INOCULATION DE LA SYPHILIS A L ANIXAL

ic8 anthropoïdes. Au lieu d'inoculation ' (arcade sourcilière, bord palpébral), se dëveloppf^nt des ulcérations aplaties, rarement des oodules durs, de couleur rouge, dans lesquels on trouve le spirocbète en abondance. L'adénopathie est peu apparente.

II n'est pas prouvé que les singes inférieurs puissent présenter d'accidents secondaires analogues à ceux qui existent chez Tbomine et cbez le chimpanzé, mais on a parfois trouvé des spirocbètes dans les ganglions voisins du chancre et dans la rate.

Chez le singe sypbilisé, comme chez l'homme syphilitique, il est impossible de reproduire un accident primaire, quand l'inoculation n'est plus de date récente.

La syphilis peut être inoculée à un grand nombre d'autres animaux, au niveau de la cornée chez le chien, le chat, le cobaye, du scrotum chez le cobaye.

La syphilis expérimentale a été étudiée surtout chez le lapin (Bbrtarelli, Trufpi). Chez cet animal, on peut provoquer par inoculation directe une kératite spécifique qui se prolonge pendant plusieurs semaines, et, par inoculation sous la peau du scrotiun, ta production d'une réaction inflammatoire, qui se rapproche par ses caractères du chancre induré de l'homme et où les spirocbètes se rencontrent en abondance.

On peut aussi déterminer la syphilis testiculaire du lapin par infection de substance cérébrale de paralytique général vivant

(NOGDCHI, WiLE*).

La syphilis du lapin est susceptible de généralisation.

SËBORËACTION

EETet immédiat de la présence du spirocbèle, la séroréaction constitue le symptôme fondamental de la maladie. Sa présence

' L'inoculation de la syphilis, chez lea anthropoïdes, est possible sur toute l'étendue do tËgument : les singes infërleurs ne sont inoculables qu'aux régions orbilaire et génitale.

' WiLB. Tht Journal of txperimtntal medicine, 1B16.

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10 LES BASES DK U. STPHILIâRAPHIE MODERNE

témoigne de l'infection syphilitique ; son degré, de l'intensité de celle-ci; ses vanations, sous l'influence des agents antisyphilitiques, de l'efiicacité du traitement.

Cta a constaté, depuis longteqips déjà, que le sérum sangmn de certaines espèces animales présente des propriétés hémolytiques à r^ard des ^obules rouges appartenant à d'autres espèces, qu'il est capable, in vitro, de les dissoudre.

C'est ainsi que le séniin humain, 19 lois sur 20, peut détruire m vitro une certaine quantité d'hématies de mouton.

Ces propriétés, lorsqu'elles n'existent pas à l'état naturel, peuvent è\Te déterminées expérimentalement (Bordet). Dans le cas où le pouvoir bémolytique est minime, il peut être renforcé par voie d'immunisation. Ainsi le sérum de lapin présente à l'état normal des propriétés hémolytiques insignifiantes à l'^rd des globules rouges du mouton. Si on injecte à plusieurs reprises des hématies de mouton dans le péritoine ou sous la peau du lapin, le sérum de celui-ci devient nettement hémolytique. On désigne sous le nom d'ambocepteurs ou sensibilisatrices les substances, hémolysantes ou autres, formées au cours des injections réitérées.

Que les propriétés hémolytiques existent naturellement ou aient été développées expérimentalement, elles disparaissent par le chantage à 56' (BUchuer). Ce chauEfage fait disparaître une substance appelée a/ezme ou complément, en l'absence de laquelle l'hémolyse ne peut se produire.

Mais qu'on ajoute £t un sérum, qui a perdu son activité hémolytique, grâce au chauffage à 56°, un sérum quelconque non chautîé, l'activité hémolytique reparaîtra, h'alexine est donc une substance banale, normalementprésentedansle sérum des animaux. La quantité de cette substance ne varie pas au cours de l'immunisation.

