CHAPITRE IV

ÉTUDE DE LA SÉORÉTION BOJANIENNE DE LA MOULE COMMUNE (Suite).

L'EXTRAIT ÉTHÉRÉ DE L'ORGANE DE BOJANUS DE LA MOULE REN- FERME DE LA STÉARINE, DE LA MARGARINE, DE L'OLÉINE, DE LA LÉCITHINE, DE L'ACIDE VALÉRIANIQUE ET DE L'ACIDE BUTYRIQUE.

Les graisses sout en général si solubles dans l’éther qu’en prenant quelques précautions bien simples, il est facile de les isoler des tissus qui les renferment ; l'opération n’est pas plus compliquée quand elles flottent dans les humeurs sous la forme

- de globules jaunes et transparents doués de la propriété de réfracter fortement la lumière. Grâce à leurs caractères physiques qui sont nettement tranchés, eten s’aidant de quelques réactions rapidement exécutées, l'observateur peut reconnaître d’une façon générale la nature du résidu que l’éther lui abandonne en s’évaporant. Toute autre est la difficulté qu’il éprouve quand il teute de séparer les divers glycérides et les acides libres qui forment la substance grasse. Fil ne dispose de plusieurs kilogrammes de matière, il est exposé à laisser passer sans les apercevoir divers acides volatils qui disparaissent pendant la série de ses opérations ; et ceux-là même que leur fixité garantit contre une semblable disparition lui réservent, par la similitude de leurs formes cristallines, bien des recherches infructueuses, bien des comparaisons délicates avant que la certitude se forme dans son esprit.

La première chose à faire est donc de se procurer la plus grande quantité possible de matière grasse. Aussi, pour mes premières

ARCH, DE ZOOL. EXP. E1 GÉN, — 2€ SÉRIE, — T, V bis, suppz, 1887, — Act Mém. 3

recherches j’ai cru devoir employer cinquante litres de grosses Moules d’Isigny, et dans la seconde, qui avait pour but de vérifier les résultats de la première, j'ai disséqué et traité par l’éther les Organes de Bojanus de vingt-cinq litres du même animal. J'ai néanmoins toujours été loin d’avoir les kilogrammes de matière que j'aurais désiré manipuler, et cependant pour ma première analyse j’ai ouvert plus de trois mille Moules, plus de quinze cents pour la seconde. Dans ces deux expériences, je n’ai pas procédé d'une façon identique à la séparation des corps solubles dans l’éther : les résultats n’en ont pas moins été les mêmes, d’où il suit qu’on peut employer indistinctement l’une et l’autre méthode.

Quand j’ai fait mes premières recherches, j'ai laissé pendant huit jours les organes dissociés dans l’alcool à 90°, puis l’ayant décanté, je l'ai remplacé par une nouvelle quantité du même liquide, et j’ai attendu deux jours encore. Au bout de ce temps j'ai filtré et j'ai traité les glandes par l'alcool à 100° et bouillant. Après vingt minutes d’ébullition, j'ai filtré et jai joint le liquide aux extraits déjà obtenus. Les Sacs de Bojanus avaient à ce moment presque entièrement perdu leur couleur brune et étaient devenus presque blancs. Je les ai alors mis en présence de l’éther anhydre à 35° 5, et ayant prolongé l’ébullition pendant un quart d’heure environ, j'ai filtré et j'ai joint l'extrait éthéré aux divers liquides alcooliques. Le mélange ainsi formé renfermait donc les corps solubles dans l'alcool, dans l’éther et dans l’eau. Afin d'isoler celles de ces substances que l’éther peut dissoudre, j'ai évaporé au bain-marie jusqu’à siccité, etjaienfin repris le résidu par l’éther exempt d’eau et bouillant.

Pour la seconde expérience j’ai mis d’abord dans l'alcool à 90° les Sacs de Bojanus au fur et à mesure que je les dissociais, ce qui les préservait de toute altération ; mais la dissection une fois terminée, J'ai versé le tout dans une vaste capsule et évaporé l’alcool et l’eau ; puis j'ai achevé la dessiccation sur l’acide sulfurique. Quinze iours plus tard , j’ai mis les Organes bien secs en présence de l’éther bouillant et j’ai filtré.

