MÉTHODES SPÉCIALES DE PRÉPARATION

Méthode de Koch. — On place les préparations sur un couvre-objet dans une solution alcoolique concentrée de :

ENCYCLOPÉDIE CHIMIQUE. — G.YRMER ET SCHL.4GDENHAUFFEN.

Bleu de méthylène. 1

Potasse a 10 p. 100. 3

Eau distillée. -00

Pendant 24 heures ou pendant 1 heure, si la solution est cliaulféc à 40°. On rince dans l’eau, on plonge dans une solution aqueuse de vésuvine pendant deux minutes, on rince dé nouveau dans l’eau et l’on examine : ou apres avoir rincé dans l’eau, on traite, avec l’alcool, l'huile de girofle et le haume de Canada.

Méthode d’Ehrlich. — On laisse flotter les préparations sur couvre-objet dans un verre de montre contenant une solution de violet de gentiane ou de fuchsine, ajoutée à do l'eau d'aniline. On verse alors une solution alcoolique saturée de la teinture, jusqu’à ce qu’il se forme un commencement de précipité (10°° d’eau d'aniline et 10 à 20 gouttes de la solution colorante). On laisse les couvre-objets dans la solution pendant une demi-heure environ; alors on les lave pendant quelques secondes dans l’acide nitrique fort (1 p. d’acide du commerce et 2 p. d’eau distillée), et l’on rince dans l’eau distillée. On procède alors à la double coloration avec la vésuvine ou de bleu de méthylène, on rince dans l’eau, on sèche et l’on conserve dans le haume de Canada.

Les coupes et les préparations sur couvre-objet peuvent être colorées par cette méthode comme l’a indiqué Koch (Miilheii. a. d. Gesundheilsamte, II, 1884) : Solution alcoolique saturée de violet de méthyle ou fuchsine. . . 11

Eau d'aniline. 100

Alcool absolu. 10

On laisse les préparations pendant 12 heures dans cette solution. On peut colorer plus rapidement les préparations sur couvre-objets en chauft'ant la solution.

Traiter les préparations avec une solution d’acide nitrique (1 p. d’acide du commerce et 3 p. d’eau distillée) pendant quelques secondes.

Laver dans l’alcool à 00 p. 100 pendant quelques minutes; les préparations sur couvre-objets n’ont besoin d’être rincées qu’un moment. On colore en double avec une solution diluée do vésuvine ou do bleu de méthylène pondant quelques minutes.

On lave encore dans l’alcool à 60 p. 100, pids on déshydrate dans Talcoo) absolu.

On clarifie avec Thuile de cèdre et on monte au baume de Canada.

Méthode de Rindfleisch. — Préparer une solution composée de :

Solution alcoolique saturée de fuchsine. 10 gouttes

Eau d'aniline. .Te',50

Verser dans un verre de montre et laissoY- flotter le couvre-olijet; chauffer le verre do montre sur la flamme d’une lampe à alcool, jusqu’à ce que la vapeur se dégage. Eloigner de la flamme et laisser reposer pendant cinq minutes. Enlever le couvre-objet et le transporter pendant quelques secondes dans l'alcool acidulé (2 gouttes d’acide nitrique dans un verre do montre rempli d’alcool). Laver dans Teau distillée, sécher et conserver dans le baume de Canada.

La double coloration, si elle est nécessaire, s’obtient avec le brun de Bismark ou le bleu de méthjdène.

Méthode de Gibbes. — Colorer la préparation sur couvro-objet dans la solution suivante ;

Magenta. 2

Aniline. 3

Alcool (D = 0,830). 20

Eau distillée. 20

pendant quinze à vingt minutes. Laver dans une solution d’acide nitrique (t p. d’acide et 3 p. d’eau distillée) jusqu’à ce que la couleur disparaisse. Rincer dans l’eau distillée. La double coloration s’obtient avec le bleu de méthylène, le vert d’iode ou la solution aqueuse de chrysoïdine ; on laisse les préparations en contact avec la couleur pendant cinq minutes. Laver dans l’eau distillée jusqu'à ce que la couleur ne disparaisse plus. Transporter dans l’alcool absolu pendant cinq minutes; sécher et conserver dans le baume de Canada. Laisser les coupes dans la teinture pendant une demi-heure, traiter avec l’acide nitrique et laver à l’eau distillée.

