I. — ACTION SUR LES HYDRATES DE CARBONE

Pour étudier l’action des deux Proteus sur les hydrates de car-

bone, j'ai employé comme milieu de l'eau peptonée à laquelle

(1) Depuis que j'ai terminé mes expériences, M! A, Horowitz a publié une intéressante étude sur de nombreux échantillons de Proteus vulgaris isolés à Petrograd au cours d’une épidémie de gastro-entérite aiguë (Annales de l'Institut Pasteur, 7 juillet 1916). Elle a étudié leur action sur les sucres et leur pouvoir indologène; mais, comme elle ne donne aucun détail sur les conditions dans lesquelles ont été eflectuées ses recherches, il m'est impossible de comparer les résultats que j'ai obtenus avec les siens. Ses constatations doivent résulter de l'emploi des méthodes imprécises qu'emploient la plupart des bactériologistes quand ils étudient les propriétés biochimiques des microbes, car elles ne diffèrent pas de celles qui ont été publiées antérieurement au travail de Herter et Ten Brœck.

D) Peer

J'ajoutais une quantité variable d’un aliment hydrocarboné et un excès de carbonate de calcium. Pour la préparation de cette eau peptonée Je n'ai pas pris n'importe quelle peptone, et c’est intenuonnellement que j'ai fixé mon choix sur la peptone pancréatique de viande de Defresne. Trop souvent, les bactériologistes oublient que les peptones commerciales sont des produits de constitution variable, dans la composition desquelles entrent des composés de uature très diverse suivant le mode de préparation et la substance protéique utilisée. Certaines peptones ne renferment que des albumoses, d’autres une petite quantité de peptones vraies avec beaucoup d’albumoses, d’autres enfin sont constituées à la fois par des acides aminés libres, des polypeptides et des peptones vraies; il n'est donc pas indifférent d'employer telle ou telle marque et l’on ne doit fixer son choix qu'après avoir précisé l’origine et la nalure des peptones dont on dispose. Pour l'étude des propriétés saccharolytiques d’un microbe comme le Proteus, ce choix présente même une importance particulière ; en eflet, le Proteus est capable à la fois d'attaquer les substances albuminoïdes et certains hydrates de carbone ; mais ce qui Pemporte chez lui, c’est le pouvoir destructif des protéiques. Non seulement il peut produire à leurs dépens des amino-acides, mais même désaminer ces derniers ; quand on met donc à sa disposition à la fois un hydrate de carbone et un dérivé peu dégradé de l’albamine, une grande partie de son énergie est employée à la digestion du protéique, tandis que, si on lui fournit avec l'aliment hydrocarboné le résultat d’une hydrolyse déjà très avancée d’albumine, il n'aura plus à dépenser autant d'activité pour simplifier aliment azoté et une plus grande énergie sera appliquée à l’attaque de l’hydrate de carbone.

Pour le but que je me proposais, j'ai donc été amené à rechercher parmi les peptones commerciales celles qui étaient les plus dégradées; j'ai donné la préférence à la peptone Defresne parce que j'ai pu m'assurer qu'elle était préparée en soumettant simplement la viande de boucherie à la digestion pancréatique, et que J'ai vérifié, par le brome et la tyrosinase, qu’elle renfermait bien du tryptophane et de la tyrosine libres. J'aurais pu, ilest vrai, utiliser un produit de digestion infiniment plus avancée, tel que ces préparations commerciales obtenues en soumettant de la viande à l’action de la trypsine et de l’érepsine pendant un temps très long, préparations que certains chimistes allemands ont proposées pour

l'alimentation par voie rectale des malades et des nourrissons débiles; mais je m'en suis abstenu pour deux raisons : d’abord parce que je tenais à ne pas trop m’éloigner des conditions dans lesquelles se sont placés les auteurs qui ont déjà étudié Les propriétés saccharolytiques des Proteus, et ensuite parce que ces produits éreptiques sont trop souvent souillés de substances qui résultent non plus de l’action des diastases digestives, mais bien de celle des microbes sur les acides aminés (45), substances que Je ne voulais pas introduire dans mes milieux, qu’elles auraient peut-être pu rendre moins propres au développement du Proteus.