Le traitement par l’éther estune opération délicate qui demande quelques précautions, à cause de l’inflammabilité de ce dissolvant. Je me suis toujours servi d’une vaste capsule chauffée au bain-marie ; mais il vaudrait mieux employer un appareil à déplacement : on n'aurait plus à craindre de voir l’éther prendre feu, et le lavage serait bien plus méthodique et bien plus complet. En rinçant ensuite soigneusement tubes et ballons, on ne perdrait aucune trace des corps gras que renferment les tissus et la sécrétion concrétée de la glande. Je reconnais donc que ma méthode était aussi défectueuse qu’elle était dangereuse ; mais les inconvénients qu'elle présente ont été pour moi sans conséquences, puisque les corps que l'éther n'avait point dissous se sont retrouvés dans l'alcool, quand j'ai fait l’étude de l'extrait que ce dernier liquide

avait fourni.

Quelle que soit la méthode suivie pour sa préparation, le liquide éthéré est jaune, et sa couleur se fonce à mesure que l’éther s’évapore ; elle devient roussâtre à la longue et finit par prendre la teinte acajeu. C’est là également la couleur du résidu que le dissolvant abandonne, en s’évaporant spontanément. L’aspect de ce résidu est celui d’un corps gras, et les taches qu’il fait sur le papier ne disparaissent pas avec le temps. Il est imparfaitement soluble dans l’eau, et la densité de la partie non dissoute est égale à celle de ce liquide ou lui est un peu supérieure. Son odeur est celle de la Moule, mais elle est plus forte et plus pénétrante. On ne voit point de cristaux dans le résidu éthéré, et quand on le met sur une lame porte-objets, il est par transparence d’un beau jaune brillant. Il réfracte donc fortement la lumière,mais, comme toutes les graisses, il est sans action sur la lumière polarisée dans laquelle les bords seuls de la préparation sont fortement illuminés. Les matières colorantes ne changent pas de couleur quand on les met en sa pré-

sence. Enfin la chaleur le fond, puis le décompose en le boursou-

flant ; il brûle alors avec une flamme très éclairante et Jaisse pour résidu un charbon noir et brillant.

À ces caractères on reconnaît un corps gras. Je n’ai plus qu'à ajouter que le résidu était peu abondant,malgré le nombre des Houles sacrifées, etqu’il recouvrait, comme un vernis, les parois du vase

qui avait contenu l’éther.

L’étude physique de l'extrait éthéré étant terminée, il me reste à parler des corps gras qui le constituent. Ilen renferme plusieurs, ce qui n’est pas surprenant, les graisses ayant en général une composition complexe ; voici du reste comment on s’en assure

Où traite à chaud la graisse par une solution alcoolique de potasse; dans ces conditions, la saponification est presque instantanée. Des grumeaux roussâtres et visqueux, les uns flottants sur le liquide ctles autres collés au fond de la capsule, se forment rapidement. Pour compléter la saponification , on ajoute à différentes reprises et par petites portions de la potasse en dissolution dans l’alcool. Une fois le savon formé ,.on chasse l'alcool en faisant bouillir le liquide, et l’on ajoute de l’eau pour dissoudre le savon et la glycérine. On attend ensuite que la masse se soit refroïdie, et, l'ayant introduite avec de l'éther dans un flacon bouché à l’émeri, on agite fortement et à plusieurs reprises. Après deux jours de repos, on voit deux couches superposées, l’une, la supérieure, jaune et constituée par l'éther qui a dissous les corps gras non saponifiés, l’autre, inférieure, aqueuse et transparente, renfermant la potasse en excès, le savon et la glycérine.

fa couche éthérée décantée avec soin est abandonnée à l’évaporation spontanée ; mais en ralentissant sa disparition, on n'obtient pas encore de cristaux et le résida amorphe et jaune forme seulement un enduit mamelonné sur les parois da vase.

