RER TE

puis l’acide indolcarbonique CO0n en NS 6H#4 CH K 7 CH

» Ces deux derniers aboutissent alors, par décarboxylation, le premier au scatol C — CH:

EN 6 H# G K /CH NH le second à l’indol CH TAN CS H* À K CH NH

» [Test bon de noter en passant que l’action des microbes sur le tryptophane peut se manifester d’une tout autre façon que ci-dessus; en effet, certains microbes s'attaquent immédiatement au carboxyle et de même que la tyrosine donne la p-oxyphényléthylamine, le tryptophane peut par décarboxylation fournir l’indol-

éthylamine CCE CHRENEE

Cs TO NH

» Enfin, étant donné ce que je viens de rappeler, on conçoit sans peine que les microbes capables d'attaquer le tryptophane, de quelque manière que ce soit, manifesteront beaucoup mieux leur action, lorsqu'ils se trouvent directement en présence de cet acide aminé libre et qu'ils n'auront pas à le séparer d’un édifice moléculaire le plus souvent très complexe.

» Comme on sait que le meilleur procédé de préparation du tryptophane consiste dans la digestion trypsique, aseptique et prolongée de matières albuminoïdes convenablement choisies, on doit done, pour préparer les milieux destinés à l'étude de la fonction indologène, donner la préférence aux € peptones pancréatiques », particulièrement à celles de caséine. Toutefois, 1l vaut encore mieux, comme je vais le montrer, employer des milieux de composition bien définie auxquels on incorpore du trypto-

phane. »

Les expériences que M. A. Berthelot a entreprises pour essayer

de trancher définitivement la question de la production de Pindol par les Proteus n’ont pas porté sur moins de 61 échantillons isolés par des bactériologistes comme Metchnikof” et ses élèves D. Bertrand, Cohendy, Fosse, Legroux et Tissier, c'est-à-dire un nombre considérable de microbes dont l'identité avec le Proteus vulgaris ne peut être mise en doute et dont il avait vérifié la pureté par cinq isolements successifs. En outre, pour éviter d’avoir à tenir compte de la variabilité des pouvoirs protéolytique, peptolytique et peptidolytique de cette espèce il n’a utilisé que des cultures obtenues avec milieux riches en tryptophane libre (solutions de tryptophane ou solutions de peptone pancréatique de caséine).

Dans ces conditions il a observé que, sur 61 Proteus, 24 seulement étaient indologènes, mais que tous produisaient plus ou moins vite, plus ou moins abondamment de l'acide indolacétique caractérisable par les trois réactions suivantes :

1° Avec HCI et AzO?K, production d’une coloration rose passant complètement dans l’alcool amylique et donnant une,bande d'absorption dans le vert;

2° Avec HCI et traces de Fe?CI5, production d’une coloration voisine du rouge cerise;

3° Formation de scatol par chauffage à sec à 210°.

En présence de ces faits À. Berthelot, qui avait constaté sur ses nombreux Proteus une grande variabilité biochimique, a pensé qu'il ne devait pas avoir affaire à des représentants d’une race indologène et d’une race non indologène, mais « qu'il devait plutôt s'agir de races différant simplement par une intensité plus ou moins grande de leur action sur le tryptophane ou les substances qui en renferment, action beaucoup trop variable pour que ses divers degrés puissent être utilisés comme caractères différentiels ».

Ses nombreuses expériences, entreprises dans des conditions de milieu très variées et avec un grand nombre de races, lui ont donné le droit de conclure que « le P. vulgaris est un microbe qui attaque le tryptophane, par le même mécanisme que les autres aérobies étudiés par Hopkins et Cole, en donnant une série de produits dont la dégradation plus ou moins avancée marque l'intensité de son action sur la molécule aminoïque.

» Dans certaines cultures très âgées, en milieu contenant beau-

coup de tryptophane, on peut ne trouver pratiquement que de

Pindol; dans d’autres en général assez jeunes et sur milieu pauvre en tryptophane libre, il n’y a que de l’acide indolacétique, mais ce que l’on rencontre le plus souvent, c’est à la fois de l’indol et de l'acide indolacétique en proportions variables,

» L'action du Proteus variant non seulement avec les divers échantillons, mais même pour une race donnée, il est impossible de se baser sur l’absence d’indol dans les cultures de ce microbe pour le différencier des autres espèces. Par contre, et autant que l'on puisse conclure de l'examen de 61 races, on peut dire que tous les Proteus vulgaris Hauser sont capables d’attaquer le tryptophane libre et de produire, aux dépens de cet acide aminé, au moins de l’acide indol-3-acétique.

» L'espèce Bacillus proteus anindologenes van Loghem n’a aucune raison d’être et l’on doit considérer comme Proteus vulgarts Hauser tout microbe possédant, avec les autres caractères de cette espèce, la propriété de donner, à 35°, dans un des milieux que je viens d'indiquer, soit de l’indol ou de l'acide indolacétique, soit un mélange de ces deux corps. »

J’ajouterai que les milieux employés par Berthelot sont faciles à réaliser puisqu'il suffit qu'ils donnent avec l’eau de brome la réaction du tryptophane libre, réaction présentée par toutes les bonnes peptones pancréatiques du commerce.