Transporter dans le blende méthylène jusqu’à coloration intense; laver de nouveau dans l’eau distillée et ensuite dans l’alcool faible. Passer dans l’alcool absolu et l’huile de girofle, et conserver dans le baume de Canada.

Nouvelle méthode de Gibbes. — Placer les préparations sur couvre-objets dans la solution à double coloration que l’on obtient de la façon suivante :

Chlorhydrate de rosaniline. 2

Bleu de méthylène. t

Triturer dans un mortier de verre.

Dissoudre 3 p. d’aniline dans 13 p. d’alcool rectifié.

Ajouter doucement cette solution au premier mélange et additionner lentement 13 p. d’eau distillée. Conserver dans un flacon bien bouché.

On chauffe la solution ainsi préparée dans un tube et on la verso dans un verre de montre aussitôt que la vapeur se dégage. On y laisse séjourner les préparations pendant cinq minutes, puis on les lave dans l’alcool métliyliqiie jusqu’à ce que la couleur ne disparaisse plus, on sèche à l'air ou sur une lampe à alcool, et on monte au baume de Canada. Si l’on ne chauffe pas la solution, on doit y laisser les couvre-objets plongés pendant une heure. Les coupes sont traitées d’après les mêmes principes, mais on doit les laisser dans la solution pendant plusieurs heures. On évite le plus possible la contraction des coupes par Tacide nitrique.

Méthode de Baumgarten. — On prépare une solution comme suit : laisser tomber 4 à b gouttes de solution alcoolique concentrée de violet de méthylène dans un petit verre de montre plein d’eau.

a) Colorer les coupes dans cette solution, les laver dans Teau, et décolorer dans l’alcool absolu pendant cinq à dix minutes; ou bien, avant de traiter à l’alcool, plonger les coupes pendant cinq minutes dans une solution à moitié saturée de carbonate de potasse. Passer dans l’huile de girofle et monter dans une mixture de baume do Canada, sans chloroforme, et d’huile de girofle en quantités égales. Le but de cette opération est de différencier les bacilles tuber-

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culeux des bacilles accidentels, attendu que les premiers sont graduellement décolorés par l’huile de girofle.

b) Les coupes colorées dans la solution indiquée ci-dessus sont placées pendant cinq minutes dans l’alcool, puis dans une solution concentrée de brun de Bismark dans une solution d’acide acétique à 1 p. 100. Au bout d’un certain temps, on passe à l’alcool et à l’huile de girofle, puis on monte dans le baume de Canada.

Méthode de Frenhel. — La double coloration des préparations de crachats s'obtient rapidement par la méthode suivante : mettre dans 5" d'eau d'aniline chauffée à l’ébullition, goutte à goutte et jusqu’à ce que se dessine une teinte opaline, une solution alcoolique concentrée de violet de méthyle ou de fuchsine. Laisser flotter les couvre-objets préparés, pendant deux minutes, dans la solution chauffée. Pour effectuer soit la double coloration, soit la décoloration, on place la préparation pendant une ou deux minutes dans une des solutions suivantes; pour les préparations colorées à la fuchsine, on emploie une solution saturée de bleu de méthylène dans une mixture de :

Alcool. SO

Eau dislillée. 30

Acide nitrique. 20

que l’on filtre avant de s’en servir; pour les préparations colorées dans le violet de méthyle, on prépare une solution saturée de vésuvine dans 70 p. d’alcool et 30 p. d'acide nitrique que l'on doit filtrer avant de l’employer.

Les coupes sont lavées dans l’eau ou dans l’alcool faiblement acidulé à 50 p. 100, puis séchées et montées à la manière ordinaire.

Méthode de Crookshank. — Quand les coupes sont colorées avec le violet de méthyle et le brun de Bismark par la méthode d'Ehrlich, d’après la marche indiquée ci-dessus par Koch, on peut avec avantage les plonger dans une solution alcoolique faible d’éosine, rincer dans l’alcool absolu pur, clarifier avec l'huile de girofle et monter dans le baume de Canada. On obtient ainsi trois colorations sur la préparation; les cellules géantes sont roses, leurs noyaux bruns et les bacilles se détachent très bien en bleu sur ce fond coloré.

Il nous paraît superflu de mulplifier ici l’exposé des méthodes opératoires d’un grand nombre d'autres expérimentateurs, puisque les précédentes peuvent servir de guide à ceux qui seraient tentés de les suivre.