Quant à la couche aqueuse, après l’avoir débarrassée de l’éther,

on lévapore à siccité, puis on reprend le résidu par l'alcool à

90°, et on verse, dans la solution alcoolique de savon, de l’acide sulfurique goutte à goutte, afin de séparer les acides gras. Il se forme un abondant précipité de sulfate de potasse, et les acides gras que lalcool dissout facilement surtout à chaud restent dans le liquide avec là glycérine et l’excès d’acide. En filtrant, on les sépare des cristaux de sulfate de potasse. Mais avant d'indiquer les manipulations auxquelles i! faudra soumettre encore la solution alcoolique des aciles gras afin de les isoler, je dois signaler deux particularités importantes que l’on observe toujours quand on verse l'acide sulfurique dans la dissolution des savons. Chaque goutte d'acide qui tombe y produit une belle couleur rose que je ne puis mieux caractériser qu'en la disant identique à celle que fournit l’acide azotique, ou un azotate quand on le met en présence du réactif ferroso-ferrique, c’est-à-dire d’un mélange de sulfate de protoxyde eë de sesquioxyde de fer pulvérisé et en suspension dans l’acide sulfurique. Par une nouvelle addition d’acide la couleur se fonce et vire enfin an rouge brun ; mais au bout de vingt-quatre heures de repos, toute coloration disparaît. Si l’on chauffe le sulfate de potasse en présence de l’acide sulfurique pour voir s’il n'aurait point entraîné des traces d'acides gras volatils, on voit les cristaux encore adhérents au dôme de la cornue prendre une conleur violette magnifique. Cette suite de couleurs, rose, rougeet violet, rappelle immédiatement à l'esprit la série des colorations que fournissent les acides biliaires quand on les traite par la méthode de Bogomoloff. Il ne faudrait pas cependant croire à l’existence de produits biliaires dans la sécrétion bojanienne de la Moule qui, nous le verrons, n'en renferme point de traces. Au contact de l'alcool et de l'acide sulfurique, et même de ce dernier tout seul, les graisses donnent souvent des colorations trompeuses qui sont si semblables à celles que fournissent les acides biliaires qu’on peut facilement se méprendre sur la cause qui les a produites.

On peut cependant reconnaître leur origine véritable, en élimi-

nant en même temps que les corps gras et l’albumine, l’alcool; les réactions de Pettenkofer et de Gmelin sont alors muettes et nulle couleurn’apparaît. Dans le cas présent, on peut, je pense, attribuer les diverses colorations observées à l’oléine de l’extrait éthéré. L'huile d’olive pure prend en effet les mêmes couleurs quand on la traite par l'alcool et l'acide sulfurique, mais les teintes ne sont point tout à fait identiques, le violet étant plutôt lie de vin avec l’huile que violet pur. Enfin il n’est point inutile de remarquer qu’une série de couleurs, en tous points semblable à celle qui se produit avec la graisse de la Moule, apparaît toutes les fois que l’on traite de l’huile animale de Baleine où de Morue par le procédé de Heydenreich, c’est-à-dire par l’acide sulfurique à 66°. Ces huiles sont ailleurs fortement colorées, comme la graisse de la Moule, et il est, dans l’état de nos connaissances, difficile de dire si les colorations observées tiennent à la matière grasse proprement dite ou à la substance colorante qu’elle renferme et qu'on n’a pu encore isoler jusqu’à ce jour.

La deuxième observation importante à faire est la suivante : en même temps que la liqueur alcoolique se colore en rose, elle s’échauffe fortement à cause de l’hydratation de l'acide sulfurique et de la combinaison de la potasse avec l’acide, et on sentune insupportable odeur de valériane. Nousallons voir plusloin qu’en effet l’acide valérianique accompagne l’acide butyrique à l’état probable de glycéride dans la sécrétion bojanienne de la Moule, car nous aurons l’occasion de l’observer sous la forme de cristaux rectangulaires de valérianate de baryte disséminés au milieu de nombreux losanges de butyrate de la même base.

Cette digression, un peu longue, était nécessaire si l’on tient à être au courant de tous les phénomènes qui se produisent au cours de l’analyse ; du reste, je vais maintenant la reprendre pour ne plus la quitter.

On avu qu'après la formation du sulfate de potasse, on filtre.

Le liquide qui passe renferme les acides gras, la glycérine et l’acide

sulfurique en excès. On l’additionne de cinq ou six fois son volume d’eau, puis on y verse une dissolution d’hydrate de baryte qui précipite immédiatement l’acide sulfurique à l’état de sulfate de baryte et donne en même temps naissance à divers savons barytiques insolubles. Comme il est impossible de verser exactement la quantité d’hydrate de baryte strictement nécessaire, on se débarrasse de l’excès de base par un courant d’acide carbonique passant à refus. On chauffe ensuite, ce qui chasse l'acide carbonique et l’alcool, on filtre, et, mettant le précipité en suspension dans l’eau, par une dernière addition d'acide sulfurique, on met les acides gras fixes en liberté.

