CHAPITRE

Historique du Bacille de la Tuberculose

2 4er, — Recherches antérieures à celles de Koch.

Ce fut Klebs (1) qui, le premier en 1877, donna une description de lélément parasitaire spécifique de Îa tuberculose.

Par un procédé de culture spécial, 1l obtint de petites oranulations mobiles, et de petits bâtonnets très-courts, qui, après plusieurs cultures, déterminérent une tuberculose des plus marquées.

A côté de ces éléments, il en trouve d’autres, petits bâtonnets courts et grèles de deux millièmes de millimètre de longueur, également mobiles : ces bâtonnets lui semblent formés par les premiers organismes accouplés.

Les recherches de Reinstadler (2), son élève, viennent confirmer les travaux du maître. Dans un liquide de troisième culture, 1l trouve à un grossissement de 450 à 900 diamètres, des granulations sphériques, à peine visibles, d'ordinaire isolées, parfois accouplées deux à deux. Elles sont beaucoup plus petites que les bactéries de sang putréfié. À un grossissement de 800 à 1200 diamètres, elles apparaissent extrèmement mobiles. Dans les tubercules résultant d'inoculations faites avec ce liquide de culture, il trouve au milieu. des éléments cellulaires, de

(1) Klebs : Ueber Tuberkulose Prag. med. Woch., n° 42-43, 1877. (2) Reinstadler : Arch. f. experim. Path. und Pharmalk., 1879.

petites granulations rondes, réfringentes, analogues à celles qui existent dans les liquides de culture, à celles que Klebs avait décrites, mais immobiles.

Schuller (1) obtient les mêmes résultats : par l’inoculation, il retrouve les mêmes micro-organismes dans tous les foyers tuberculeux.

Deutschmann (2) arrive à des conclusions différentes, mais tirées de la nature même des expériences des auteurs précédents; il ne décrit pour sa part aucun micro-organisme spécial.

En France, M. Toussaint (3), cultivant des produits ‘tuberculeux dans du bouillon de poulet, y décrit des masses floconneuses constituées par des amas extrêmement riches d'un microbe spécial : « Examinés au microscope, dit M. Toussaint, les points agglomérés montrent des amas extrèmement riches d'un microbe qui paraît ‘alors immobile et répandu isolément sur toute la surface de la préparation. Dans les parties liquides, au contraire, on observe des granulations isolées, géminées ou réunies en plus grand nombre, et douées d'un mouvement brownien très prononcé. Plus tard, la couleur blanchâtre du liquide devient uniforme et enfin les microbes tombent au fond. Leur réfringence est beaucoup plus grande à la fin qu'au début de la culture : le diamètre à diminué, 1l est un peu inférieur à celui du microbe du choléra des poules. »

Pour Eklund (4) qui rechercha les microbes dans les crachats des phthisiques, ils se trouvent dans les cellules elliptiques ou ovoïdes qu'on remarque dans leur expec-

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toration. Ces microbes, qu'il considère comme l'élément spécifique de la tuberculose, sont surtout remarquables par leur vie « turbulente et inquiète ».

Dans le même moment, Aufrecht (1) disait que le centre des tubercules était formé d'une part de fins micrococcus isolés ou réunis par deux ou trois, d'autre part de bacilles très réfringents dont la longueur est environ le double de la largeur. ,

De son côté, Baumgarten (2) en décrivait d'autres occupant tous le nodule tuberculeux mais plus nombreux au centre qu'à la périphérie. Les bacilles de Baumgarten ressemblent au bacterium termo, mais ils sont un peu plus longs et un peu moins larges : leurs contours sont moins nets. Tantôt ils paraissent régulièrement cylindriques, tantôt renflés à leurs deux extrémités. Ordinairement isolés, rarement géminés, ils ne se colorent pas comme les bactéries de la putréfaction, par le liquide de Weigert.

Jusque-là, toutes les descriptions du microbe spécifique de la tuberculose n'avaient réussi qu'à mettre plus de doute dans l'esprit des observateurs rigoureux. D'ailleurs, cette spécificité du microbe n'était nullement prouvée.

À mesure que la doctrine parasitaire se développait, on était arrivé à formuler un certain nombre de désiderata qui pussent permettre d'affirmer l'infectiosité, la contagiosité de cet élément. Pour qu'un élément parasitaire puisse être considéré comme spécifique d’une affection infectieuse, il faut en effet trois conditions :

1° Que cet élément se rencontre dans toutes les lésions appartenant à cette affection, et ne se rencontre que là ;

(1) Aufrecht : Path. Mitheilung, 1881, (2) Baumgarten : Central. f. med. Wiss., n° 15, 1882.

