Examen chimique

L'examen chimique comprendra :

a) L'identification et le dosage des substances proltéiques.

b) La recherche et le dosage de la dextrine.

c) Le dosage et l'examen des cendres.

d) Le dosage de l’eau.

e) Le dosage de l'acidité.

a) Identification et dosage des substances pro- DériniTIoN. — Les matières protéiques ou

téiques.

albuminoïdes, peuvent être considérées comme des nitriles complexes à poids moléculaires très élevés, aptes

à s’hydrater sous l'influence des ferments, des acides ou des alcalis étendus et formés essentiellement de carbone, d'hydrogène, d'oxygène. d’azote et de soufre ; outre qu'elles dévient à gauche, le plan de la lumière polarisée, elles présentent des réactions de coloration et des réactions de précipitation.

C'est à l’aide de ces derniers caractères que nous avons caractérisé, isolé et dosé en partie les substances protéiques contenues dans les miels.

A. — Essar quaLtrarTir. — Action de la chaleur. — La chaleur coagule les substances albuminoïdes naturelles, en milieu acide et en présence de sels. On dissout à froid 10 gr. de miel dans 50 cc. d’eau distllée et on filtre. On ajoute à la solution à étudier 6 gr. de chlorure de sodium ou de sulfate de magnésie, quelques gouttes d’acide azotique ou d'acide acétique et on porte à l’ébulhition. Un trouble même léger, ne disparaissant pas par addition d’un nouvel excès d'acide ou un précipité floconneux, indique la présence de matières albuminoïdes.

S1 l'on veut vérifier que l’on a bien affaire à des matières protéiques, on recueillera sur un fillre\ sans plis ce précipité, on le lavera à l’eau distillée, on percera le filtre et à l’aide du jet d’une pissette, on fera passer Île précipité dans un tube d'essai.

On fera alors les deux réactions de coloration suivantes :

«) Réaction æanthoprotéique. — On ajoute à la substance albuminoïde supposée, en suspension dans l'eau, quelques gouttes d'acide azotique ét on porte à l’ébulli- ‘ion ; les flocons albuminoïdes et la solution elle-même prennent bientôt une coloration jaune. Abandonnons au refroidissement et faisons couler à la surface du liquide

contenu dans le tube une solution d’ammoniaque ; les flocons albuminoïdes de la partie supérieure du liquide alcalinisé se colorent en Jaune-orange, tandis que les flocons des couches inférieures du liquide restent colorés en jaune.’ Si nous mélangeons, flocons et solution se colorent uniformément en jaune orange.

B) Réaction de Millon. -— La substance albuminoïde en suspension dans l’eau est additionnée de 1 gr. de réacüf de Millon. On porte à l’ébullition. Les flocons albuminoïdes se colorent rapidement en rouge foncé.

Préparation du réactif. — Dissoudre 1 gr. de mercure dans 2 cc. d'acide azotique de D: 1,42, d’abord à froid, élever légèrement la température, et lorsque tout le mercure a disparu, ajouter à 1 volume de cette soluon ? volumes d’eau. ;

Il). Action de l'acide azotique. — On verse dans un tube à essai ou dans un verre à expérience de l'acide azotique et on fait couler à l’aide d’une pipette, à la surface de l’acide azotique, la solution de miel à examiner ; il se fait plus ou moins vile, selon la plus ou moins grande quantité de matières albuminoïdes, un anneau blanc à la surface de séparation des deux liquides.

III). Acrion de l'acide trichloracélique. — On ajoute goutte à goutte de l'acide trichloracétique {solution à 30 °/,). On a un précipité blanc.

IV). Action du ferrocyanure de potassium et de l'acide acétique. — On prend la solution de miel ; on y ajoute 1 ce. d'acide acétique et autant de ferrocyanure de potassium en solution concentrée. Il se fait un louche, suivi d’un dépôt floconneux.

V). Action du tannin. — Une solution de tannin à

EN

5 rie ajoutée à la solution de miel, donne un précipité ‘agglomérant en flocons et dont l'intensité est en rapport avec la quantité d'albumine en présence.

VI). Action du réactif d'Esbach. — Ta solution

picrique d'Esbach se prépare en prenant :

ACIIE PICTIQUE AE ER L gr.

ACIUO CITIQUE Ans rar ee re 2 gr.

Baux RER SAN ER EMA NERS rer A0 gr.

Ce réactif versé dans la solution de miel, donne un précipité jaune se réunissant plus ou moins vite au fond du tube dans lequel on a fait l'essai. |

VIT). Action du réactif de Tanret. — La solution d’iodhydrargyrate de potassium se prépare avec :

Chlorure mereurique ........ RE 4 el lodure de potassium: 5 gr. 187 Acide. acétique Crist. e 31 ce.

