GÉLATINE

J'ai employé comme gélatine la sorte commerciale que l’on utilise habituellement dans les laboratoires de bactériologie. Mon milieu présentait la composition suivante :

GÉANT RE TOR T OS So do don 100% Phosphate bipotassique see ee CS 25 Sulfate dé magnésium cristallise.. 16 Chloruretdercalelum riens als 0%, 02 Acides aminés de l'hydrolyse chlorhydrique de la caséine.. 58 Eau distiliée ue pe se OMR %

Pour le préparer j'ai mis la gélatine dans une marmite avec. de l’eau, J'ai ajouté les autres substances, et j'ai maintenu au bain-marie bouillant jusqu’à complète dissolution de la gélatine. La liqueur bien chaude, neutralisée à la soude, a été alors filtrée au papier Chardin. J'ai agité le milieu ainsi obtenu pour le rendre bien homogène, puis je l’ai distribué par portions de 100°% dans six fioles coniques de 250°"", que j'ai bouchées au coton cardé et coiflées d’un capuchon en papier à filtrer. Je les ai stérilisées deux jours de suite pendant 20 minutes à 100° à l’autoclave ouvert.

Ses

Après 48 heures de séjour à 37°, ayant vérifié que toutes les fioles étaient stériles, j'en ai ensemencé quatre avec les deux Proteus, et je les ai placées, à côté des fioles témoins, à l’étuve à 37° où elles sont restées pendant 15 jours. Chaque fiole était agitée tous les Jours. J'ai analysé en même temps le contenu d’une fiole témoin et celui d’une de chaque microbe, les doubles étant mises en réserve à la glacière.

Pour les dosages j'ai procédé de la manière suivante :

J'ai étiqueté trois vases à précipiter de 200°"" et, dans l’un d’eux, J'ai mis 10°% de milieu témoin mesurés à la pipette à deux traits; J'ai agi de même pour les deux cultures et j'ai additionné chaque prise d’essai de 90°" d’eau distillée. Après avoir rendu les liquides homogènes au moyen de courts agitateurs, je les ai précipités par un excès de la liqueur suivante soigneusement filtrée :

AE O ORAN OP EE 200€m° INCITEMDICRIAUC eee cree eee 105

RO TO RO ER A ee er ee SOLS NCIAÉRACE QUE PER ec DOS

Après avoir mis dans chaque vase un excès de ce réacuf et bien agité, J'ai laissé en repos jusqu'au lendemain. J'ai alors filtré chaque liquide sur deux filtres équilibrés placés l’un dans l’autre et, après avoir constaté encore une fois l'absence de précipité

F cm* J

dans ce liquide par le réactif picrique, j'ai lavé trois fois (7 à chaque reprise) avec le même réactif chaud. Je me suis assuré pour chaque essai que la liqueur qui filtrait chaude ne se troublait pas par le refroidissement. Après quoi j'ai encore lavé vases, filtres et précipités avec de l'alcool à 95°, jusqu’à ce que les liqueurs aient passé incolores, ce qui a demandé un grand nombre de lavages. J'ai alors placé dans l’étuve à 100°-105° les vases à filtration chaude auxquels adhéraient une partie des précipités, leurs agitateurs respectifs, les entonnoirs et les filtres qu'ils supportaient; après 2 heures de dessiccation je les ai placés dans le vide sulfurique jusqu'à poids constant. J’ai noté pour chaque dosage : 1° le poids du vase à précipiter avec son agilateur et son contenu ; 2° le poids du précipité recueilli sur le filtre laré. Puis, avec le plus grand soin, J'ai lavé avec de l’eau chaude additionnée de soude chaque vase et son agitateur; je les ai rincés plusieurs

fois à l’eau distillée chaude et je les ai séchés à l’étuve à r00°-105° pendant une demi-heure. Après séjour dans un dessiccateur, sur l'acide sulfurique, j'ai déterminé leur poids qui m'a permis de calculer celui du précipité resté adhérent et par conséquent d'établir celui de la gélatine coagulée dans chaque essai par le réacuf picroformolé.

Les résultats ont été les suivants :

Gélatine dans 100% de milieu.

MileuttéMoLn, CORCRPPCERRS RES LL 02 Culturetde PO TEUSINEEEEEERE EEE 11,99 Culturetde Pr51eus IMPR PERERCEE 1,90

En réalité, la gélatine pesée est à l’état de combinaison avec les réactifs employés, mais les trois dosages ayant été effectués exactement dans les mêmes conditions, les résultats sont sensiblement les mêmes que si J'avais pesé de la gélatine pure. Ils suffisent en tout cas pour montrer que le Proteus V attaque à peine la gélaune (0,59 pour 100), tandis que le Proteus M détruit 84 pour 100 de cette substance lorsqu'on lui en offre un excès.

ALBUMOSES.

