T°} SEPARATION DE LA’ TOTALITE DES STRUCTURES
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Le foie est plon:é pendant quelques secondes dns de l'eau glacée afin d'élininer la majeure partie du sang, soigneusement essoré sur papier filtre et pesé. IL est couné ‘’inement puis broyé dans un mortier pendant 5 min, Le broyit est introduit quantitativement “dans un homogénéiseur à l'aide d'une solution de saccharose à 30 p. 100 (0,88 M) à raison de 2 cm par g. de foie mis en oeuvre, On homogénéise pendant 3 min à 1200 t/m. On ue
alors une nouvelle quantité de saccharose à 30 p, 100 (8 cm? par g. de foie) et on poursuit l'homogénéisation pendant l1 min, À ce stade on vérifie au microscope à ‘contraste de phase qu'il n'y a plus de cellules intactes.
Cet homogénéisat est centrifugé 2 heures à 150.000 gravités. On prélève lors la pellicule de sraisse, on décante le surnageant S, (phase cytoplasmique homogène), le culot D+ représente, la totalité des structures sédimentées,
2°) OBTENTION Di LA FRACTION "NOYAUX"
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Le dépôt global des structures Dt est remis en suspension dans le saccharose à 30 p, 100 (10 ae pare, desfôotels l'homogénéisat est centrifugé 30 m. sous une accélération de 600 gravités, On. obtient. un: culot Dy contenant les noyauxisouillés
de nombreux débris de tissu conjonctif et de mitochondries et un liquide Surnageant $] contenint les mitochondries et les microsomes que l'on réserve pour les séparations ultérieures,
Le culot D, est homozénéisé dans du saccharose à 30 p. 100 (2 cm? par g. de foie) et céntrifugé 30 min à 600 gravités, Le liquide surnareant S) “ui contient des mitochondries et des microsomes partiellement Sédimentés üvec D] est joint au liquide 951. Le nouveau culot D, est remis en suspension dins du saccharose
fu
à 30 p. 100 (10 cm? par x. de foie) additionné d'acide citrique OH ep N1000) "La ntsusrension est alors filtrée successivement
sur trois tamis n° 30/20, 40/24 et 120/L2 et se trouve débarrissée JOSÉ r ESA SSU COMIONcLLM A ONnNTL Centrifusée âlors 20 min à
600 B. ; le culot D; est constitué p:r des noy.ux pratiquement purs. Le liquide surnigeañt 53 est conservé pour l'analyse,
JACOB TENTTON AO LA FRACTION ":ITOCHONDRIES"
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Les liquides S, et S, réunis sont centrifugés pencant 20 min à 24.000 gravités, Le liquide surnageant 5, est conservé et le culot D, remis en suspension dans le saccharose à 30 p. 100 (5ucm” pare, de foie) On centrifuge à nouveuu 20 min à 24,000 gravités. Le liquide surnageënt $5 est joint à Sy Le dépôt est cons titué par les itochondries,