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2° Que l’on ait un moyen de différencier cet élément parasitaire de tous les autres;

3° Que cet élément isolé et reproduit par la culture, soit capable d'engendrer les lésions semblables à celles où il a primitivement pris naissance.

Ce sont les trois conditions que Koch avait déjà posées quelques années auparavant et qu'il a réalisées au point de vue du microbe de la tuberculose (1).

& 2. — Microbe de Koch.

Le dix avril 1882, le savant professeur de Berlin, annonça à la Société de physiologie de cette ville, qu'il était parvenu à isoler et cultiver ce microbe. Pour lui, les bactèries sont très grèles : elles ont la forme de bâtonnets et une longueur qui varie du quart à la moitié et aux deux tiers du diamètre d'un globule rouge. Elles sont immobiles, n'ont pas de mouvements propres. Leur épaisseur est très minime; on rencontre souvent dans leur intérieur deux à quatre points clairs : ce sont les spores qui ont l'aspect de vacuoles ovales, très réfringentes, singulièrement espacées. Ces bactéries ressemblent assez, comme forme et comme dimensions, aux bactéries de la lèpre. Mais ces dernières s’en distinguent en ce qu'elles sont un peu plus déliées, pointues à leurs extrémités ; en outre, à l'inverse des bacilles de la tuberculose, elles se colorent par le liquide de Weigert.

Nous n’entrerons pas dans le détail des expériences que fit Koch pour démontrer que non-seulement la présence des bacilles est liée à la tuberculose, mais encore qu'ils sont l'agent de la virulence, qu'introduits dans un orga-

(1) Koch : Berlin. Klin. Woch., 10 avril 1882.

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nisme animal, ils reproduisent à eux seuls la tuberculose, Toujours est-il que c'est à Koch que revient l'honneur d’avoir démontré nettement l'existence du bacille, bien différent, on le voit, du microbe de Klebs, Schuller, Toussaint.

$ 3. — Objections aux travaux de Koch.

Néanmoins les travaux de Koch trouvent encore des contradicteurs. Spina (1) prétend que certaines bactéries non tuberculeuses présentent les mêmes colorations que les bacilles tuberculeux. De plus, il n'a jamais rencontré ces derniers dans les tubercules à divers stades de développement, quand ceux-ci provenaient d'organes non exposés au contact de l'air. | |

Klebs (2) va plus loin. Poùr lui la question morphologique des organismes tuberculeux ne semble pas absolument tranchée par les travaux de Koch : du reste plusieurs observateurs répétant ses expériences ne sont pas arrivés au même résultat : les insuccès s'expliquent en partie par les difficultés des réactions de coloration « Qu'est-ce qui nous dit, ajoute Klebs, que tous les bàtonnets colorés sont des microbes, et de ce que Koch n’a jamais pu observer chez eux de mouvements, n’est-on pas en droit de conclure qu'une partie au moins de ces bâtonnets sont de nature cristalline? Sans doute les bacilles du charbon sont également immobiles, mais du moins a-t-on pu observer chez eux les phénomènes de développement et la formation de spores, ce que Koch n’a pas observé pour ses bacilles. On peut donc tout au plus admettre

(1) Spina : Studien ueber Tuberkul. (Wien 1883). (2) Klebs : Arch. f. exp. Path. und Pharmak. (28 mars 1883).

comme probable leur nature organisée. De plus, il est douteux qu'ils se rencontrent dans tous les tubercules; Koch, lui-même, ne les à pas découverts dans les processus caséeux anciens, et Lichtheim (1), qui les à recherchés dans les crachats est obligé d'admettre que pour les rencontrer, il faut un processus destructif communiquant avec les bronches. Il est donc des individus cliniquement tuberculeux qui ne présentent pas de bacilles dans leurs crachats. »

M. Malassez (2), en France, sans contredire les théories de Koch, vient à la suite de recherches négatives au point de vue des bacilles, dans un cas de tuberculose locale, chez un enfant mort quelques jours après, de méningite tuberculeuse, émettre l'hypothèse de plusieurs espèces de tuberculose, une à bacilles, et une autre ou: plusieurs même sans bacilles. Cette question d’une tuberculose sans bacilles étant très importante, surtout si nous nous plaçons au point de vue de la valeur diagnostique du bacille luimême dans les affections tuberculeuses, nous pensons qu'il est nécessaire de résumer ici la communication que M. Malassez vient de faire tout dernièrement à la Société de biologie et d'indiquer ses conclusions.

Les inoculations successives, faites par Malassez, de la matière caséeuse prise sur le tubercule de Ia peau de cet enfant, reproduisent la tuberculose.

