DOSAGE DE LA THYROXINE ET DE LA DIIODOTYROSINE DANS LEURS MÉLANGES

Le dosage des deux acides aminés iodés décrit plus haut comporte une précision de + 3 p. 100 sur les solutions pures de chacun, mais son intérêt serait très limité s’il ne pouvait pas être appliqué à des mélanges de ces corps. Or, les travaux d'HARINGTON et RANDALL [75], de LELAND et FOSTER [107], de BLAU [20, 21], ont précisé les conditions dans lesquelles ceuxci peuvent être séparés quantitativement grâce à leurs différences de solubilité dans le butanol. L’extraction par ce dernier de milieux sodiques (NaOH 2 N) entraine la thyroxine dans la phase alcoolique, la diiodotyrosine demeurant alors dans la phase aqueuse. Nous réservant de décrire par la suite en détail le mode opératoire adopté pour fractionner les acides aminés iodés dans les hydrolysats protéiques, nous nous bornerons à signaler ici que les quantités de chacun mises en expérience ont été retrouvées à + 2 p. 100 près. Il est donc possible de doser la thyroxine et la diiodotyrosine dans leurs mélanges à l’aide de la méthode colorimétrique établie sur les solutions

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pures de ces corps, grâce à leur séparation quantitative par extraction de la thyroxine au butanol.

II. — Dosage de la monoiodotyrosine en solution pure et en présence de divers acides aminés.

Le dosage de la tyrosine a été basé par de nombreux auteurs sur la réaction dite de Millon, commune à de multiples phénols (coloration rouge orangé en présence de sulfate mercurique et d’ion nitreux). Cette réaction se manifeste dans les solutions de monoiodotyrosine, mais non dans celles de diiodotyrosine ou de thyroxine ; aussi pouvait-on espérer doser le premier de ces corps en solution pure à l’aide d’une méthode élaborée antérieurement pour doser la tyrosine. Par ailleurs, les caractères spectraux des dérivés colorés des deux acides aminés présentant de sensibles différences, nous avons mis ces dernières à profit pour doser la monoiodotyrosine en présence de tyrosine.

1. APPLICATION A LA MONOIODOTYROSINE DU DOSAGE COLORI- MÉTRIQUE DE LA TYROSINE (LuGG).

Nous avons appliqué à des solutions titrées de 3-monoiodotyrosine pure (HARINGTON et PITT RIVERS) le dosage de la tyrosine décrit par LuGG [118], dont nous rappellerons le mode opératoire.

Les réactifs nécessaires sont :

Solution I: solution de monoiodotyrosine à 0,05 p. 100 dans SO:H> 0,7 N, fraîchement préparée.

Solution II : dissoudre dans 770 cm3 H:0 additionnés de 79 cm3 SO:H: concentré 75 g SO.Hg purifié, 55 g HgCl 70 g SONa et compléter à 1000 cm3 avec H:0.

Solution IIT : solution II diluée au demi par SOH,; N.

Solution IV : solution de nitrite de sodium à 6,9 p. 100 fraichement préparée.

La technique du dosage est la suivante : on place dans un tube à essai en verre pyrex un volume de solution I égal au plus à 5 cm* et renfermant de 0,5 à 2,5 Mg de monoiodotyrosine et l’on complète à 5 em, si besoin est, par SO,H, 0,7 N. Après avoir ajouté 5 cm* de solution II on porte pendant 30 minutes au bain-marie à 60°, on refroidit sous un courant d’eau, on complète à 25 cm avec de la solution II, puis on ajoute 0,5 cm° de solution IV. I se développe alors une coloation rouge. Après agitation et, s’il y a lieu, centrifugation des fines particules de composés mercuriques en suspension,

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on mesure l'intensité de l'absorption, dans les quinze minutes, au photomètre de PULFRICH (cuve de 2 em, lumière filtrée par l'écran S;5). On trouvera dans le tableau III un exemple des résultats obtenus entre 0,48 et 2,63 Mg de produit.