Ce réactif, excessivement sensible, précipite outre les albuminoïdes (albumine proprement dite et globuline), les peptones, mais la chaleur fait disparaître le précipité dû aux peptones. \

La présence incontestable des matières albuminoïdes étant établie, il était intéressant de rechercher à quel genre de matière protéique on avait affaire.

Tout d'abord, la substance albuminoïde, coagulable par la chaleur, précipitant par l'acide trichloracétique, le tannin, etc., est-elle une albumine ou une globuline ou un mélange des deux ?

Un seul caractère permet de les différencier nettement ; il est relatif à leur solubilité dans l’eau ou dans les dissolutions salines : A) l'albumine est soluble dans l’eau

Re Ta os

pure ; le sulfate de magnésie à saturation ne la précipite pas de ces solutions neutres. B) La globuline, par contre, est insoluble dans l'eau pure, mais soluble dans les solutons salines faibles de sulfate de magnésie ; le sulfate de magnésie à saturation la précipite de ces solutions.

Pour appliquer cette double propriété aux albumines N

naturelles des miels, on neutralise avec une solution —

de soude en présence de phtaléine du phénol, une soluüon de miel à 10 p. 30 d'eau et on sature le mélange de sulfate de magnésie. Un louche, presque immédiat suivi après quelques heures d’un précipité floconneux, indique la présence de globuline.

Le liquide séparé de la globuline par filtration, acidulé par quelques gouttes d'acide acétique, est porté à l'ébullition. L'existence d'albumine est révélée par le précipité floconneux qui se fait de suite.

Si maintenant on sépare ce second précipité du liquide dans lequel il est contenu, et que l’on ajoute au liquide filtré une solution en excès de tannin, de réactif citro-picrique, de réactif de Tanret..., on conslate un trouble et après 24 heures un dépôt floconneux. Il est done permis de croire que l’on se trouve en présence de protéoses vraies ou de peptones ou des deux à la fois.

Recherches des protéoses vraies ou albumoses. — On reprend un nouvel échantillon de miel, on le met en solution, on filtre et on coagule les matières albuminoïdes naturelles par la chaleur après avoir acidulé et ajouté du chlorure de sodium. On filtre. Le liquide filtré est saturé de sulfate d'ammoniaque à chaud ; on abandonne au repos et après 24 heures, le précipité formé

MNT OR Fr

est recueilli sur un filtre. On le lave avec une solution saturée de sulfate d'ammoniaque et on le fait passer dans un tube à essai, à l’aide du jet d'eau chaude d’une pisselte, après avoir percé le filtre.

On pourra se convaincre de la présence des bn See en faisant la réaction du biuret ou en précipitant par le tannin acétique (après dilution), ou le réactif de Tanret ou le réactif d'Esbach.

Ces différents précipités sont solubles à chaud, alors que ceux dus aux albumines naturelles ne le sont pas.

Dans la solution saturée de sulfate d'ammoniaque et débarrassée du précipité d’albumoses, on pourra rechercher les peptones, s'il y en a, par la réaction du biuret.

B. — Essar QUANTITATIF. — DOosAGE DES MATIÈRES ALBUMINOIDES. — On dosera :

I° Les matières albuminoïdes coagulables par la chaleur.

II Les matières albuminoïdes de transformation.

IIIe Les matières albuminoïdes totales.

Les méthodes des « dépôls » (méthode d'Esbach, méthode de Lund), manquant de précision dans le cas d'analyses délicates, on devra recourir au procédé gravi-. métrique.

I° Dosage des albumines coagulables par la chaleur. — On dissout 10 gr. de miel dans 50 ce. d’eau distillée. Après filtration, on ajoute 6 gr. de chlorure de sodium ou de sulfate de magnésie et quelques gouttes d'acide azotique ou d'acide acétique. On porte à l'ébullition qu'on maintient une minute dans un vase à précipitation chaude, en agitant constamment. On laisse refroidir afin d’avoir un précipité bien rassemblé.

Pour le recueillir et le peser, on emploie la méthode des « filtres pesés » ou des « filtres tarés. »

- «) Filtres pesés. — On dessèche à l'avance un filtre à l’étuve de 100° et on l’introduit dans un flacon à tare bouchant à l’émeri. Après une demi-heure environ, on retire de l’étuve et on ferme le flacon. Après refroidis-

sement on pèse. On remet à l’étuve en laissant entr’ouvert la fiole ; on fait une seconde pesée après quelque temps, et lorsque le résultat reste constant, le filtre est prêt à servir.