Pour préparer l’eau peptonée dont je me suis servi dans les expériences qui vont suivre, je dissolvais 2 pour 100 de peplone dans de l'eau distillée et je portais cette solution à l’'ébulliuon pendant à minutes en présence d’une petite quantité de carbonate de calcium précipité, bien exempt de carbonate de sodium. Je filtrais le liquide bouillant et, à l’aide d’une solution de soude au , j'achevais de le neutraliser exactement au tournesol.

GLUCOSE.

Je me suis servi de glucose purifié par trois eristallisations suecessives dans l'alcool méthylique. En opérant à l’aide d'une fiole jaugée, J'ai dissous 95,8 du sucre dans de l’eau peptonée et amené la solution au volume de 350%"; ce milieu titrait donc approximativement 2,8 pour 100 de glucose.

J'ai préparé alors six fioles coniques d'Erlenmeyer eu verre de Bohème, de 125*%, dans chacune desquelles j'ai placé environ 18,20 de carbonate de calcium pur précipité léger (1) bien tamisé. Après avoir filtré sur papier le milieu sucré, je l'ai réparti dans les six fioles en introduisant dans chacune d'elles 50°" de solution mesurés très exactement, à l’aide d’une pipette à deux traits: ja alors bouché les fioles avec du coton cardé et, après les avoir recouvertes d’un capuchon épais de papier à filtrer, ficelé sur leur col, je les ai stérilisées à 1 13° pendant 30 minutes. Chacune d'elles

() Au sujet des caractères physiques que doivent présenter les carbonates de calcium destinés à la saturation de petites doses d'acides faibles, voir le récent travail de A. Berthelot dans le Bulletin général de Thérapeutique, avril 1917, page 454.

contenait donc exactement la même quantité de glucose, quantité voisine de 15,40.

Je les ai ensuite abandonnées 24 heures à létuve à 35° alin de m'assurer de la stérilité du milieu, puis je les ai étiquetées ainsi :

Deux fioles : Glucose-Témoin ; 2° Deux fioles : Glucose-Proteus V;

3° Deux fioles : Glucose-Proteus M.

J'ai alors laissé telles quelles les deux fioles témoins et jai ensemencé les quatre autres avec le Proteus correspondant aux indications de l'étiquette, puis après avoir remis les capuchons, j'ai placé les six fioles côte à côte à l’étuve à 37°.

Le lendemain le milieu était très louche dans les fioles ensemencées et parfaitement clair dans les autres ; avec beaucoup de précaulions Je les ai agitées deux fois circulairement, toutes les six el chaque Jour; pendant O jours j'ai répété cette agitation. Le dixième Jour, après avoir vérifié une dernière fois la parfaite limpidité du milieu témoin, je les ai retirées de l’étuve; j'ai séparé une fiole de chaque sorte pour les conserver à la glacière en cas d'accident, et J'ai conservé les autres pour y doser le glucose.

Pour doser ce sucre je me suis servi du procédé volumétrique de G. Bertrand (46).

J'ai donc préparé tout d’abord les quatre solutions suivantes :

A. — Liqueur cuivrique.

Suate den one ans 6660060000 405 mue. 1 BanRdiStLlÉe RARES AD Ce Ce hoteo à 1

B. — Liqueur sodique.

Solide seimnelte "0e T0 000 30m 200$ Soude caustique en plaques Gi Méooeore M Haudisullée ds" p..........-0.7, 1

CG. — Liqueur ferrique.

SUITE TIQUE enr eeee Per CC 50% ACidesuliuriquete. #0. On HOENNRES Ce 200% HARAS MIE MANS SD PE ETC C0 le

(:) On peut remplacer la soude en plaques par 375tm° de lessive de soude à 36°B.

Ve M:

Soie

D. — Liqueur permanganique.

Permanganate de potassium........... 0Ë ni Ts cTIZ 1 Haundistillée AS AD EEE CEE ERRE PC I

J'ai additionné la liqueur ferrique de quelques gouttes de la liqueur de permanganate, jusqu'à ce qu’une goutte ait donné une très légère teinte rose à peine perceptible, mais permanente.

J'ai alors titré très soigneusement la liqueur permanganique à l’aide d’une solution préparée avec de loxalate d’ammonium très pur et possédant seulement son eau de cristallisation; dans la suite j'ai vérifié de temps en temps son titre.

