CULTURE SUR EMBRYON DE POULET

La membrane chorio allantoïdienne de poulet en état de développement, avant de servir comme milieu de culture pour les virus filtrants, avait déjà été utilisée par Rouss et Murphy, en 1911, pour étuder les tumeurs des volailles.

Plus tard, en 1931, Goodpastures et Budding montrèrent que cette membrane était un très favorable milieu de culture pour les infections à virus filtrants et en particulier pour le virus vaccinal, lesquels virus pouvaient y être cultivés indéfiniment.

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Pendant ces cinq dernières années, un grand nombre d'ouvrages de différentes provenances ont été publiés à ce Sujet. Il résulte de ces études que cette membrane est extraordinairement prédisposée à recevoir une grande quantité de virus, lequel se développe avec facilité, aussi bien dans la membrane que dans l'embryon, bien qu'il ne soit pas capable d'infecter le poussin.

La culture sur embryon de poulet paraît d'autant plus intéressante qu’elle permet d’avoir moins souvent recours aux animaux de laboratoire et que de plus, un titrage exact en virus peut y être facilement fait.

Dans les cas où les virus produisent des lésions en foyer, ces lésions peuvent être comptées et on a ainsi une indication plus précise que celle donnée par les animaux de laboratoire habituellement utilisés.

Cette membrane offre également des conditions très favorables pour les études histologiques des lésions provoquées par les infections à virus. Sa structure normale est tellement simple que chaque réaction de l'infection peut être étudiée facilement et suivie dans ses moindres détails.

Les risques d’une infection accidentelle par les animaux d'expérience sont beaucoup plus réduits, car le virus est renfermé dans l’œuf inoculé avec autant de sécurité que les bactéries dans les tubes de culture. Une très intéressante possibilité ressort des Passages successifs et prolongés des virus dans les œufs : c’est qu'ils changent avantageusement de caractère, demeurant virulents pour l'œuf membrane, ils perdent leur virulence pour les animaux d'expérience.

Si les Caractéristiques des. virus peuvent être perpétuées, la valeur d’une telle culture pour l'immunisation des hommes

Sérait évidente. Toutefois une précaution est nécessaire : ce

virus ayant déjà changé une fois de caractère, c’est qu'il est « instable » et une reversion à la forme virulente originale peut se produire de façon inattendue.

Lloyd, Theiler et Ricci, en 1935, Cultivèrent le virus amaril suivant une méthode sensiblement la même que celle employée par Carrel et Rivers en 1927, et que Goodpastures et Buidding en 1031 pour la lymphe vaccinale. Ils prirent des œufs fertiles après neuf à onze jours d’incubation ; la zone des. tinée à être ouverte était désinfectée, une ouverture était pratiquée aseptiquement dans la partie la plus sombre de l’œuf, On incisait la membrane coquillière et on déposait sur l’allantochorion une petite colonie de la même souche pantrope asibi, employée déjà pour la culture sur embryon de souris. L'ouverture était bouchée à la paraffine, on plaçait les œufs sur un Support de manière à faire plonger le sac à air dans un bain chaud à 38° C. Après quatre jours d’incubation, les œufs étaient retirés de l’étuve ; on enlevait aseptiquement la coquille et la membrane coquillière ; l’allantochorion était incisé et vidé de son contenu. L’embryon était ensuite lavé pendant quatre heures dans une solution saline à 0,9 % et coupé en petits morceaux. La méthode de culture était alors la même que celle employée avec l'embryon de souris.

Ces auteurs ont ainsi réussi plus de 130 subcultures en Solution de Tyrode en flacons d'Erlenmeyer.

En 1936, on tenta la vaccination suivant le procédé employé avec l'embryon de souris, en y apportant quelques modifications :

— L’'embryon de poulet remplaçait l'embryon de souris;

— Avant de convertir en vaccin la culture en présence des tissus, on faisait un seul passage par cerveau de souris, en ayant soin de prendre des souris d’une race élevée spécia-

lement et connue pour être exempte d’autres infections.

Les souris étaient tuées 7 jours après l’inoculation, quand les symptômes commençaient à apparaître ; l’'émulsion de cerveau était filtrée sur un disque Seitz que le virus de la chorioméningite lymphocytaire ne traverse que difficilement. Par ce moyen, on conservait le titre en virus du vaccin et on diminuait beaucoup le danger d’inoculer à l’homme, un matériel non filtré pouvant contenir d’autres virus.

Après l'injection d’immun sérum humain et de virus pantrope ainsi cultivé, on ne trouva en aucun cas de virus libre dans le torrent sanguin circulant. À quelques exceptions près, les sérums ont été éprouvés trois ou quatre semaines après la vaccination au point de vue de l’immunité : des anticorps s'y étaient développés. Il est prouvé que le virus amaril cultivé suivant cette dernière méthode doit être toujours associé à de l’immun sérum, car lorsqu'il est employé seul, il n’est pas exempt de dangers.

Une seule difficulté restait donc à résoudre, c'était celle se rapportant à l’immun sérum.