On ne peut pas dire qu'il ait mal opéré, puisque dans d’autres cas de tuberculose où il opère de la mème façon, il retrouve toujours des bacilles dans les séries d’inoculations.

(1) Lichtheim : Zur diagnostichen Verweitung der Tuberkelbacillen (Forschritte der Medicin 1-1-83).

(2) Malassez et Vignal : (Comptes-Rendus de la Société de biologie, 19 mai 1883). ;

L'examen microscopique de ce tubercule, fait avec le plus grand soin, lui a fait voir, au milieu de cellules rondes en assez grand nombre, de quelques cellules épithéliales, et aussi de quelques cellules géantes, des masses zooglœiques variables de forme et de volume, constituées par de nombreux microbes parfaitement immobiles, très rapprochés les uns des autres, très petits et tous de même volume.

Les procédés de coloration de Koch ne leur sont pas applicables. Sur les préparations colorées au picrocarminate, ils se détachent en jaune sur le fond rouge du reste de la granulation tuberculeuse que l’on examine.

Quand les granulations sont caséifiées, les masses zo0glæiques ne sont pas aussi faciles à trouver. On ne les observe plus que dans la zone inflammatoire périphérique et là elles sont parfois peu développées.

Y a-t-il parenté entre ces masses et les bacilles? L'absence constante de bacilles de Koch et de Baumgarten dans les lésions les plus récentes comme dans les plus anciennes, prouve hien que ces masses ne sont pas une des formes de developpement du bacille. Les micrococques de’ces masses zooglœæiques ne ressemblent pas certainement aux monades tuberculeuses de Klebs retrouvées par Reïinstadler et Schuller. « Peu importe du reste, dit Malassez : le point important, c'est qu'à côté de la tuberculose à bacilles de Koch, 1l en existe au moins une autre qui n'en contient jamais, mais qui est caractérisée par la présence d'un micro-organisme se présentant dans les jeunes granulations sous forme de micrococques réunis en masses zooglœiques plus ou moins volumineuses. Aussi proposerons-nous de la désigner sous le nom de tuberculose zooglæique. »

Quoiqu'il en soit, 1] ne nous appartient pas ici de discuter la valeur de chacune de ces opinions. Ce que nous pouvons dire, c'est que Koch, à l'aide d'une méthode simple et parfaitement rationnelle, parvient à déceler des microbes qui sont considérés comme l'élément spécifique de la tuberculose.

CHAPITREUIT

Technique de la recherche du Bacille de la Tuberculose

$ 4er. — Des différents procédés employés.

Depuis Koch, des procédés divers ont été mis en essai et en usage pour la recherche du bacille. Nous devons avant tout faire connaitre les conditions dans lesquelles Koch a opéré pour arriver à sa découverte.

Procédé de Koch. — On prend une petite parcelle de crachats, que l’on a soin de choisir dans les portions purulentes : on la place entre deux couvre-objets, on étend en séparant les deux lamelles par glissement et on dessèche rapidement en passant deux ou trois fois la lamelle dans la flamme d’un brûleur de Bunsen. Les verres sont ensuite plongés dans un liquide colorant obtenu de la manière suivante :

On ajoute à 200 cent. cube d’eau distillée 1 cent. cube d'une solution concentrée de bleu de méthylène dans lalcool; le mélange effectué, on y ajoute deux dixièmes de cent. cube d’une solution à dix pour cent de potasse caustique dans l’eau. On laisse les plaques au contact de la matière colorante pendant vingt-quatre heures ou bien

pendant une demi-heure lorsqu'on chauffe au bain-marie. On retire les couvre-objets et on verse sur eux quelques gouttes d’une solution concentrée de vésuvine dans l'eau. Cette solution doit être filtrée chaque fois avant de s'en servir. Quand les verres sortent du bain colorant, les éléments histologiques sont colorés en excès, mais après avoir été plongés dans la vésuvine, la coloration disparaît et fait place à une teinte brune. Sous le microscope, tous ces éléments sont alors teints en brun clair, tandis que les bacilles apparaissent avec une belle coloration bleue. Il est facile de les reconnaître même quand ïls sont en petit nombre.

Le procédé de Koch est défectueux en ce que la potasse exerce une action dissolvante très légère sur les divers éléments histologiques et les rend moins visibles. Sous son influence, les corpuscules albuminoïdes se gonflent à l'excès, et les couches coagulées de matière morbide se détachent facilement des verres couvreurs. Aussi Erlich a-t-il cherché à substituer à la potasse, dans le procédé de Koch, une autre base agissant d’une manière plus indifférente, et il a choisi la phénylamine ou aniline. Voici d'ailleurs comment opère Ehrlich :

Procédé d'Ehrlich. — Il écrase une petite portion de crachat entre deux lamelles qui sont préparées comme dans le procédé de Koch. Les préparations sont placées dans l'eau saturée d'huile d'aniline. On y ajoute goutte par goutte une solution alcoolique saturée de violet de méthyle ou de fuchsine. Les préparations se colorent d'une facon intense en un quart-d'heure ou une demi-heure.