Dans ces expériences relatives aux phénomènes d'hémolyse, les globules rouges jouent le r6le d'antigène et les substances spécifiques qui apparaissent dans le sérum d'anticorps. Le nom antigène est appliqué à toute substance (microbes, produits microbiens, albumines, diastases, etc.) qui, introduite dans l'oi^nisme, pro-

StROBËACTION 11

voque la iormayon par celui-ci de substances nouvelles, spécifiques (anticorps), dont la propriété fondamentale est de se fixer élecUveneot sur l'antigène.

Par exemple, des globules rouges de mouton mis en contact avec le sérum d'im animal (sérum chauffé à 56*), qui a reçu des injections répétées de ces globules (lapin par exemple), fixeront t'antioofpe (Ebblicb etUoRSEintoTB). ^ cenlrifugeant, on verra que le culot de centribigation eonlient tout l'anticcM'ps ; le liquide qui surnage en est dépourvu. U suffît pour le démontrer d'ajouter au culol de oenUifogation un sérum quelconque, qui toumira l'alexine, pour constater que l'hémolyse se produit; le liquide surnageant, auquel on ajoute de l'alexine et des globules rouges, n'a pas de fvopriétés hénudytiques.

L'imprégnation d'un antigène par l'anticorps qu'il a formé est spécifique. Un antigène quelconque (^obules rouges, mit^vbes, etc.), lUB en présence de plusieurs anticOTps dans un même sérum ne fixera que celui qui lui est propre, c'est^-dîre celui qu'il a f(Miné, pour lequel il a une affinité particulière.

Un enemple d'un mélange antig^e-anlicorps est donné par le m vaccin seosibiUsé > de Bbsredka. C'est un vaccin constitué par des corps microbienB vivants (bac. typhique, vibrion cholérique, etc., ^c.), qui aoi été mis en contact avec un sérum d'un animal immunisé contre ces microbes, se sont imprégnés de tout ce <pii est spécifique et se sont « sensibilisés », en laissant au sérum toutes les autres substances pour lesquelles il n'a pas d'affin^é.

La fixation spécifique d'un anticorps sur l'antigène correspondant est accompagnée toujours de la consommation (fixation, déviation) du complément qu'on ajoute au mélange.

On peut fonder, sur ce fait d'wdre général, une méthode démontrant la présence, dans un liquide oi^aniquc, d'un anticorps en constatant la disparition de l'alexine. Cette disparition se vérifie dans la suîie par addition de sérum hémolytique — tel que celui du

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s DE L& STPHILIGRAPHIE ■ODBRNE

injection de globules de mouloo (sérum lapin : globules de mouton : l'hémolyse ne se proie fixation de i'alexine. Or celte fixation ne par la présence de 1 anUcorps.

e se produit, on conclut que I'alexine n'a pas que l'anticoq>s n'existait pas.

manière ramener la recherche d'un anticorps présence ou de l'absence d'alexine. Un sérum hai^ d'anticorps) interdira l'hémolyse — un al, non chai^ d'anticorps) la permettra, lies mots, la découverte de Bobdet et Gengou, leurs au diagnostic des maladies infectieuses hode est générale, il suffit dans chaque cas le sérum, dans lequel on recherche ranticoq>s, îerobe qui sert d'antigène et de constater la distance d'alexine fournie par un sérum non lange.

jour rechercher l'existence d'une infection lettre le sérum des malades en contact avec le uiticorps, s'il y en a, se fixe sur le bacille, arail et l'hémolyse n'a pas tieu si on ajoute le de lapin et des hématies de mouton.

iDBT-GENGon a été appliquée par Wassermahn yphilis. En l'absence de cultures du parasite, laboration avec Neissbr et BnncK, a employé âdosyphilitique, qui sert d'antigène dans la ppliquée à la syphilis.

iite que, dans l'application de ta réaction de ;les fondamentales et la technique sont celles u.

