II. — Procédé lent
Dans le procédé lent ou le procédé de la culture on fait agir le sérum sur :
1) Les bacilles à l’état naissant ou bien :
2) Sur les cultures en bouillon de 24 à 48 heures.
Le procédé lent rend souvent des services bien que dans la majorité des cas la séro-réaction recherchée par ce procédé soit le plus souvent plus faible que celle qu’on obtient par le procédé extemporané.
Il arrive même qu’on trouve la séro-réaction d’une façon bien nette par le procédé rapide, alors que le procédé lent échoue.
Quand on fait agir le sérum typhique sur les bacilles
po. RER
d’Eberth à l’état naissant il faut toujours mettre à l’étuve une culture témoin. Au bout de quelques heures on constate que pendant que la culture témoin devient de plus en plus trouble, le bouillon ensemencé avec du bacille d’Eberth, mais dans lequel on a versé une certaine quantité (par exemple dans la proportion de 1 pour 10) de sérum typhique, reste clair et laisse tomber de petits amas de bacilles au fond du tube.
Si on emploie les cultures en bouillon de 24 à 48 heures, il faut surveiller le mélange mis à l’étuve parce qu’il peut arriver que la culture une fois clarifiée, se trouble de nouveau, si on a commis une faute d’aseptie.
Mensuration du pouvoir agglutinatif
Après avoir cherché à mesurer le pouvoir agglutinatif par le procédé de la culture, en ajoutant successivement une seule goutte dans une série de tubes contenant une quantité de culture en bouillon de bacilles d’Eberth toujours croissante, MM. Widal et Sicard ce sont arrêtés à un procédé extemporané bien simple qui est maintenant accepté par tous les bactériologistes.
On mesure donc le pouvoir agglutinatifen même temps qu’on cherche le séro-réaction.
Il faut toujours commencer comme le font MM. Widal et Sicard. par le mélange de 1 pour 10 ; puis si la réaction est intense on répète l'expérience à ! pour 50. Si dans ce nouveau mélange, les amas continuent à se former on s'adresse aux dilutions du sérum plus grandes.
Si au contraire à {/50 on ne trouve plus de séro-réaction, on s'adresse aux mélanges de 1 p. 40, 1 p. 30, etc.
Dans son rapport au Congrès de Moscou M. Widal insiste après Ictéridem Delépinne que pour mesurer d’une façon très exacte le pouvoir agglutinatif du sérum il faut laisser les préparations pendant 24 heures en chambre humide.
Ce procédé n’a qu’un inconvénient dit M. Widal (1),
(1) Congrès de Moscou, Bull. Médical, 12 sept. 1897, p. 862,
Res (l
celui de demander un jour d'attente, et l’on comprend la perte de temps qui en résulte lorsqu'on est obligé de rechercher par tâtonnements successifs la limite du pouvoir agglutinatif. En laissant toutes les préparations reposer pendant deux heures, on obtient des résultats qui ne représentent pas la limite exacte du pouvoir, mais qui sont en tout cas, toujours comparables entre eux ».
Pour avoir les termes de comparaison il faut toujours se‘servir pour la mensuration exacte du pouvoir agglutinatif, de la culture en bouillon du même échantillon, de même date et d’un bouillon de même provenance.
Renard 3
ue
La date d'apparition et de disparition de la séroréaction
Il est en général bien difficile de savoir exactement, d’après le dire du malade, le jour du début de la fièvre typhoïde. On compte en général à partir du moment où le malade s’est alité.
On a trouvé l’agglutination à partir du 3° jour de la maladie. Dans le dernier travail circonstanciel publié sur le sérodiagnostic (Bensaude, thèse de Paris, 1897), nous en trouvons trois Cas.
Les recherches faites par les auteurs, sur les animaux, en vue de trouver la date exacte d'apparition du phénomêne d’agglutination, sont très intéressantes.
MM. Achard et Bensaude ont fait des recherches sur les cobayes, auxquels ils ont injecté (1) 1 cc. de culture en bouillon de bacilles d’'Eberth. Leurs cobayes donnaient la séro-réaction à partir du troisième jour.
M. Widal a vu chez le cobaye, apparaître la séro-réaction à partir du cinquième jour. Dans un autre cas, il a constaté l’agglutination dans la proportion de { pour 15 déjà 60 heures après l’inoculation.
€ En inoculant dans le tissu cellulaire d'un cobaye de
(1) Dans le tissu cellulaire sous-cutané,
PE en
410 grammes et dans le péritoine d’un cobaye de 415 grammes, 10 gouttes de sérum d’un âne, dont le pouvoir agglutinatif était de 1 pour 30,000, MM. Widal et Sicard (1) ont vu apparaitre la réaction dans le sérum, au bout d’une demi-heure. Le pouvoir agglutinatif était alors de ! pour 10. Ce pouvoir, mesuré de 2 heures en 2 heures, atteignit son maximum äu bout de 10 heures. Il était, pour le cobaye, à ce moment, de 1 pour 180, et pour le second, de 1 pour 200. Ce pouvoir, mesuré les jours suivants, s’abaissa rapidement à 4 pour 80, 1 pour 50, un pour 10, et dix jours après linoculation, le Sérum n’était plus agglutinatif. »
Il arrive parfois chez l’homme que la séro-réaction apparaît très tard. Une des plus intéressantes observations à ce point de vue est le cas de MM. Achard et Castaigne. qui n’ont trouvé la séro-réaction chez un de leurs malades que le 21° jour de la maladie, le 4° jour de l’apyrexie.
Il faut noter que le sérum du même malade n’agglutinait plus de bacilles d’Eberth à partir du 28° jour de la maladie. Ce dernier cas montre bien que la séro-réaction peut disparaitre très rapidement.
M. C. Fraenkel n’a plus trouvé la séro-réaction après quelques jours de convalescence.
M. Lemoine, MM. Achard et Bensaude ont vu disparaître l’agglutination dix Jours après le début de la maladie.
MM. Widal et Sicard ont assisté à la disparition du du phénomène d’agglutination chez un malade à partir du
(1) Annales de l’Institut Pasteur, mai 1897, page 392,