Koch : Berl. Klin. Woeh, loc. cit.

Ehrlich : Deutsche méd. Woch. 1882, II, 19, p. 270.

La coloration isolée des bacilles s'obtient par l'emploi d'acides forts. Dans ce but, Ehrlich se sert de préférence d'un mélange d'une partie d'acide nitrique pour deux partes d'eau. Ces préparations pälissent. Tous les éléments sont décolorés, à l'exception des bacilles qui apparaissent en rouge ou en violet. Ehrlich, dans sa méthode, ne donne pas de proportions pour les substances qui doivent entrer dans la matière colorante. Weigert comble cette lacune en recommandant la formule suivante :

Solution saturée aqueuse d’aniline..:..................... 100 gr. Solution alcoolique saturée de fuchsine ou de violet de méthyle 11 —

(Le procédé prend le nom d'Ehrlich-Weigert).

Rindfleisch a observé qu'à une température de 40 degrés, les bactéries de la tuberculose atteignaient en une demiheure leur maximum de coloration.

Procédé d’Aufrecht. — Il étend sur une lamelle une mince couche de crachats, laisse sécher sous une cloche pendant une heure, met ensuite la lamelle pendant cinq minutes dans une solution aqueuse de fuchsine à cinq pour cent, puis lave un instant et examine de suite. Ce procédé colore avec les autres micro-organismes toujours nombreux dans les crachats, quelques bacilles de la tuberculose, mais ilne paraît agir que sur quelques-uns. D'ailleurs, il ne différencie pas à l’aide d’un réactif colorant net, les bacilh de Koch des autres bactéries de la préparation : c'est donc un procédé insuffisant.

Procédé de Franz Ziehl. — Franz Ziehl ayant vu que l'aniline impure n'est ni alcaline ni acide, chercha un corps plus facile à se procurer et pouvant la remplacer facilement : il trouva ce corps dans l'acide phénique. Il employa de l'eau contenant un peu d'acide phénique, à laquelle il ajouta une solution alcoolique à deux pour cent de violet

de méthyle. Cette solution colore les bacilles comme dans le procédé de Ehrlich-Weigert, mais ‘agit plus lentement. Comme Ziehl ne donne pas de proportions, Vignal a cherché celles qui paraissent être les meilleures et 1] recommande la formule suivante :

Acide phénique cristallisé.............. 1 — Sol. alcaline conc. de violet de gentiane. 10 —

On décolore ensuite les lamelles par l'acide azotique au tiers.

Procédé de Brun. — Brun, pour colorer les bacilles dans les crachats, emploie une solution concentrée de fuchsine ou de bleu de méthylène (faite avec parties égales d'eau et d'alcool et contenant un trentième d’aniline). L'action colorante doit durer un quart d'heure. Il décolore ensuite avec le mélange suivant :

Acide azotique concentré....... 5 gr.

Acide acétique glacial......... 10 — HOUSE Er CRE LT EE e DO —

Il lave ensuite rapidement, puis il recouvre la préparation pendant quelques minutes avec une solution concentrée aqueuse d'aniline. Cette base neutralise tout l'acide qui reste imprégné dans la matière organique, malgré les lavages, et rend aux bactéries toute leur coloration dans le cas où l'acide aurait déjà agi sur elles.

On monte ensuite les préparations dans le mélange suivant :

GAyCeTINE TE RE M EASEUREE 10 gr.

Glucose du commerce.......... 40 — 2000! camphréme 22. eee 10 — IDUL SOLS SR, LEONE LA EE PAP 140 —

C'est là encore un procédé à une seule coloration pour lequel nous ferons quelques réserves, surtout lorsqu'il s’agit

de préparations faites avec de la sérosité, qui contient évidemment très peu de bacilles dans les cas où il en existe ; car ceux-ci étant les seules parties de la préparation qui se colorent avec quelques filaments de fibrine, la mise au point de cette préparation est extrèmement difficile.

D'ailleurs, dit Vignal, le mélange dans lequel Brun recommande de monter les préparations, se recouvre rapidement de moisissures et ne peut dès lors plus servir, Néanmoins le liquide décolorant qu'il conseille est bon ; et, d'autre part, quoique la solution d’aniline ne soit pas alcaline, comme Brun le croit, elle rend souvent aux bacilles trop décolorés une coloration intense.

