A/S TE

repos j'ai souliré la couche aqueuse dans une boule à décantation identique et recueilli l’éther dans un flacon recouvert de papier noir. J'ai alors continué l'épuisement en passant d’une boule à l’autre et en employant à chaque fois 20% d’éther, ce dissolvant étant à chaque lavage réuni aux portions précédentes dans le flacon couvert de papier; après chaque agitation Jj'ajoutais quelques gouttes d'alcool pour briser l’émulsion et faciliter la séparation des deux couches. Après neuf épuisements j'ai recherché lindol sur deux gouttes de l’éther à l’aide du diméthylaminobenzaldéhyde; il y en avait encore, mais au onzième épuisement le réacuf ne donnait plus aucune coloration. J'ai conservé la culture épuisée dans la boule où elle se trouvait afin d’en extraire l'acide indolacétique.

J'ai lavé à trois reprises, avec 15°" d’eau distillée, l’éther chargé d'indol, puis je l'ai introduit dans un ballon à fond rond de 50o°""; J'ai rincé à l’éther la boule à décanter dans laquelle il se trouvaitet J'ai ajouté ce dissolvant à la partie que J'avais versée dans le ballon. J'ai adapté celui-ci à un réfrigérant descendant et j'ai disullé Péther au bain-marie, en évitant soigneusement de dépasser 38°; J'ai poursuivi la distillation jusqu’à ce que tout l’éther ait été chassé du ballon. Ayant vérifié que l’éther qui avait distillé ne renfermait pas d’indol, j'ai versé 400% d’eau disullée sur le résidu de la disuillation resté dans le ballon et J'ai adapté celui-ci à un réfrigérant descendant; le ballon étant placé sur une toile métallique garnie d'amiante, j'ai distillé en maintenant une vive ébullition jusqu’à ce que la moitié du contenu du ballon ait passé. À ce moment j'ai recherché l’indol sur 1°" du liquide qui s’écoulait du réfrigérant; ayant constaté qu'il ne donnait aucune coloration avec le réaelif au diméthylaminobenzaldéhyde et que par conséquent tout l’indol était entrainé, j'ai arrêté la disullation.

J'ai alors épuisé par l’éther purifié le distullat ainsi obtenu en employant à chaque fois 30°" de dissolvant et en me servant alternativement de deux boules à décanter; je me suis arrêté au cinquième lavage ayant constaté que tout lindol avait été enlevé par le dissolvant. J'ai réuni les diverses poruons de celui-ci dans une fiole jaugée de 200" et, après avoir complété à ce volume par de l’alcool pur, puis agité, J'ai versé la solution éthéro-alcoolique dans un flacon sec entouré de papier noir.

Pour pratiquer le dosage colorimétriqué de lindol j'ai introduit successivement dans un tube à essai bien sec :

1° 5° de la solution éthéro-alcoolique provenant de la culture de V;

29 4% d'alcool absolu ;

3° 6% du réactif au diméthylaminobenzaldéhyde HA

Le mélange à pris immédiatement une belle teinte rouge violacé.

Dans un autre tube sec j'ai préparé le mélange étalon suivant :

1° 5% d’une solution alcoolique d’indol pur et sec à 15 d’indol pour 3 litres d'alcool à 96°;

2° 4% d’éther purifié;

3% 0% du réactif.

La coloration de cette liqueur était identique à celle de la précédente.

Après avoir bien agité ces deux solutions colorées je les ai introduites dans les godets d’un grand colorimètre de Pellin, préalablement réglé dans de bonnes conditions d'éclairage. Jai

égalisé les teintes à trois reprises en laissant reposer mes yeux <

5 minutes entre les diverses lectures.

J'ai obtenu les chiffres suivants :

Epaisseur de la liqueur étalon .......... 44,5 divisions Epaisseur de latliqueure Ve FR eee PRES 48 »

La quantité d’indol contenue dans les 5°" de liqueur à analyser est égale à celle contenue dans 5°" de la liqueur étalon mulupliée

44,5 tenue dans les 00°" de solution éthérée correspondant à 100°% de

44,5 . : Se Par 7 soit 0,00166 %X et par conséquent la quantité con-

culture est

Ne OO 00 0,00166 x +1 —

c’est-à-dire 0,00166 X 44,5 X 40

— 0,0616 d'indol.

em

100°" de milieu contenant 0$,20 de tryptophane, et 1# de cet amino-acide donnant 0$,5535 d'indol, il s'ensuit que le Proteus V a transformé en indol 53,7 pour 100 du tryptophane qu'il avait à sa disposition, tandis que le Proteus M n’en a pas produit du tout

et a limité son action à la formation d'acide indol-3-acétique.

Core

Pour doser celui-ci j'ai acidifié la prise d'essai V, alcaline et épuisée par l’éther, en y ajoutant 10°" d’acide sulfurique normal de plus que ce qui était nécessaire pour la neutralisation au tournesol. À l’aide de deux boules à décantation de 250°"% jai alors épuisé cette liqueur par l’éther purifié en employant ce dissolvant par portions de 25°", Après le sixième lavage l’éther n’entrainait plus trace d'acide indol-3-acétique ainsi que je m'en suis assuré à l’aide de AzO?K et de HCI, d’abord sur deux ou trois gouttes, puis sur le résidu d’évaporation à froid des 25% d’éther de lavage.

J'ai lavé à l’eau distillée le mélange des liqueurs éthérées que j'avais réunies dans un flacon recouvert de papier noir; j'ai chassé l’éther par distillation à aussi basse température que possible, repris par l'alcool à 96° le résidu de cette distillation et complété Or e

Après avoir ainsi traité l'essai V j'ai opéré exactement de même avec la liqueur M également alcaline et épuisé par l’éther pour la débarrasser non de l’indol, mais de diverses substances colorantes dérivées du tryptophane.

J'ai donc obtenu ainsi avec elle 100" d’une solution alcoolique M contenant tout son acide indol-3-acétique.

Pour effectuer la détermination colorimétrique j'ai alors préparé les trois mélanges suivants :

11e cm$ 1e biémour 1lecdliqué Mesurer 0e ce 10 MOolUUON aqueuse de ALOIR(A ve...