NN
cc NaOH N/10
Levures non traitées
Levures épuisées par Acétone-Ether
Essai | Témoin | Différ.
Essai |Témoin| Différ.
Dosage des Lipases à partir de 1 g de mycélium desséché de Candida lipolytica en présence d’Huile d’Olive
Age des cultures
semaines semaines semianes semaines
cc NaOH N/10
Levures non traitées
Levures traitées
par NaOH N
Difrér.
Témoin
Essai | Témoin | Différ.
Dosage des Lipases à partir de 1 g de mycélium desséché de Trichosporon pullulans en présence d’Huile d’Olive.
Age des cultures
SéMALLES ee SEMAINES Er semaines ........., SEMAINES MN TER
cc NaOH N/10
Levures non traitées
Levures traitées
L Ë par NaOH N
Essai | Témoin | Différ. Essai Témoin | Différ. |
Interprétation:
Comme il ressort de nos expériences, l'épuisement du mycélium au moyen du solvant organique est insuffisant pour extraire les substances grasses des cellules levuriennes. En plus, le traitement au moyen d’Acétone et d’Ether semble conditionner une certaine inactivation des Lipases ; ce fait peut s'expliquer par la dénaturalisation des substances protéiques, faisant partie intégrale des enzymes lipasiques.
Le traitement des cellules levuriennes au moyen de Lessive de soude réalisé avant la mise en marche des techniques de dosage, amène une stabilisation de la concentration ionique de la suspension enzymatique en expérience. Mais les Lipases semblent fortement affaiblies à la suite de ce traitement de 2 jours et de l’hydrolyse consécutive, ce qui peut être dû à une destruction partielle, soit à l’apparition de produits de dégradation inhibant leur action.
Les méthodes que nous avons ainsi mises en œuvre ne nous ont pas donné les résultats favorables pour résoudre le problème envisagé, c'est-à-dire d'éliminer l'action des Lipases levuriennes sur les Lipides propres à ces Levures. On pourrait donc se contenter du dosage sommaire de l’action lipasique de ces résidus cellulaires levuriens non traités préalablement, en tenant compte que les valeurs expérimentales établies par l'hydrolyse de l'Huile d'olive sont déficientes par rapport au pouvoir lipasique réel, qui s'exerce en même temps et spécifiquement sur les lipides idiogènes apportés par le substrat levurien lipasique même.
Nouvel essai de purification des Lipases levuriennes :
Après les recherches antérieures effectuées pour obtenir les Lipases levuriennes à un état de pureté plus poussée, nous avons repris une dernière série d'expériences. Nous avons antérieurement constaté que la purification au moyen d’une solution hypertonique de Chlorure de sodium était probablement nuisible aux Lipases. En nous basant sur les expériences de MARTI, nous avons repris ces études, en modifiant les techniques de la façon suivante:
Des cultures ont été effectuées sur jus de pomme de terre glycériné à 3 % et employées à l’âge de 2 semaines, optimum de temps d’après nos constatations antérieures. Ces cultures ont été centrifugées et le liquide nutritif soigneusement décanté. Le résidu cellulaire d’un grand nombre de boîtes de Roux a été réuni : nous en avons prélevé pour l’expérience proprement dite 100 g pour chaque Champignon, qui ont été triturés au moyens de 10 ec d’Acide sulfurique normal. La macération est introduite dans un flacon à deux tubulures et additionnée de 500 ce de Xylol. Le tout est agité en faisant passer en même temps un courant de gaz carbonique. L’agitation a duré 30 minutes. On laisse reposer ensuite en atmosphère d’Anhydride carbonique pendant 2 heures, puis on centrifuge dans un grand centrifugeur pour décanter finalement lextrait toluénique ; celui-ci est mélangé au même volume d’Ether de pétrole et après agitation déposé pendant la nuit en flacon soigneusement bou-
AT
ché dans la glacière. On décante par soutirage les solvants surnageant ; on ajoute encore sur le résidu 700 ce de Xylol, on agite et on laisse reposer pendant la nuit à la température ordinaire. La phase limpide liquide surnageante est décantée par siphonage et. on continue la purification une troisième fois au moyen d’Ether de pétrole. La suspension résiduelle est centrifugée, le précipité ainsi obtenu est encore lavé deux fois au moyen d’Ether de pétrole et celui-ci décanté par centrifugation. La phase solide qui s’est déposée est partagée en deux fractions, l’une pour l’examen direct du pouvoir lipasique, l’autre a été reprise dans du Sirop simple pour le contrôle de la conservation dans ce solvant, en rapport avec les travaux de Marri. Nous exprimons dans les tableaux suivants les résultats ainsi obtenus.
- Dosage des Lipases purifiées à partir de 1 g de Mycélium humide de Candida lipolytica.
cc NaOH N/10
Suspension levurienne Extrait éthéro-toluénique frais dans le Sirop simple, âgée de 4 semaines
Essai | Témoin | Différence Essai | Témoin | Différence
TABLEAU N° 18 Dosage des Lipases purifiées à partir de 1 g de Mycélium humide de
Trichosporon pullulans
ce NaOH N/10
Suspension levurienne dans le Sirop
Extrait éthéro-toluénique frais - Sr :
simple, âgée de 4 semaines
Témoin | Différence Essai Témoin | Différence
Interprétation :
Nous avons effectué ces expériences sur chaque fois 4 séries de résidus levuriens, et nous avons exprimé la moyenne de 2 expériences chaque fois dans les tableaux ci-dessus. Il est bien entendu que tous ces essais ont été effectué en sauvegardant les manipulations et la marche des analyses indiquées antérieurement. On peut ainsi se rendre compte que la purification des Lipases levuriennes peut être obtenue par épuisement alternatif au moyen de Xylol et d’Ether de pétrole dans une atmosphère
dépourvue d'oxygène. Le résidu mycélien ainsi obtenu a un pouvoir lipasique fortement accru, se chiffrant proportionnellement à environ 200 % de celui dû au résidu non purifié.
On constate d'autre part que l’activité de ces Lipases peut être maintenue en suspension de sirop simple et qu’une grande partie des Lipases entre en solution glucosée ou saccharosée après purification. Pour terminer, nous insistons sur l'influence nuisible de l'air, de l’eau pure et de la chaleur, comme il ressort de ces expériences en comparaison avec celles effectuées antérieurement où nous sommes parti de mycélium levurien préalablement déshydraté et desséché à l’air et à la chaleur.
Nous eroyons ainsi avoir pu apporter une contribution utile à l’étude et à l'isolement des Lipases levuriennes., qui. comme celles des Bactéries acido-alcoolo-résistantes. se rapprochent par leurs propriétés singulièrement des Lipases isolées de plantes supérieures.