Procédé de Cornil et Babésiu (1). — Ils ont employé le mélange colorant suivant :

Sol. aq. concent. de violet de gentiane ou de fuchsine. DySre SUL A CONCON TS D'ATTIRER ti CT EUR 100 —

On laisse agir vingt-quatre heures à la température ambiante ou une demi-heure à quarante degrés centigrades, On décolore avec l'acide azotique au tiers. Lavage à l’eau et à l'alcool. On monte dans le baume.

Ce procédé n'offre aucun avantage sur celui d'Ehrlhch- Weigert, dont il n’est qu'une modification : il ne le vaut même pas, dit Vignal, car une solution colorante ne contenant pas d'alcool, n’agit pas aussi rapidement ni aussi régulièrement que celles qui en renferment. Du reste, Babésiu paraît avoir reconnu cet inconvénient, car dans une formule publiée plus tard, il ajoute à la solution précédente 5 grammes d’alcoo! absolu : il revient ainsi au liquide d'Ehrlich.

(4) Comptes-Rendus de la Société de biologie (23 avril 83).

Procédé de Zenkewitch (1). — Zenkewitch prétend queson procédé est le plus rapide et le plus sûr. Après avoir étendu et séché à l'air libre des crachats sur une lamelle, on chauffe cette dernière au-dessus d'une flamme jusqu'à ce qu'ils deviennent un peu bruns. On lave à l'eau et on met la lamelle pendant une minute ou deux dans une solution saturée de fuchsine faite dans de l'eau ayant en dissolution quatre grammes d’aniline pour cent. On lave la lamelle à l’eau et on décolore en la mettant une minute dans de l'alcool contenant une goutte d'acide azotique pour chaque dix centimètres cubes. On sëche à l'air, on chauffe de nouveau et on monte dans le baume.

Ce procédé n'est guère plus rapide que celui de Gibbes, dit Vignal; il est plus délicat et moins sûr; nous donnons plus loin ce procédé.

Procédé de Baumgarten (?). — Il humecte une préparation fraîche de crachats tuberculeux avec solution de potasse (une à deux gouttes d’une solution à trente-trois pour cent dans un verre de montre rempli d'eau distillée). Les bacilles sont alors visibles à un grossissement de quatre à cinq cents diamètres. Pour les distinguer des autres bactéries, de la putréfaction, par exemple, on enlève la lamelle et on la laisse sécher. Après une dizaine de minutes on passe encore la préparation trois ou quatre fois au travers de la flamme d'une lampe à gaz; on ajoute une goutte de solution moyennement concentrée de violet de méthyle. Les bactéries de la putréfaction sont colorées légérement en bleu; celles de la tuberculose sont incolores.

(1) Méditz Oboz, février 83.

(2) Voyez Schmitt : Thèse d’agrégation, Paris 1883. — Pour l'original, Baumgarten : Ueber Einbequemes Verfahren tuberkelbacillen in sputis nachzutweisen : Centralb. f. med. Wissenschaft 82.

Ici Baumgarten est en contradiction avec Ehrlich, car les bacilles de la tuberculose sont incolores bien qu'il emploie une solution de potasse.

Palmer et Frœæntzel (1). — Ils préparentles lamelles comme dans les procédés précédents. Comme matière colorante, ils se servent de violet de gentiane ou de fuchsine. Ils prennent un gramme de substance qu'ils dissolvent dans cinquante grammes d'eau saturée d’aniline, puis ils filtrent; après avoir versé quelques gouttes de cette matière colorante dans un verre de montre, ils y mettent les préparations qu'ils laissent ensuite pendant vingt-quatre heures. Au bout de ce temps on lave les lamelles à grande eau, puis on les met pendant une demi-minute à une minute dans une solution d'acide nitrique à un pour trois d'eau distillée. Les préparations sont alors complètement décolorées : on les lave ensuite à l'eau distillée, puis on les place dans une solution aqueuse concentrée de brun de Bismark, si la préparation avait été préalablement colorée par le violet de gentiane, de bleu de méthylène, si elle l'avait été par la fuchsine. On les laisse pendant une minute environ, on les lave à l'eau distillée, et on les sèche au papier buvard. Lorsqu'on veut monter les préparations dans le baume de Canada, on les passe dans la flamme d'un brûleur de Bunsen. Balmer et Fræntzel recommandent de se servir de solutions fraîches et filtrées pour éviter surtout des précipités de matière colorante sur les plaques.