Les acides ne sont pas solubles dans l’eau ; on pourrait espérer les obtenir sous leurs formes cristallines caractéristiques ; mais il n'en est rien ; on a des gouttelettes huileuses et pas de cristaux. J'ai essayé d'en préparer avec l’éther et avec le sulfure de carbone, que je laissais s’évaporer lentement , etje n'ai obtenu que des taches graisseuses. Uue seule fois, ayant décomposé le savon barytique par l'acide chlorhydrique, j'ai obtenu quelques cristaux réunis en éventail, très nets et semblables à ceux que Robin et Verdeil ont figuré PI. XXXIX, f. 2 j, lesquels sont des cristaux d'acide stéarique.

J’ai recommencé plus tard la même recherche par la même méthode ; mais, soitqu’elle ait été défectueuse, soit plutôt que l’extrait éthéré ait été mal préparé, je n’ai point obtenu de cristaux d’acide stéarique ; je n'en conclus pas moins que l'extrait éthéré renferme des traces de stéarine. Cette manière de voir s’est du reste trouvée ultérieurement justifiée par des observations microscopiques, qui m'ont permis de constater l'existence de cristaux de stéarine mêlés à des cristaux de margarine dans un extrait éthéré préparé plus soigneusement.

Quant aux gouttelettes huileuses que l'acide sulfurique met en liberté, il estassez facile d'en déterminer la nature. Leur aspect

est semblable à celui de l'acide oléique ; J'ai en conséquence cher-

ché si l’emplâtre qu’elles forment est partiellement soluble dans l'éther. J’ai fait bouillir en présence du massicot et de l’eau une partie de l'extrait éthéré, et, par une agitation continue, j'ai obtenu ua précipité que j'ai séparé par filtration après refroidissement. J'ai desséché cet emplâtre avec soin, puis je l’ai mis en présence de l’éther bouillant qui æ& dissous seulement l’oléate de plomb, et j'ai filtré. J’ai alors versé goutte à goutte de l’acide chlorhydrique dans la liqueur ; un léger précipité de chlorure de plomb s’est formé; une petite quantité d’oléate s'était donc dissoute. J’ai laissé reposer pendant vingt-quatre heures, puis j'ai décanté et j'ai chassé au bain-marie l’éther et l’excès d’acide chlorhydrique. Le liquide, après toutes ces manipulations, renfermait de fins globules incolores qui réfractaient fortement la* lumière : j étais évidemment en présence de l’acide oléique. Pour en être plus certain, j'aurais voulu essayer la réaction que produit l’acide azotique nitreux, mais la quantité de matière grasse dont je disposais était insuffisante, et je n’ai obtenu rien de bien net. Néanmoins, la formation d’un emplâtre partiellement soluble dans l'éther, l'aspect des gouttelettes sont autant de raisons qui permettent d'affirmer avec une certitude suffisante qu'il existe de

l’oléine dans l'extrait éthéré de Organe de Bojanus de la Moule.

On a vu (page 36) que l'extrait éthéré traité par une solution alcoolique de potasse bouillante donne naissance à des grumeaux relativement volumineux , bruns, visqueux, aussi denses, sinon plus denses que la solution potassique, au sein de laquelle ils se sont formés, gluants et s'agglutinant facilement entre eux. Or ces grumeaux ne sont pas formés par des savons; la quantité de ceux que forme la potasse est très petite, el nous savons que ce sont presque uniquement de l'oléate de potasse. L’éther ne dissout point les savons et dans tous les cas ne peut les enlever à l’eau : les gru-

meaux brunâtres, fournis par l'extrait éthéré, sont cependant très

solubles dans l’éther ; ce ne sont pas des savons ; que sont-ils alors? c’est ce que je vais examiner.

Quand on introduit quelques-uns de ces grumeaux dans une solution azotique de molybdate d’ammoniaque, on obtient après ébullition un liquide d'un beau jaune qui donne, quand la quantité de matière est suffisante, un précipité également jaune. On en doit conclure que ces grumeaux renferment du phosphore, car on ne peut attribuer la coloration et le précipité à une matière albuminoïde, que l’acide azotique aurait ainsi colorée. Il serait surprenant que l’éther eût dissous un corps albuminoïde ; d’ailleurs les mêmes grumeaux introduits dans l’acide azotique seul ne donnent pas lieu à la coloration jaune observée. Ainsi ces grumeaux renferment du phosphore : sont-ils complexes? c’est possible ; mais dans tous les cas la liste des corps phosphorés étant assez courte, on peut espérer en trouver la composition.

