A. — LACTOFLAVINE DANS LE LAIT DE FEMME

Pour effectuer ce dosage il faut au préalable débarrasser le lait de ses protides. Nous savons qu'il est difficile de précipiter complètement la caséine du lait de femme par l'acide trichloracétique. MERCIER a conseillé d’utiliser l'alcool éthylique. Nous avons utilisé l’alcool méthylique qui est un solvant de choix de la lactoflavine. Le mode opératoire est le suivant : dans 100 cm* d’alcool méthylique additionné de deux gouttes d’acide acétique on verse goutte à goutte 10 cm° de lait préalablement écrèmé par une centrifugation de dix minutes à 3.000 tours/minute. On agite et laisse reposer quelques heures à l’abri de la lumière, puis on filtre sur un petit filtre. Le coagulum est lavé par affusions successives de quelques cm* d'alcool méthylique. Ensuite on élimine une partie de l’alcoo! (70-75 em) du filtrat par distillation au bain-marie à l’abri de la lumière. Le résidu de la distillation est filtré. On complète à 100 cm° en rendant la solution alcaline décinormale. On filtre de nouveau et on expose comme précédemment aux ultra-violets. Après de nombreux essais nous n’avons pu obtenir un filtrat final limpide qu’en suivant ce mode opératoire.

Nous avons effectué nos recherches sur des laits prélevés de 4 à 8 jours après l’accouchement. En opérant sur dix laits nous avons trouvé

SRÉOIS MR ER TAN SO 1,3 mg. p. 1.000 APIOIS RME NEO 1,5 mg. p. 1.000 LRIOIS ACER CRE 1,7 mg. p. 1.000 ZT OS TIR Or IAE LIRE 1,8 mg. p. 1.000

Le taux moyen de lactoflavine dans le lait est donc chez la femme annamite de 1,52 mg. par litre. La femme allaitante a donc un besoin supplémentaire de lactoflavine. Il apparaît d’après nos dosages que le meilleur moyen pour satisfaire ce besoin est d'introduire de la viande de porc ou de bœuf dans sa ration alimentaire.

Bien qu’au Tonkin le lait de vache par suite de sa faible production ne constitue par un aliment pour l’indigène, nous y avons dosé la lactoflavine afin d’en comparer la teneur à celle du lait de femme. Etant donné son taux très élevé en lactoflavine nous avons pu utiliser une méthode simple et rapide identique à celle de VAN EECKELEN et EMMERIE pour les viscères.

Dans 85 cm° d'alcool méthylique contenant une goutte d’acide acétique, nous versons goutte à goutte 5 cm* de lait préalablement écrèmé comme le lait de femme. On agite et laisse en contact quelques heures. On filtre et on lave le coagulum avec quelques em° d’alcool méthylique jusqu’à obtention d’un volume final de 40 cm°. On prélève 10 em? de cette solution et on la traite par le permanganate en milieu acétique comme nous l’indiquerons pour le dosage de la lactoflavine dans les viscères par la méthode de VAN EECKELEN et EMMERIE. On compare à une gamme préparée en utilisant de la lactoflavine synthétique HOFFMANN-LAROCHE.

Nous avons trouvé les taux suivants

12 mg. p. 1.000 — 14 mg. p. 1.000 — 15 mg. p. 1.000 — 16 mg. p. 1.000 — 17 mg. p. 1.000 —17 mg. p. 1.000.

En Europe on indique des chiffres de 2 à 3 mg. p. 1.000. Comment expliquer cette différence ? Les fiavines animales proviennent des flavines végétales. Pour les herbivores la source de vitamine B, est constituée par les végétaux. KUHN, WA- GNER-JAUREGG, KALTSCHMITT ont montré qu’une vache qui consomme 7 kg. de foin sec par jour contenant au total 50 mg. de flavine, fournit 7 à 15 litres de lait par jour renfermant 10 à 15 mg. de lactoflavine. Au Tonkin la production laitière quotidienne est de 1 litre à 1 litre 500 au maximum par animal et parfois moins. On peut expliquer de cette façon la teneur élevée du lait en lactoflavine. Il est à remarquer que de phénomène de concentration ne se produit pas pour la vitamine B:. Nous avons vérifié que la fluorescence constatée aux ultra-

56 CHARLES AUFFRET.

violets était bien due à de la lactoflavine. Cette fluorescence disparaissait complètement par une exposition prolongée à la lumière solaire ou plus simplement par addition d’hydrosulfite de soude : dans ce dernier cas par agitation elle reparaissait.

B. — VITAMINE B; OU LACTOFLAVINE DANS L'ORGANISME.

La lactoflavine étant à la fois la vitamine de croissance et d'utilisation des glucides il était intéressant de la doser dans l’organisme d'individus d’âges différents afin de se rendre compte si les taux variaient en fonction de l’âge.

Nous avons effectué des dosages très rapidement après la mort dans les tissus et organes de fœtus, de nourrissons, d'adultes.

Pour ces déterminations quantitatives, nous avons utilisé la méthode mise au point par VAN ÉECKELEN et À. EMMERIE. Toutes les opérations ont été effectuées à l’abri de la lumière.

Cinq grammes d’organe ou de tissu sont broyés au mortier avec 25 cm3 de méthanol à 75 p. 100 (d’après WARBURG et CHRISTIAN) et laissés en contact pendant 24 heures à l’étuve à 37°. La lactoflavine, enlevée à son substrat protidique, passe en solution. On jette sur une gaze et on exprime pour enlever le méthanol retenu par les organes. Puis, on filtre sur papier. On obtient une solution plus ou moins colorée en jaune, dont le volume est voisin de celui de l’alcool méthylique ajouté. On complète à 25 cm avec le solvant initial. On prélève 10 cm? de cette solution auxquels on ajoute :

1 cm d’acide acétique cristallisable et 1 cm? de solution saturée de permanganate de potassium. On abandonne 10 minutes à la température de la chambre noire. On détruit ainsi les pigments autres que la lactoflavine. Puis on ajoute 1 cm3 d’eau oxygénée à 20 volumes ou 0,2 cm° d’eau oxygénée à 100 volumes. On filtre et on prélève 10 cm* du filtrat.

On compare aux ultra-violets la fluorescence jaune-vert du liquide à celle d’une gamme préparée avec de la lactoflavine synthétique HOFFMANN-LAROCHE, et contenant dans 10 cm3

= — DIS “ pif CY == 5 39 y 30 y 25 Y 20 19027 Y — 5 y — de lactoflavine.

Dans le calcul de la teneur finale en lactoflavine, il faut

DOSAGE DES VITAMINES B; ET Bs DANS L'ORGANISME. 57

tenir compte de la dilution par l’acide acétique, le permanganate et l’eau oxygénée.

Quand il nous a été impossible d’avoir une prise d’essai de 5 grammes, et c’est le cas pour certaines glandes (thyroïde, thymus, surrénales, testicules), nous les avons broyées seulement avec 10 à 15 cm. de méthanol à 75 p. 100.