Ce procédé qui n’est autre chose que le procédé de Ehrlich modifié a les mêmes avantages que lui sur le procédé

(1) Balmer et Fræentzel : Ueber das Verhalten der Tuberkelbacillenimauswurf wahrend des Verlaufs der Lungenschwindsucht. Berl. Klin. Woch., n° 45, 1882. — Vignal : Comptes-Rendus hebdomadaires de la Société de biologie (19-26 mai 1883). ;

de Koch: de plus les bacilli ont une coloration plus nette; elle tranche nettement sur la coloration du reste de a préparation : quand on a employé comme substance colorante le violet de gentiane et la vésuvine, les bacilli sont en bleu violacé foncé sur un fond jaune; quand on a employé la fuchsine et le bleu de méthylène, ils sont franchement rouges, tirant sur le violet sur un fond bleu. Vignal reproche à ce procédé la nécessité de préparer la solution au moment de s’en servir. Pour notre part, nous ne comprenons pas très bien l'observation de Vignal : nous avons eu des solutions de violet de gentiane et de fuchsine préparées d’après les indications de Balmer et Fræntzel et même deux ou trois fois plus concentrées et nous les avons conservées absolument intactes pendant trois ou quatre semaines. Les solutions, employées au bout de ce temps, nous ont toujours donné de bons résultats et les bacilli étaient toujours également colorés.

Procédé de Finkler et Eichler de Bonn (1). — Finkler et Eichler de Bonn, ont employé pour la recherche du bacille un procédé analogue à celui de Balmer et Fræntzel. Il peut se résumer ainsi : coloration en bleu des bacilles avec le bleu de méthylène, décoloration de toutes les autres parties de la préparation par l'acide nitrique, coloration nouvelle avec le brun de Bismark.

Les bacilli se présentent donc en bleu sur fond brun. C'est en somme le procédé de Koch dans lequel on a rem placé la potasse par l'eau anilinée et on a ajouté la décoloration par l'acide. Les recherches de ces deux auteurs leur ont permis de constater : que si, d’un côté, le lavage à

(1) Progrès médical, 5 mai 1883. Voir article original : Ueber Erkennung der Tuberkelbacil. Centralb. f. méd. Wiss, n° 14, 1883.

l'eau après un bain d'acide peu prolongé, fait quelquefois reparaitre la coloration bleue des bacilles de la tuberculose, il peut encore la faire réapparaitre sur d'autres micro-organismes, noyaux de cellules ; que d'un autre côté, un bain d'acide d'un certain temps peut faire perdre aux bacilles de Koch la propriété de récupérer leur coloration bleue par le lavage à l'eau; que les bacilles tuberculeux ne peuvent prendre une seconde coloration à l'inverse des autres bacilles et éléments contenus dans la préparation. Les bacilles tuberculeux ne se colorent en brun que s'ils ont définitivement perdu toute leur coloration.

De tous ces faits, Finkler et Eichler concluent que la double coloration est d'importance capitale, puisqu'elle permet de reconnaître pour indifférents les bacilles qui ont conservé la coloration bleue malgré l'action de l'acide nitrique. Elle limite les chances d'erreur que laisse subsister une seule coloration avec traitement consécutif à l'acide nitrique. Il ne faudrait non plus conclure de l'absence de bacilles bleus sur fond brun à la non-existence de la tuberculose, avant d'avoir examiné un grand nombre de préparations ayant séjourné un temps différent dans l'acide nitrique.

Procédé de Gibbes(1). — (Revue des sciences médicales, n° 42 15 Avril 1883). Ce procédé ne diffère des deux précédents que par les solutions colorantes. Gibbes emploie comme matières colorantes : d’une part, la solution de cristaux de magenta qui imprègne le bacille; d'autre part, la chrysoïdine qui teint les substances voisines en respectant le bacillus.

La solution magenta est ainsi composée :

(1) Heneage Gibbes: À new Meth. for the detect, of the tubercle bacillus. British méd. journal. page 736. Oct. 82.)

Cristaux magenta ere 2 grammes ANNE DUT ee Mer ee pes 3 — AACOOT ES PRES PP ARE 20 — Pau distilliôe, ME ALORS PRES 20 ——

La solution de chrysoïdine se fait en dissolvant à saturation de la chrysoïdine dans de l'eau distillée, puis en ajoutant un cristal de thymol dans un peu d'alcool absolu pour conserver la solution. Il est également nécessaire d'avoir une solution diluée d'acide nitrique (une parte d'acide pour deux d'eau). On prépare les lamelles comme pour les procédés précédents : on verse ensuite sur un verre de montre quelques gouttes de la solution magenta que l’on recouvre exactement avec la lamelle qui porte le crachat, celui-ci étant au contact de la solution colorante sans interposition d'aucun intermédiaire : on laisse ainsi pendant 15 à 20 minutes. On le traite alors par l'acide nitrique qui enlève toute la substance colorante en quelques minutes: on lave ensuite à l'eau distllée pour enlever l'acide, et on fait agir la solution de chrysoïdine qui colore la préparation. On lave de nouveau à l'eau distillée, puis on traite par l'alcool absolu; on laisse sécher la préparation et finalement on la monte dans le baume de Canada. Le bacille est coloré d’une façon parfaite.