I entrer dans les détails d'une question très iscure, que tout se passe dans la réaction lime dans une réaction spécifique : I'alexine consommée, peu importe le nom, quand le

sérum est spécifique, mais restant libre quand il est nonnal. E^ bit, l'emploi d'un antigène spécifique n'est pas indispensable (Leyaditi, Jamamdchi, etc., etc.), e* tout antigène fournit des substances non spécifiques de nature lipoïdique, qui interviennent dans la réaction . Chi suppose que les globulines — qui se chai^nt généralement des anticorps dans les réactions biolc^tques — sont instables dans le sérum des syphilitiques ; elles précipiteraient facilement en présence des Upoïdes, cette précipitation entraînant par la suite la fixation de l'alexine. La nature des anticorps, en général, n'étant pas complètement élucidée, la question reste à l'étude.

Parmi les antigènes artificiels dont on s'est servi, signalons l'extrait de foie non syphilitique, l'extrait de coeur (cotiaye, bœuf, homme), alcooliques, acétones, éthérés — des sels biliaires, des mélanges de lipoldes, luétine, cbolestérine, etc.

TicHKiQiTE. — Antigène. — WASsenHANN, après avoir préconisé un extrait aqueux, s'est rangé à l'avis d'autres auteurs, et a employé un extrait alcoolique de foie hérédosypbiUtique. Ce foie est broyé et desséché dans le vide, puis épuisé par l'alcool.

Un tel extrait apporte-t-îl, en dehors d'une richesse en lipoïdes, des substances spécifiques qui augmenteraient le pouvoir fixateur de l'antigène?

C'est l'opinion de Cithon, Pladt et d'autres.

L'extrait contient des lipoldes qui, par eux-mêmes, peuvent neutraliser l'alexine (proja-iétés antialexiques) ; il faut donc avoir soin de déterminer la dose d'antigène qui n'amène plus la fixation, qui permet l'hémolyse franche et doit, par suite, être employée pour la réaction.

Le meilleur antigène, le plus sûr, est celui qui représente un mélange de plusieurs extraits de foie syphilitique. La richesse en spirochètes est une condition nécessaire, mais non une condition suifisanlc.

Il faut se défier des antigènes artificiels, dont les résultats sont moins sûrs et moins constants que ceux qu'on obtient avec un bon antigène spécifique. On a fait grand bruit, par

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14 IKS BASES DE LA STPHILIGHAPHIB MODERNE

exemple, au sujet des antigènes cholestérinés ; on doit les exclure : ces antigènes ont pour effet de donner des réactions plus fortes, ce qui peut avoir un avantage quand le sérum est spécifique, mats offn le danger de donner des réacliont non spéci/iqtiesK

Quelle que soit la technique employée, on doit exiger d'un procédé qu'il ne donne jamais de réactions positives dans les cas où la syphilis est absente.

Sérum humain. — A l'anligène, employé aux doses de 0 ce. 1 , 0 ce. 2, 0 ce. 3 eo dilutions convenables, on ajoute du s^iun humain cbaufEé à 56' pendant une demi-beure, e'est-â-dire débarrassé de son complément.

Le sang est recueilli soit au moyen d'une ventouse scarifiée, soit, ce qui est plus pratique, par ponction directe dans une veine au pli du coude, au moyen d'une seringue en verre stérilisée et sèche, munie d'une aiguille stérilisée, après apposition d'une ligature sur le bras et asepsie de la peau à la teinture d'iode. Chea l'adulte, on recueillera 12-15 centimètres cubes de sang. Cbes le nouveau-né, on recueille 3 ou 4 centimètres cubes au niveau du cordon. Le sang est versé dans un tube stérilisé, on laisse coaguler et on décolle au bout d'une demi-heure avec un fîl de platine flambé ou une pipette Pasteur, puis on conserve & la glacière pendant vingt-quatre heures. Le sang est centrifugé et le sérum recueilli.

