CHAPITRE I

Dosage de la vitamine B..

Nous ne referons pas ici l'historique de nos connaissances sur la vitamine B;. On trouvera cet historique dans une monographie récente de M. Joseph Sivapyian (1938), dans une Conférence de M. P. BOULANGER (1938), dans un article très documenté de M. le Docteur DUCHESNAY (1939). Une monographie entière a été consacrée par COWGIE£L aux besoins en vitamine B, de l’homme (1934).

Cette vitamine, qui est une base incolore possédant une fonction alcool, a paru longtemps très difficile à doser par une voie autre qu'une voie biologique. R. KUHN et H. VETTER ont découvert en 1935 que l’oxydation en milieu alcalin à froid de l’aneurine par le ferricyanure de potassium donne naissance à une substance, le thiochrome, possédant une intense fluorescence bleue, substance qui est soluble dans les solvants des graisses comme l'alcool isobutylique ou le chloroforme. Cette réaction du thiochrome, qui paraît remarquablement spécifique a permis à B. C. P. JANSEN, dès 1936, d’élaborer une méthode de dosage. La vitamine B, libre est extraite du milieu à doser en milieu légèrement acide ; elle est adsorbée sur une petite quantité de terre à foulon ; cette terre à foulon est éventuellement lavée avec de l’alcool ; ensuite viennent une élution par une solution de soude concentrée, une oxydation par le ferricyanure et une extraction à l’alcool isobutylique. Cette méthode est spécifique par le fait que la terre à foulon, si elle adsorbe dans un milieu biologique pas mal de substances, abandonne en milieu acide à l’alcool des substances neutres et n’abandonne en milieu alcalin que les bases caractérisées. Or, si les milieux biologiques contiennent pas mal d’aminoacides, ils ne contiennent que fort peu de bases libres. L’oxydation par le ferricyanure est une oxydation peu brutale, qui ne peut porter que sur un petit nombre de substances. Enfin, l’extraction par l’alcool isobutylique assure en-

10 CHARLES AUFFRET.

core une garantie de spécificité très grande. Au cas où le milieu à étudier contiendrait des substances fluorescentes en bleu et solubles dans l'alcool isobutylique avant oxydation au ferricyanure, il est toujours possible de l’en débarrasser par un lavage préalable à l’oxydation. KINNERSLEY et PETERS, Ont proposé en 1938, une méthode de dosage de la vitamine B; par formation d’un dérivé coloré par diazotation. Malheureusement, l’azoréaction qu’ils emploient porte également sur les corps à noyau imidazol, et sur les corps du groupe de la tyrosine. Cette réaction manque par conséquent tout à fait de spécificité. Seules, des techniques spéciales de purification et d’adsorption peuvent la rendre spécifique. Comme la vitamine B, est toujours en très petite quantité par rapport aux dérivées de l’imidazol et la tyrosine, cette méthode ne paraît pas très heureuse. Postérieurement à notre travail, MEUNIER et BLANCPAIN ont perfectionné la réaction de KINNERSLEY et PE- TERS en la combinant avec l'oxydation au ferricyanure. Ils aboutissent à une méthode intéressante, mais compliquée et délicate, puisqu'elle exige des mesures de colorimétrie cinétique, dans des milieux évoluant très rapidement.

Ajoutons pour être complet, que DEVIATNIN (1938), puis WILLSTAEDT et BARANY (1939) ont essayé de perfectionner la méthode à la diazotation sans l’améliorer sensiblement.

Voici la description détaillée de notre méthode

1° Obtention d’une solution de la vitamine B; à doser, par macération de l’aliment pendant 48 heures à 37° dans l’eau acidulée par SO,H, afin d'obtenir un pH final à 4,5-4,6, suivie d'une expression et d’une filtration. Afin d'éviter le développement de microorganismes et par suite une perte de vitamine, nous ajoutons pour 100 cm d’eau acidulée, 10 cm* d’alcoo! à 90° contenant en solution 0,20 g. d'acide salicylique.

Cette méthode d’extraction dérive de celle de SEIDELL, décrite par JANSEN et DONATH, et adoptée par la Conférence Internationale de Londres en Juin 1934 pour l’obtention de l’étalon international de vitamine B,;.

2° Adsorption de la vitamine par agitation avec de la terre

à foulon pendant 1 h. 30°. Centrifugation et lavage de l’adsorbat par de l’eau sulfurique à pH : 4,6 puis par de l’alcoo!l éthyliquéran90==Æsseéchasetm #10

3° Oxydation de la vitamine par le ferricyanure de potas-

sium en présence de 3 cm d’une solution de soude à 10 p. 100 et 2 cm d'alcool méthylique. Il faut 0,02 em* de solution de ferricyanure de potassium à 1 p. 1000 par gamma de vitamine B;. Plusieurs essais d’oxydation sont nécessaires afin de déterminer le volume optimum de solution oxydante à ajouter. Durée d’oxydation : deux minutes. Par une étude systématique de l’action du ferricyanure de potassium sur la vitamine B; JANSEN a montré qu’en opérant en présence d'alcool méthylique, un fort excès de ferricyanure (20 fois la dose minima nécessaire) ne produisait aucune réduction appréciable de Ia fluorescence.

4° Extraction du thiochrome par 13 em* d’alcoo!l isobutylique. Agitation de cinq minutes. Centrifugation pour séparer les deux couches.

»° Prélèvement de 10 cm de la solution alcoolique de thiochrome et comparaison de la fluorescence à celle d’une gamme de thiochrome allant de 30 + à 0 5, obtenue dans les mêmes conditions d’oxydation et d'extraction à partir de solutions aqueuses titrées de vitamine B, — (KARRER et KuBLr 1938).

FLAVIER et GENEVOIS préparent les extraits de vitamine B; en utilisant une solution d’acide trichloracétique à 5 p. 100 ou d'acide chlorhydrique décinormal À froid les extraits sont obtenus en quinze heures. Les extraits par l'acide chlorhydrique sont obtenus en dix minutes à lébullition. Ils étudient les jus de fruits directement.

La vitamine adsorbée sur la silice fossile y est oxydée en milieu alcalin en utilisant une solution de ferricyanure de potassium à 1 p. 100. Ils extraient aussitôt par 10 cm° de chloroforme qui ne présente pas l'inconvénient de l’alcool isobutylique d’être souvent légèrement fluorescent et de nécessiter une distillation.

Après la description de ces différentes méthodes de dosage, nous allons exposer les résultats obtenus en suivant le mode opératoire que nous avons utilisé.

Le riz étant la base de l’alimentation de l’Indochinois en général et du -Tonkinois en particulier, nous lui réserverons

un chapitre spécial.