Ce procédé, nous devons le dire, ne nous a pas donné de bons résultats : notre solution magenta s'est précipitée trèés-rapidement, en formant des dépôts considérables de matière colorante sur la lamelle, dépôts qui ne s’en allaient qu'après une immersion suffisamment prolongée dans l'acide nitrique, de sorte que souvent les bacilles euxmêmes étaient beaucoup trop décolorés. La solution de chrysoïdine comme matière colorante du fond de la PrÉpstion nous à paru excellente.

$ 2. — Discussion sur la valeur de ces différents procédés.

De tous les essais que Vignal a faits de ces méthodes, il üre les conclusions suivantes: 4° Pour la recherche des bacilles de Koch dans les crachats, la solution de Gibbes paraît la meilleure, car elle est la plus rapide; il n’est nul besoin de monter les préparations dans le baume ; l’examen dans l'eau ou la glycérine est suffisant pour des préparations temporaires. Cette méthode est surtout commode pour le clinicien; les solutions se gardent bien, elles n'exigent aucun appareil spécial, enfin elle est très-rapide.

2° A défaut d'aniline, on peut la remplacer par l'acide phénique, comme Ziehl l'a fait. La solution indiquée se conserve parfaitement dans un flacon bouché, mais elle prend un temps plus long pour colorer le bacille.

3° Pour les coupes, la formule de Ehrlich ou celle de Ehrlich-Weigert me paraît la meilleure. Il faut, lorsqu'on emploie le mélange de Ehrlich-Weigert, le filtrer quelques minutes après l'avoir fait. Sans cette précaution, on a presque toujours à la surface des préparations un précipité granuleux. Avec le mélange de Ehrlich, cette précaution est inutile. Si on est pressé, il faut chauffer ces solutions avec les coupes à 40 degrés pendant une demi-heure,comme le recommande Rindfleisch.

4 Comme mélange décolorant, Vignal préfère celui de Balmer et Fræntzel. Il agit rapidement. Aussitôt qu'on ne voit plus de matière colorante brune ou jaune sorür de la préparation qu'on agite dans l'acide azotique dilué au quart, on arrête la décoloration en la portant dans l'eau distillée où on la laisse quelques minutes pour la débar-

Resser de l'acide.

‘5 Le liquide décolorant de Brun rend souvent de grands

services, surtout dans la préparation des tissus, si la coupe est épaisse et contient beaucoup de tissu conjonctif.

6° Il est presque toujours avantageux de colorer le fond, car les bacilles sont plus nets. Vignal préfère à toutes les autres matières colorantes la vésuvine qu'il emploie en solution très faible : deux parties desolution aqueuse concentrée pour dix d'eau. Les coupes doivent y séjourner de 20 à 25 minutes, suivant que la décoloration aura été plus ou moins avancée.

7° Enfin la solution de gomme et de glycérine (parties égales) que recommande Rindfleisch paraît préférable au baume ; les préparations sont plus nettes et le montage est plus rapide. De nos propres recherches, il résulte que nous ne partageons pas entièrement les idées que M. Vignal émet dans ses conclusions.

Pour la recherche des bacilles dans les crachats, nous donnons sans hésiter la préférence au procédé de Balmer et Fræntzel. Ce procédé est aussi commode que celui de Gibbes, quoique demandant un temps plus long. Comme ce dernier, il n'exige l'emploi d'aucun appareil. En outre, la solution colorante de Frantzel au violet de gentiane dépose moins que la solution de Gibbes (cristaux de magenta.)

En ce qui concerne les coupes, nous n'avons pas à conclure, nos recherches ayant toujours porté sur des crachats, du pus, du sang, de la sérosité, ou des matières fécales. Nous pouvons dire cependant que les nombreux essais faits sur les coupes par M. le professeur Coze l'ont amené à se servir également pour celles-ci du procédé de Balmer et Fræntzel un peu modifié, de préférence à celui de Gibbes. Cependant, comme matière colorante, il se sert alternativement de la vésuvine et de la chrysoïdine.

rem 2

Pour les autres conclusions, nous nous rangeons à l'opinion de Vignal en faisant remarquer toutefois qu'il n'insiste pas assez sur la nécessité de se servir de deux solutions colorantes, l’une pour le fond, l'autre pour les bacilles afin de les voir avec plus de netteté.