Les quantités variables d'antigène sont ajoutées à des quantités constantes de sérum chauHé (0 ce. 2).

Alexine. — On ajoute alors du sérum de cobaye non chauffé dont le complément disparaîtra s'il y a syphilis, et restera libre si le sérum est normal.

Le sérum de cobaye s'obtient en ouvrant la carotide. Au moment où le sang coule dans un vase, on défibrine avec une baguette de verre, puis on centrifuge.

L'action complémentaire des sérums varie suivant les animaux ;

' LuiDDi et RtBiNtTKN. Eludo comparative sur quelques mËlhodea de aArodiagnoslic de la sypbilU. BuUelin de la SocUU françaUt d» Derntalotogi* el d« Syphiliffraphit, 6 février 1913.

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en outre elle décroit rapidement; il ne faut jamaie se servir d'un sérum ayant plua de quarante-huit heures. La force alexique doit être titrée avant chaque expérience : une dose, ajoutée & 0 ce. 1 de aéruni hémotytique de lapin et un centimètre cube de globules rouges de mouton (5 p. 100), peut être diluée deux, trois, quatre fois, six fois dans quelques cas ; parfois toute diluti<Hi sutât à rendre l'hémolyse ioeomplète.

Globules rouges de mouton et sérum hémoh/tique de lapin. — Le mélange : sérum (cbaufTé), antigène, sérum decobaye addilJ(«né d'eau physiologique est laissé une heure à l'étuve à 37". Pendant ce temps, l'alexinc se fixe si [le sérum contient des substances d'origine syphilitique. On ajoute alors l'une émulsion de globules rouges de mouton à 5 p. 100 dans de l'eau physiologique ; 2° du sérum hémolytiquc de lapin antimouton chauffé et on remet à l'étuve pendant trente minutes.

Lorsque l'hémolyse ne se produit pas, le fait s'explique par la fixation du complément en présence de substances d'origine syphilitique — il y a syphilis. Lorsque l'hémolyse se produit, le lait s'explique conformément à la loi de Borort et Gekgou; le complément non fixé permet au sérum hémolytique de lapin, privé de son complément par chauQage, de dissoudre les globules rouges du mouton. L'infection est absente, ou elle est latente au point de vue sérologique (v. interprétation des résultats négatifs, p. 29).

Le sang de mouton est recueilli dans un flacon contenant des peries de verre, par ponction directe dans une veine : on défîbrine. Les hématies sont lavées, à plusieurs reprbes, dans du sérum physiologique et employées pour la séro-réaction à l'état frais.

Quant au sérum hémolytique, il a été préparé de la manière suivante : on injecte, k trois ou quatre reprises, à cinq ou six jours d'intervalle, dans le péritoine du lapin, 10 h 12 centimètres cubes de globules rouges de mouton bien lavés. Le lapin est ensuite saigné, le sérum est maintenu à la glacière, après chauflage à 56°. Il conserve ses propriétés pendant des mois. Ce sérum est titré et le titre vérifiéde temps à autre.

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f6 LBS BASES DE LA STPHlLtGR&PBlK HODKRHE

Ce titrage se fait en recherchant la dilution qui permet l'hémolyse en présence de l'alexine et de globules de mouton. On fait des dilutions de sérum de lapin anti-mouton au dixième, vingtième... ; on prend, de chaque dilution, i/iO" de centimètre cube auquel on ajoute l'alexine, le mélange de sénims de plusieurs cobayes, de l'eau physiolo^que et des globules de mouton. Si l'hémolyse se produit au bout de trente minutes dans le tube correspondant à la dilution, par exemple 150, on prendra comme titre la dilution 1/75. Le titrage se lail plusieurs fois avec différentes alexines et différents globules. On recherche ensuite si le titre choisi permet de donner de bons résultats dans la réaction de fixation même.