F. Agasse-Lafon.

En 1935, Wulff étudie l'influence de la fièvre sur le P. H. B. Dans 15 sérums sur 27 provenant de fébricitants, il a pu isoler une substance thermolabile de structure particulièrement complexe, bactéricide pour le bacille parathyphique. Cette substance spéciale peut représenter jusqu'à 10 % des substances bactéricides du sérum. Cet auteur a démontré également que le pouvoir bactériolytique d’un sérum fébrile était notablement plus élevé que celui d’un individu apyrétique. Ces constatations corroborent les résultats obtenus par MM. Jeanneney, Castanet et Cator sur augmentation du P. H. B. au cours des accès fébriles.

P. Courmont et H. Gardère ont étudié la valeur pronostique du P. B. du sérum dans la tuberculose pulmonaire. Ces auteurs ont démontré depuis longtemps l’action bactéricide in vitro des sérosités de pleurésies tuberculeuses, puis du sérum sanguin pour le B.K,

En 1929, dans leur mémoire à l'Académie de médecine sur les variations du P. H. B. sur le B. K., ils montraient la valeur dia-

gnostique et pronostique de cette réaction. Dès cette époque, ils concluaient que chez un tuberculeux pulmonaire, un P. B. S. élevé était un signe de bon pronostic et inversement qu’un P. B. S. nul entraînait un mauvais pronostic. Ils prennent le mot bactéricide dans son sens le plus général, l’action du sérum se manifestant, tantôt par un arrêt où un empêchement complet des cultures, tantôt par la mort des bacilles ensemencés. Chez l’homme adulte normal indemne de toute lésion tuberculeuse en activité, le sérum est légèrement bactéricide (+ 2), chez le tuberculeux le P. B. S. peut s’élever à + 4 et même + 8. Ces chiffres indiquent un pouvoir bactéricide du sérum fort, mais certains tuberculeux ont un P. B. S. qui tombe même à 0. Sur 35 malades examinés, la mortalité était de 52 °/, dans le lot des 21 malades à P. B. S. faible, alors qu’elle n’était que de 12,5 % dans le lot des 16 malades à P. B. S. fort.

Ils signalent également qu'une seule injection de sels d’or suffit à déclancher une augmentation importante du P. B. S.

ÉTUDE DU P. H. B. CHEZ LA FEMME ENCEINTE SUI- VANT LA TECHNIQUE DE M. LE PROFESSEUR JEAN- NENEY ET DE MM. CASTANET ET CATOR.

Le P. H. B. a été recherché chez les femmes entrées au cours de leur grossesse dans le service de M. le Professeur Pery et de de M, le Docteur Balard. Nous les remercions tout particulièrement de nous avoir permis d'examiner ces différentes malades.

Les résultats sur lesquels nous nous basons reposent sur 100 femmes.

Nous avons mesuré le P. H. B. chez 25 femmes suivant des délais qui s’échelonnent de 1 à 45 jours avant l'accouchement; 25 autres femmes ont été étudiées au moment même du travail; enfin 25 autres ont été surveillées après leur accouchement et les prélèvements sanguins ont été réalisés de 2 à 45 jours après Paccouchement.

Enfin nous avons recueilli aseptiquement le sang de 25 cordons.

Nous avons examiné le P. H. B. chez plusieurs parturientes en état d’éclampsie. Nous avons pu aussi étudier le P. H. B. de 18 femmes présentant des phlébites et des accidents infectieux divers. Nous avons procédé également à un examen de la flore microbienne cervicale de 20 parturientes.

La mesure du P. H. B. a été effectuée grâce à la méthode de M. le Professeur Jeanneney et de MM. les Docteurs Castanet et Cator. Cette mesure est étalonnée par rapport au staphylocoque doré. Le staphylocoque a été choisi pour les raisons suivantes :

Ce microbe ne présente pas de variations de virulence de souches aussi marquées que le streptocoque. On peut donc parler

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de virulence moyenne, La souche employée pour nos recherches provenait d’un anthrax d’un malade atteint de staphylococcémie. Cette souche était régulièrement repiquée et sa virulence contrôlée; on peut donc parler d’un étalon précis, tandis que certains auteurs mesurent le P. H. B. non avec une même souche, mais avec des germes prélevés sur le malade et dont le nombre et la virulence peuvent, on le sait, varier considérablement d’un jour à l’autre et d’un point de prélèvement à l’autre, Ainsi procèdent Fajerman et Van Damme qui prélèvent une ôse de sécrétion septique et la mettent en contact avec du sang défibriné du malade. On se rend aisément compte que l’imprécision de leur technique ne permettait guère d’obtenir de plus riches résultats que les quelques faits qu'ils signalent.

D'autre part, nous avons choisi le staphylocoque parce que tous les microbes ne peuvent servir à mesurer le P. H. B. En effet, Wright classifie les microbes en deux catégories : les sérophytes (staphylocoques et streptocoaues) qui ont toujours la propriété de se développer dans le tissu sanguin et les sérosaprophytes qui n’acquièrent qu’accidentellement cette propriété.

Ceci exposé, voici comment nous procédons pour mesurer le pouvoir hémo-bactéricide d’après la méthode de MM. Jeanneney, Castanet et Cator :

1° On recueille de 3 à 10 cc. de sang à examiner, et on le

citrate aussitôt à 1 % (fig. 1).

2° On prépare des concentrations décroissantes d’une culture

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