En somme, le procédé qui nous a le mieux réussi est encore celui de Balmer et Fræntzel, dont nous nous sommes servi dans presque toutes nos recherches. Nous avons pourtant, dans ces derniers temps, apporté une modification au manuel opératoire et voici comment nous procédons.

$ 3. — Du Procédé employé dans nos recherches.

PRÉPARATION DE LA LAMELLE. — 1° Crachat, pus, mat. féc. — Nous choisissons dans la partie purulente une portion de crachat grosse comme une tête d'épingle, nous le déposons sur une lamelle et nous la recouvrons d’une autre lamelle, nous écrasons, de façon à bien étendre le crachat et à avoir des parties de substance extrêmement minces puis nous séparons par glissement. Nous exposons ensuite ces plaques pendant une demi-minute à une température de 50 degrés environ, au-dessus de la lampe à alcool, ou mieux, nous les passons rapidement deux ou trois fois dans la flamme même de la lampe; le crachat est alors desséché sur la lamelle.

2° Sérosité, Sang. — Pour la sérosité ou le sang, nous mettons une goutte de liquide sur la lamelle, nous la recouvrons avec une autre lamelle, et nous séparons immédiatement par glissement. Le liquide est alors uniformément répandu sur la lamelle, et forme une mince couche qui se colorera très bien et pourra être facilement examinée, On dessèche comme pour les crachats.

3 Sueur. — Pour la sueur, nous prenons une goutte

M ve

d'albumine de blanc d'œuf que nous ajoutons à quatre gouttes environ de sueur; nous mélangeons avec une baguette de verre ; lorsque le mélange est bien intime, nous opérons avec lui comme avec la sérosité. L'albumine que nous avons employée a pour but de fixer sur la lamelle les différents éléments de la sueur.

CoLoRATION DES ÉLÉMENTS. — Les lamelles étant préparées nous versons dans un verre de montre ou mieux dans une petite capsule de porcelaine quelques gouttes de la solution colorante suivante : ?

Violet de gentiane........... 6 grammes.

Eau saturée d’aniline......... 100 —

Nous plongeons la lamelle dans le liquide colorant, et nous chauffons lentement au-dessus d’une lampe à alcool, en faisant en sorte de ne pas porter le liquide à une température supérieure à 80 degrés; nous maintenons à cette température pendant une ou deux minutes; nous décolorons immédiatement par l'acide nitrique au tiers pendant quinze à vingt secondes; puis nous lavons à grande eau. Nous plongeons ensuite la lamelle dans une solution de chrysoïdine préparée comme dans le procédé anglais de Gibbes.

La chrysoïdine colore la préparation en un jaune pâle sur lequel ressortent beaucoup mieux les bacilles colorés en bleu par le violet de gentiane. La coloration des éléments qui forment la préparation est complète au bout d'une minute: nous retirons la lamelle, nous la lavons à grande eau, et nous montons dans la glycérine. Lorsqu'il s’agit de conserver les préparations, après les avoir préalablement désséchées entre deux feuilles de papier, nous les passons une ou deux fois dans la flamme d'une lampe à alcool, et nous montons dans le baume.

La préparation complète d'une plaque, par ce procédé, ne nous demande pas plus de dix minutes. L'imprégnation du bacille par la matière colorante se fait très bien et très rapidement sous l'influence de la chaleur, et la préparation n'est nullement altérée. Nous avons fait du reste un certain nombre d'essais comparatifs, avec des lamelles préparées avec les mêmes crachats, dont les unes avaient séjourné 84 heures dans le violet de gentiane, comme dans le procédé de Balmer et Fræntzel, et les autres avaient été faites comme nous l'avons indiqué plus haut. Dans tous les cas, les préparations faites extemporanément nous ont donné des résultats tout aussi satisfaisants, sinon meilleurs ; car plusieurs fois ayant laissé nos préparations pendant 24 heures dans de la matière colorante déjà un peu ancienne, il nous a été impossible d'obtenir aucun résultat, par suite de la formation sur la plaque d'une multitude de petits cristaux très adhérents, qui ne disparurent même pas dans l'acide azotique au tiers au bout d’une minute d'immersion. Le procédé que nous avons employé dans ces derniers temps, peut parfaitement s'appliquer aux recherches cliniques au lit du malade.

Dans tous les cas où nous avions à constater sur des plaques, la présence d’une très petite quantité de bacilles, les préparations extemporanées étaient encore celles qui étaient le plus concluantes. Il n’y a du reste pas à craindre en chauffant, que les bacilles se ratatinent par la chaleur, puisque préalablement, pour coaguler et fixer la matière albuminoïde, on a déjà porté la plaque à une température au moins égale à celle à laquelle on porte le liquide colorant.