C. — DOSAGE DE LA MONOIODOTYROSINE

La monoiodotyrosine est un constituant des protéines artificiellement iodées et les protéines thyroïdiennes en sont dépourvues, ou tout au moins si pauvres que cet acide aminé n’a pas pu y être mis en évidence ; aussi est-ce aux premières seules que s'applique son dosage.

Divers contrôles ont tout d’abord été institués pour choisir un agent d’hydrolyse. La monoiodotyrosine est décomposée avec libération d’iode et de tyrosine par SO,H, 8 N à l’ébullition. Elle ne subit par contre qu’une perte d’iode minime, ne dépassant pas 3 p. 100, lorsqu'elle est chauffée pendant 8 heures au bain d'huile à 115-120° dans de la soude 5 N. Par ailleurs, la tyrosine soumise à la même opération est quantitativement retrouvée en fin de celle-ci. La méthode de dosage de ces deux corps dans leurs mélanges décrite plus haut doit donc pouvoir être adaptée aux produits de l’hydrolyse sodique des protéines ; si les autres acides aminés présents n’en altèrent pas la précision. Une hydrolyse de 8 heures à 100° par la soude 5 N libérant la totalité de la tyrosine, on peut admettre qu'il en est de même du dérivé monoiodé et nous avons étudié dans quelle mesure les produits de destruction de la diiodotyrosine et de la thyroxine peuvent gêner le dosage de ce dernier. Les expériences que nous avons instituées dans ce but ont montré que la diiodotyrosine chauffée pendant 6 heures au bain d'huile à 115-120° dans la soude 5 N ne donne naissance qu’à des traces de monoiodotyrosine, correspondant à 2 p. 100 environ du dérivé diiodé (dosage de celui-ci par la réaction aux ions nitreux et dosage de la première par la réaction de MILLON). La dégradation de la thyroxine au cours d’essais identiques est importante ; elle peut atteindre 50 p. 100, mais ne libère qu’à de très faibles taux des corps donnant la réaction de MiLLON. Environ 4 p. 100 de la thyroxine sont alors transformés en « extratyrosine ». Le tryptophane donnant une réaction colorée analogue à celle de MILLON, il y a lieu de l’éliminer, ce que la méthode de LuGG réalise en assurant la précipitation du dérivé mercurique de cet acide aminé dans des conditions où ceux de la tyrosine et de la monoiodotyrosine demeurent en solution. Enfin, nous sommes assurés que le dosage de la tyrosine en lumière filtrée par les écrans S;3 et Su du photomètre de PULFRICH donne les mêmes résultats en solution pure et dans un hydrolysat protéique, en sorte que la présence d’un certain excès d’acides aminés ne constitue pas

une cause d'erreur. Les résultats de ces essais justifient la méthode de dosage de la monoiodotyrosine dans les protéines iodées que nous proposons.

Réactifs nécessaires :

Solution I : dissoudre dans 770 cm3 H,0 additionnés de 79 cm SO.H: concentré 75 g SO:Hg purifié, 55 g HgCl, 70 g SOIN et compléter à 1000 cm* avec H:0.

Solution II : solution I diluée au demi par SO:H:N.

Solution III : solution à 6,9 p. 100 de nitrite de sodium fraichement préparée.

SO:H: 10 N ; SO: 0,7 N ; NaOH 5 N.

Mode opératoire. — 100 à 500 Mg de protéine iodée sont additionnés de NaOH 5N (2 em* par 100 Mg) et chauffés pendant 8 heures au bain d'huile à 115-120° sous réfrigérant à reflux. Après refroidissement, on transvase dans un ballon jaugé de 10-15 cm et l’on ajoute SO,H, 10 N en quantité suffisante pour réaliser une acidité 0,7 N. On prélève une prise d’essai de 5 cm° au maximum dans un tube à centrifuger (en complètant au besoin à 5 cm? par SO,H, 0,7 N) et l’on ajoute 5 cm* de solution IT. Après un séjour de 30 minutes à 60° et de 1 heure à 20°, on centrifuge le précipité renfermant le tryptophane. Le liquide surnageant est transvasé dans un ballon jaugé de 25 cm ; on réunit les eaux de lavage du précipité traité par 10 cm* de solution IT puis on complète à 25 cm par cette dernière. On ajoute ensuite 0,5 cm* de solution III, ce qui provoque le développement de la réaction de MiILLON. On agite, on centrifuge et l’on mesure au photomètre de PULFRICH sous 2 em d'épaisseur l’intensité de la réaction dans les deux régions du spectre délimitées par les écrans S;3 et Sy, de cinq à quinze minutes après le mélange des réactifs. Les valeurs du coefficient d'absorption ainsi obtenues, M avec l'écran S;, et m avec l'écran S,7, permettent de calculer les quantités x de monoiodotyrosine et y de tyrosine présentes au moyen des formules :

2 LOMME S 4m k : !

RUE Te X 3,07 Mg de monoiodotyrosine et

des 0,97 Des exemples de données déterminées par cette méthode sur des iodocaséines préparés par la technique de REINEKE et TUR- NER (ioduration en milieu bicarbonaté) [169], et par celle de Von MUTZENBECHER (ioduration en milieu ammoniacal) [140]

figurent dans le tableau XI.

X 1,81 Mg de tyrosine

RER re Deere