Pour étudier l’action de mes deux Proteus sur les albumoses Je me suis contenté de les cultiver dans une solution de « peptone de Witte ». J'ai préparé mon milieu en dissolvant 205 de ce produit dans de l’eau distillée; j'ai neutralisé au tournesol avec de l'acide chlorhydrique étendu ("), complété à 2 litres et enfin filtré sur papier. J'ai réparti la liqueur dans six ballons d’un demi-litre, à raison de 250% par ballon, et Je l'ai stérilisée à 115° pendant 20 minutes. J’at alors placé les six ballons à l’étuve à 37° et, au bout de 24 heures, après avoir vérifié leur stérilité, j'en ai ensemencé quatre, gardant les deux autres comme témoins. Je les ai mis côte à côte à l’étuve, et c'est dans le témoin et les cultures

ayant séjourné 10 jours à 37° que j'ai dosé les albumoses.

(1) Au contraire de la peptone du Codex qui est neutre et de celle de Defresne qui est acide, la peptone de Witte est alcaline.

Pour cela j'ai prélevé du témoin et des deux cultures 25°% que J'ai introduits dans des capsules de porcelaine contenant chacune 2% de magnésie fraîchement calcinée. J'ai placé ces capsules sur un bain-marie bouillant en agitant continuellement pour chasser l’ammoniaque et les amines résultant de la destruction des albumoses (il est clair que dans le témoin il n'y avait pas de protéoses détruites, mais il était indispensable de le soumettre aux mêmes opérations que les cultures). Quand la dessiccation fut aussi complète que possible, j'ai délayé peu à peu le résidu dans 25°% d’eau distillée et j'ai remis Le tout au bain-marie en agitant constamment jusqu’à siccité.

Dans cet extrait j'ai dosé lazote par le procédé de Kjeldahl de manière à pouvoir calculer le poids de celui qui s'était volatilisé au bain-marie, Pour cela j'ai transvasé dans des ballons spéciaux de 125°% en verre d’Iéna la matière sèche contenue dans chaque capsule; puis pour entraîner les dernières traces de matières azotées j'ai mis dans chaque capsule vide 1° d’eau distillée avec laquelle j’ai lavé avec soin les parois, en m'’aidant d’une spatule en platine. Après quoi j'ai ajouté dans chaque capsule 0$,50 de magnésie calcinée et, au bain-marie, en agitant constamment, j'ai desséché le mélange bien homogène que j'ai réuni à la portion déjà Imtroduite dans le ballon respectif. Dans chacun de ces ballons d'attaque j'ai versé peu à peu et en agitant constamment 20% d'acide sulfurique concentré préalablement reconnu exempt d’ammoniaque; j'ai ajouté une goutteleite de mercure, et j'ai placé sur l'ouverture du col de chaque ballon une ampoule sphérique terminée à la partie inférieure par une pointe effilée fermée. Jai bien agité les ballons et je les ai placés sur une rampe de Debray en les inclhinant d'environ 35° à 40° sur la normale. J'ai chauflé doucement de manière à obtenir une ébullition assez faible pour qu'il n’y ait pas de vapeurs à l'extérieur du ballon. J’ai maintenu cette ébullition encore 20 minutes après la décoloration des liqueurs, puis je les ai laissé refroidir jusque vers 50° el Jai introduit dans chaque ballon en agitant sans cesse de petites parcelles de permanganate de potassium en poudre jusque ce qu'un léger excès de ce sel ait déterminé une faible coloration persistante.

Après quoi, J'ai versé d’un seul coup dans chaque ballon do

d’eau distillée vérifiée exempte d’ammoniaque; les cristaux étant

En ot

dissous, j'ai transvasé le contenu de chaque fiole d’attaque dans un grand ballon à fond rond de 1!,5 en verre de Bohème. A l’aide de trois lavages à l’eau distillée par chaque dosage, J'ai fait passer dans le grand ballon à distillation tout ce qui pouvait rester d’ammoniaque dans la fiole en verre d’Iéna. À ce moment j'ai introduit dans la liqueur sulfurique un léger excès d’hypophosphite de sodium pour assurer la réduction complète du mercure, puis 300% d’eau distillée et une petite quantité de ponce en poudre (). Après refroidissement de la liqueur, j'y ai ajouté d’un seul coup 100% de lessive de soude à 36° B. exempte d’ammoniaque et J'ai immédiatement adapté le ballon de distillation à un réfrigérant de Schlæsing-Aubin dans lequel la circulation d'eau était déjà établie et dont le tube abducteur plongeait dans 20° d'acide sulfurique cinquième normal (95,80 de SO‘H? par litre) contenus dans un verre à expérience de 355‘ et additionnés d'une goutte de solution d’hélianthine. Ayant ainsi opéré de manière à éviter toute déperdition d’ammoniaque, j'ai distillé en maintenant une ébullition bien régulière jusqu’à ce que j'aie pu vérifier l'absence complète d’ammoniaque dans le liquide qui s’écoulait du réfrigérant, J'ai alors titré à l’aide de la soude cinquième normale l'acide sulfurique non saturé par l’ammoniaque distillée el pour les trois échantillons j'ai obtenu les résultats suivants auxquels il n'y a pas eu lieu de faire subir de correction. car une distillation à blanc m'avait montré que les réactifs étaient rigoureusement exempts d’ammoniaque :

Acide nécessaire pour saturer AzH3 de 55°m° de milieu.