8) Filtres tarés. — Deux filtres égaux sont faits avec le même papier. On enlève de petites portions à l'un d'eux, jusqu’à ce qu'ils se fassent exactement équilibre sur le plateau de la balance. On fait la filtration dans les deux filtres emboîtés l’un dans l’autre, en perçant au besoin le filtre extérieur pour ne pas retarder la filtration.

Le ou les filtres ainsi prêts, on verse le précipité dessus el on le lave à l’eau chaude, jusqu’à ce que l’eau de lavage ne précipite plus par l’azotate d'argent ou par le chlorure baryum (selon que le sel ajouté est NaCI ou SO: Mg). On rince à l'alcool et finalement à l’éther. On desséche à l’étuve à 100°, une heure et on pèse.

Remarques.— 1) Il est nécessaire d'ajouter du chlorure de sodium ou du sulfate de magnésie si l’on veut avoir une précipitation complète, le miel étant pauvre en sels minéraux (Voir analyses, p. 40 et #1).

2) La réaction doit être faiblement acide. Un trop grand excès d'acide acétique par exemple, transformerait à l’'ébullition les matières albuminoïdes naturelles en acidalbumines solubles ; par contre, en liqueur alcaline ou neutre, on n'aurait pas non plus une précipitation parfaite.

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3) Enfin, une correction nécessitée par la présence des sels est nécessaire. En effet, les matières minérales des miels et les sels ajoutés pour favoriser la précipitation peuvent être englobés dans le coagulum. On incinérera donc le filtre chargé d’albumine et on déduira le poids des cendres de la quantité d’albumine brute primitivement obtenue.

Dosage de la globuline et de l’albumine. — 100 gr. de miel sont mis en solution dans 50 cc. d’eau. On neutralise en présence de phlaléine de phénol à l’aide N Gi

de sulfate de magnésie. On abandonne 24 heures au repos et on jette sur un filtre taré. On lave ce précipité avec une solution saturée de SO* Mg. Le filtre et le précipité sont portés à l’étuve à 100°; les globulines sont ainsi coagulées. On lave ensuite à l’eau disüllée pour

de NaOH ; on sature à froid le liquide

d'une solution

enlever le sulfate de magnésie imprégnant le filtre et le précipité. On reporte le tout à l'étuve à 100° pour dessécher et on pèse. La liqueur saturée de sulfate de magnésie et les eaux de lavage sont réunies. On acidule par l’acide azotique ou l'acide acélique et on porte à l’ébullition ; la sérine est ainsi précipitée. On la jette sur un filtre taré, on lave à l’eau distullée chaude, à l'alcool et.à l'éther et on pèse. Mais connaissant le poids total de l'albumine (albumine et globuline), on peut se contenter de peser la sérine et de déduire la globuline.

Il° Dosage des matières albuminoïides de transformalion. — Le dosage de ces éléments pourra se déduire facilement : par différence, puisque l’on connaît le poids d'albumine coagulable par la chaleur d’une part, et la

quantité d'azote totale calculée en matières albuminoïdes d’autre part.

IT Dosage de l'azote total. — Nous nous sommes servis de la méthode Kjeldhal : 5 gr. de miel sont dissous dans une certaine quantité d’eau ; on jette sur un filtre pour retenir le pollen (1) et les débris divers. On lave convenablement le filtre à l’eau distillée et on évapore à feu doux ou BM, jusqu'à consistance sirupeuse, dans le ballon même où se fera l'attaque. On opère avec 50 cc. d'acide sulfurique et 1 gr. de mercure. Lorsque la hqueur est incolore ou tout au moins limpide, on continue l'opération selon la méthode habituelle en saturant par de la soude décarbonatée. On précipite ensuite le mercure, soit avec quelques centimètres cubes de solution concentrée de sulfure de sodium ou avec 1 gr. environ d’hypophosphite de soude, préalablement dissous dans un peu d'eau (Maquenne et Roux).

On recueillera l’ammoniaque dans 20 cc. d’une solution d’acide sulfurique déci-normale ; on titrera ensuite

ar

l'acide non combiné avec une solution — de soude.

Le poids d’azote se calculera en multipliant le nombre de centimètres cubes d’acide sulfurique saturés par l’'ammoniaque, par le coefficient, 0,0014.

Mais comme on se trouve en présence de petites quantités de matières azotées, si l'on veut avoir un dosage très exact, on aura avantage à recourir au procédé de M. A. Villiers :

On recueille l’'ammoniaque dans de l’acide chlorhy-"

Voir azote total de certains pollens, p. 43,