Si l’on remarque en effet les propriétés physiques des grumeaux, leur aspect, leur consistance cireuse, leur gonflement dans la lessive de potasse, leur insolubilité dans l’eau, leur excessive solubilité dans l’éther, enfin leur facile fusibilité, on a presque tous les caractères de la lécithine. Si à une solution alcoolique des grumeaux, on ajoute une solution également alcoolique de chlorure de platine et une goutte d'acide chlorhydrique, on a un précipité plus ou moins floconnenx jaunâtre qu’on peut prendre pour du chlorure double de platine et de lécithine. Ce précipité est excessivement soluble dans l’éther, mais ilne m'a pas paru se dissoudre en entier dans le chloroforme et dans la benzine, ce qui fait que j'hésite un peu à le regarder comme renfermant de la lécithine, quoique la chose soit excessivement probable. Valenciennes et Fremy ont du reste montré que l’acide oléophosphorique combiné à la soude se montre dans presque toutes les parties de l'organisme, et notamment à l'état de traces dans les muscles des Mollusques : or cet acide dérive de la lécithine. Il en est de même de l'acide phosphogly-

cérique que l’on sait exister dans beaucoup de tissus, le cerveau,

la substance médullaire des nerfs, le jaune de l'œuf et la bile. Il est donc possible que des recherches qui porteraient sur une plus grande quantité de matière, permettraient de reconnaître ces deux acides phosphorés, et ilestencore plus vraisemblable qu’elles permettraient d'isoler la lécithine, ce que j'ai regretté de ne pouvoir

faire.

Il me reste maintenant à parler des acides gras volatils qui donnent à l’extrait éthéré son odeur spéciale.

Déjà, en décrivant la préparation des acides gras fixes, j'ai fait observer qu’une forte odeur de valériane s’exhale du liquide alcoolique renfermant les savons, la glycérine et l’excès de potasse, quand on le traite par l’acide sulfurique. Afin de voir si des traces d'acide valérianique n’auraient point été entraînées parles cristaux de sulfate de potasse, j’ai distillé en présence de l’acide sulfurique le précipité que j'avais recueilli sur le filtre. J’ai obtenu ainsi une petite quantité d’un liquide ayant, mais faiblement, l’odeur de la valériane légèrement masquée par celle de l'acide sulfureux ; le dernier acide provenait de lambeaux de filtre introduits dans la cornue avec le sulfate et qui, carbonisés par l'acide sulfurique, avaient réduit ensuite cet acide lui-même pour fournir de l'acide carbonique et de l'acide sulfureux. Mais plus tard, après avoir, dans une seconde série de recherches, essayé de préparer de nouveau les acides gras fixes au moyen du précipité barytique resté sur le filtre, j'ai pu extraire les acides valérianique et butyrique du liquide limpide qui avait passé et qui renfermait les composés barytiques des acides gras volatils. Pour cela j'ai additionné la liqueur avec de l'acide phosphorique, et j'ai distillé. J’ai employé l’acide phosphorique, parce qu'il est fixe et parce que, ainsi, j'évitais toute trace d'acide sulfureux. J’ai donc obtenu par ce procédé un liquide dont l'odeur était celle des

Li 2 4 + D. = 4 2 AU . .

deux acides valérianique et butyrique mélangés. Je l'ai mis en

présence d’une solution d’hydrate de baryte, et j'ai abandonné le mélange à l’évaporation spontanée sur l’acide sulfurique. Au bout de quelque temps-toute trace de liquide ayant disparu, il est resté sur le fond du vase denombreux cristaux, parmi lesquels plusieurs, qui étaient rectangulaires et plus ou moins semblables à la cholestérine, étaient vraisemblablementdescristaux de valérianate debaryte. A côté d’eux se trouvaient d’autres cristaux en forme de losange formés de butyrate de baryte. On trouvera, PI. I, fig. 1 et 2, des

dessins des cristaux barytiques de ces deux acides.

L'étude de l'extrait éthéré des Corps de Bojanus de la Moule montre qu’il contient :

1° De la stéarine (traces...

2° De la margarine (id.).

3° De l’oléine.

4° De la lécithine (?).

5° De l'acide valérianique (traces).

6° De l'acide butyrique (traces).