J'ai procédé alors de la façon suivante au dosage du glucose contenu dans la fiole de milieu témoin et dans chacune des deux autres : je filtrais sur un peut filtre à plis en papier le liquide à examiner et, avec de l’eau distillée chaude, je lavais avec soin la fiole, le filtre et le carbonate de calcium afin de bien rassembler tout le sucre dans le filtrat. Après refroidissement de celui-ci Je le déféquais par le procédé de Patein (47) en l’additionnant d'un excès de liqueur de nitrate mercurique (!) et en ajoutant alors goutte à goutte une solution de soude jusqu’à réaction neutre au tournesol. Je filtrais en épuisant soigneusement le précipité avec de l’eau distillée chaude et j'introduisais dans le filtrat de 8$ à 10$ de poudre de zinc. J’agitais souvent le mélange pendant 3 heures et au bout de ce temps je m'assurais de l’absence complète du mercure en mettant une goutte du liquide sur une lame de cuivre récemment polie et exempte de toute trace de corps gras, el en constatant que celle-ci n’était pas tachée de gris; je filtrais toujours avec beaucoup de soins pour ne pas perdre de sucre, et j'épuisais le dépôt avec de l’eau disullée chaude. J’additionnais la liqueur filtrée de lessive de soude jusqu’à neutralisation au tournesol et je filtrais une dernière fois pour séparer l’hydrate d'oxyde de zinc en observant toutes les précautions nécessaires pour ne rien perdre du glucose. Je recueillais la liqueur provenant du témoin dans un ballon jaugé de 500%, et je complétais avec de l’eau distillée jus-

() Pour la formule de cette liqueur, voir G. DENIGÈs, Chimie analytique, 1913, p. 1179, ou Dorvauzr, L'officine, 1910, p. 86, ou encore Albert MOREL, Précis de technique chimique à l'usage des laboratoires médicauæ, 1909, p. 334.

BAR qu'au trait de jauge, puis j'agitais pour obtenir une solution bien homogène.

Quant aux liqueurs des cultures, je les recevais dans des fioles non jaugées, car Je devais les concentrer sous pression réduite.

Les trois liqueurs étaient ainsi complètement débarrassées de toutes les substances qui s’opposaient au dosage du glucose par le procédé de G. Bertrand. J'ai alors prélevé de la liqueur correspondant à la fiole témoin 20°" que j'ai versés dans une fiole d'Erlenmeyer de 150°%, en y ajoutant successivement 20°" de la liqueur cuivrique À et 20°" de la liqueur sodique B. J’ai chauflé alors la fiole jusqu’à ébullition du contenu, ébullition que j'ai maintenue exactement 3 minutes à partir du dégagement des premières bulles, mais en évitant qu’elle soit trop vive pour ne pas concentrer exagérément le liquide.

J'ai alors retiré la fiole du feu et J'ai laissé quelques instants se déposer l’oxydule de cuivre, puis J'ai passé le liquide sur un filtre grande importance, je reproduis ici textuellement les indications données par G. Bertrand (?).

-« Pour la filtration, on se sert d’un tube à amiante genre Soxhlet,

d'amiante (!). La bonne confection de celui-ci ayant une

monté à l’aide d’un bouchon de caoutchouc sur une fiole conique, pas trop épaisse, de 10°" de capacité. On fait le vide dans la fiole par l'intermédiaire d’une tubulure latérale. Le tube à amiante a 14° de longueur totale. La partie supérieure, de 6°" de longueur et de 17°" environ de diamètre, est cylindrique. Ce tube est assez fortement étranglé pour retenir l'amiante et se prolonge au-dessous de l’étranglement par une partie tirée en cône, qui rentre dans le bouchon de caoutchouc. On obtient un bon filtre en opérant comme il suit : on choisit de l’amiante en grosses fibres un peu dures et l’on en fait une pelote sphérique, du diamètre du tube, que l’on pousse jusqu’à l’étranglement, en la pressant un peu. Au-dessus, on place une petite couche d’amiante beaucoup plus fine, obtenue en broyant de l'amiante ordinaire, à fibres douces,

(!) Bien entendu, dans tous mes dosages de sucres, je n'ai effectué la filtration qu'après avoir constaté, par la coloration, que la liqueur, après ébullition, renfermait encore un large excès de cuivre.