Malgré le soin avec lequel cet auteur a effectué ses recherches, les faits qu'il a publiés et les indications qu’il a données n’ont point convaincu certains bactériologistes peu au courant des pro-" grès de la Chimie biologique (65). Le premier d’entre eux à été un auteur allemand Hugo Zipfel qui, sans citer le travail publié par Berthelot, en a reproduit les données principales plusieurs mois après, mais en indiquant des méthodes de recherches de l’indol qui ne tiennent aucun comple des corps indologènes accompagnant celui-ci (66).

Le second a été un auteur hollandais E. Baudet qui a étudié au point de vue de l’indol quelques Proteus d'origines variées, mais en employant le diméthylaminobenzaldéhyde dans les cultures mêmes ou avec les distillats. Baudet, qui passe sous silence les travaux de L. Gauthier, Porcher, Panisset et Herter, rapporte inexactement les travaux de Berthelot, qu'il critique parce qu'il

n’a pas su comme ce dernier faire produire de l’indol à une race non indologène. Baudet n’est certainement pas chimiste, car 1l parait ignorer les termes possibles de la dégradation bactérienne du tryptophane, mais de plus il ne doit guère être au courant de la biologie des microbes pour se figurer que la variation d’une propriété biochimique doit obligatoirement se produire dans Îles mêmes conditions pour des Proteus d'origines différentes (67).

Les plus récentes objections ont été faites par J.-J. van Loghem d'Amsterdam. Cet auteur qui a créé l’espèce Proteus anindologenes persiste à la croire nécessaire et 1l considère comme non avenues les recherches critiques de Berthelot. Si on laisse de côté les arguments tirés des réactions d’agelutination, arguments dont van Loghem reconnait le peu de valeur, les raisons d’être du P. anindologenes seraient : 1° l’absence constante d’indol dans les cultures en solution de peptone de Witte; 2° présence constante dans ces mêmes cultures d’une snbstance ne passant pas à la distillation et donnant avec le nitrite de potassium et l'acide sulfurique une coloration rouge vineux différente de celle du nitroso-indol.

En d’autres termes, les ?. anindologenes de M. van Loghem ne donnent pas d’indol avec la peptone de Witte, mais une substance que cet auteur ne connaît pas et à laquelle il n’attache qu’une faible importance, S'il avait lu attentivement un livre moderne trailant de nos connaissances sur la constitution des albuminoïdes et de leurs produits d'hydrolyse, puis les Mémoires de Porcher, de Panisset, de Hervieux, de L. Gauthier, de Herter, de Fleig, de Herter et Ten Broeck et de A. Berthelot, cet auteur aurait déterminé la nature de cette substance et il aurait vraisemblablement reconnu que ses P. anindologenes donnent de l'acide indol-3-acétique. Il est probable que ses conclusions n'auraient pas été les mêmes, qu'il aurait admis celles de À. Berthelot et qu'il n'aurai pas écrit ce qui suit : € Au point de vue biologique nous considérons l'impuissance constante de notre bacille anindologène de séparer de lindol de cet édifice moléculaire très complexe : la peptone, comme beaucoup plus importante que le fait qu'on peut trouver de temps en temps de l’indol dans des cultures qui contenaient d'avance déjà le trvptophane ou d’autres substances peu complexes (68) »,

Tant que van Loghem n’aura pas avec ses microbes anindologenes répété toutes les expériences de Berthelot, en particulier celles sur la variation du pouvoir indologène suivant le milieu et obtenu des résultants différents, personne ne pourra prêter attention à ses revendications au sujet du ?. anindologenes.

La confusion ne cessera de régner dans les travaux de bactériologie qu'avec l'adoption de méthodes rationnelles. Il est indispensable que les bactériologistes désireux d'entreprendre des recherches biochimiques prennent la peine de se mettre au courant de l’état actuel de nos connaissances sur la constitutien des aliments qu'ils offrent à leurs microbes et de leurs dérivés possibles ; il est nécessaire également qu'ils appliquent dans leurs expériences les principes fondamentaux de lPanalyse chimique et les indications techniques qui leur sont données par des spécialistes. A notre époque il est impossible de discuter sur le pouvoir indologène quand on ignore d’où vient l'indol formé par les microbes, ce que c’est que le tryptophane et quels sont les produits de sa destrucüuon bactérienne.

Pour ma part Je me refuse à considérer le Proteus M comme une espèce anindologène distincte; cultivé en présence de peptone de Witte il ne donne pas d’indol et produit le corps non défini par M. van Loghem; mais comme ce corps est de l’acide indolacéüque et qu& ce Proteus M isolé par M. MetchnikolT est justement un des microbes non indologènes auxquels A. Berthelot à fait produire de lindol après quelques passages sur tryptophane, j'adopte pleinement les conclusions de ce dernier auteur, conclusions qui sont d’ailleurs les mêmes que celles de Herter et Ten Brœck. D'ailleurs, comment pourrais-je classer parmi les espèces anindologènes un microbe qui, s’il ne donne pas d’indol sur les milieux usuels, en produit des traces, comme je lai établi plus haut, lorsqu'on le cultive dans un milieu où 1 pour 100 de tryÿptophane constitue le seul aliment organique ?

Appendice à l'action sur les matières protéiques et leurs dérivés.