DAY LE

par simple lecture, en grammes d’albumine par litre le chiffre de l'échelle (1). » ?

La température n’exerce aucune influence sur l'indice rétractométrique du sérum comme l'ont constaté Vernes et Marchadier (160) en le portant à la glacière où en le chauffant à 55° pendant 20 minutes.

Comme pour la viscosimétrie on s’est demandé si l'indice de réfraction dépendait uniquement de la teneur du sérum en colloïdes, c’est -àdire des seules albumines. A part Chiray et Demanche (43) qui trouvent des erreurs considérables pouvant varier de 1 à 17 p. 100 par rapport à la méthode très précise des pesées, à part Vernes et Marchadier qui trouvent que la réfractométrie est très variable, les différents auteurs admettent des chiffres concordant avec ceux des pesées. Telles sont les conclusions de Grober, Strübell, Reiss, Strauss, Chajes, Zanda, Engel, Achard, Vaucher.

Cependant on doit admettre avec Vaucher et Rührer que la présence en excès de certains corps fait varier l'indice réfractométrique : tel est le cas de l’urée, du sucre, de la graisse (sérum lactescent), des pigment biliaires, de l'acétone, de l’acide boxybuthyrique. Certaines corrections seront donc nécessaires (grands diabétiques, grands azotémiques). L'erreur n’est d'ailleurs jamais bien considérable. Ainsi il faut que le taux d’urée sanguine soit voisin de 2 gr. °/.. pour qu’elle soit équivalente à un gramme d’albumine par litre (?).

En conclusion la réfractométrie semble donner des chiffres exacts d'albumine. C'est une méthode particulièrement pratique, facile et rapide.

(1) L'appareil de Pulfrich-Reiss donne en moyenne des chiffres de 58 à 59 correspond à une quantité d’albumine de 78 à 80 gr. p. 1000 de sérum.

(?) L’addition de 19 p. 400 d’urée à une solution albumineuse fait augmenter l'indice réfractométrique de celle-ci de 0,010 à 0,0017. Au dessus de 2 gr. d’urée par litre on peut avoir une erreur dépassant À gr. d’albumine par litre. Dans le cas de sérums des azotémiques les chiffres d’albumine trouvés à la lecture du réfractométre devront être corrigés de la façon suivante :

Si le sérum contient À gr. d’urée onretranche 0 gr., 60 d’albumine

— 2 — 4 gr., 20 — > 3 —— 1 gr., 80 — = mn — 2 gr., 50 — — 6] 8 gr., 20 ns 6 — 4 gr., » —

L’addition de 4 p. 100 de sucre à un liquide alhumineux fait augmenter de 0.0009 à 0,0045 l'indice réfractométrique de celui-ci.

ste are

Il. Dosage séparé de la sérine et de la globuline

1. Procédés chimiques. — Il y a plusieurs méthodes pour séparer la sérine de la globuline :

a) « On utilise en général le procédé suivant : la sérumglobuline ‘est précicipitée par le sulfate de magnésie à saturation, alors que la sérumalbumine n’est pas touchée. Voici comment on peut procéder en pratique. On opère sur 30 ou 40 cc. de sérum, porté à 30°, le liquide est additionné de sulfate de magnésie pur, ajouté par petites portions, jusqu’à ce qu'il reste dans le fond du vase quelques cristaux de sel non dissous, malgré une digestion prolongée. Il faut, pour cela, environ 30 gr. de sulfate de magnésie. La globuline forme dans le liquide un précipité floconneux. Après quelques heures de repos (12 à 14 h.), on le recueille sur un filtre et on lave avec une solution saturée de sulfate de magnésie jusqu'à ce que le filtrat, chauffé avec de l'acide acétique, ne montre plus trace d'albumine. Ce résultat obtenu, on peut terminer de diverses manières. Ou bien le filtre égoutté et convenablement plié est introduit dans une fiole de Kjeldhal, et on fait un dosage d'azote. Ou bien on dissout la globuline sur le filtre dans 10 cc. d'eau salée à 10 p. 1000 et on termine exactement comme pour le dosage des albumines totales. Pour doser lalbumine on peut se servir des eaux de lavage que l’on coagulera de la même façon ». (Gilbert et Baudoin) (67).

b) Le procédé de L. Grimbert est le suivant : « Dans une première opération on étend 10 cc. de sérum à 100 cc., on les additionne d'acide

acétique à 10 en quantité strictement nécessaire pour avoir une

réaction faiblement acide et on abandonne au repos pendant 24 heures.

« La nucléoalbumine se sépare; on filtre, on mesure une partie adéquate de la liqueur, on l’additionne de 5 gr. de chlorure de sodium et on porte à l’ébullition. Le précipité est recueilli sur un filtre taré, lavé, puis desséché à 105° et finalement pesé. On a ainsi le poids total de la sérine et de ia globuline.

« Dans une seconde opération 10 cc. de sérum sont étendus à 100 cc. ‘dans une éprouvette graduée et additionnés de 80 gr. de sulfate de magnésie pulvérisée. La globuline se précipite.

« Dans le liquide filtré on dose la sérine comme précédemment. La différence entre les deux dosages donne le poids de la globuline contenue dans 10 cc. de sérum ». (Guiart et Grimbert) (73).

LA 3 LA TRE in, | D. AU

2) Méthode colorimétrique de Hsien- Wu. — La méthode proposée récemment par Hsien-Wu(174) permet de doser dans une très petite quantité de plasma non seulement la sérine et la globuline, mais le fibrinogène. Après séparation des diverses albumines par la méthode de Cullen et Van $lyke, le dosage est basé sur la réaction de l'acide phospho-18 molybdique avec les protéines. La valeur colorimétrique de chaque protide est constante, et l'intensité de la coloration produite dans des conditions définies peut servir de mesure pour leur dosage. L'étalon est préparé en dissolvant 50 millgr. de tyrosine dans 250 cc. d'H CI N/10; cet étalon peut se conserver 16 mois et plus. Dans les conditions de la technique de Hsien-Wu 1 milligr. de tyrosine égale 16,4 milligr. de fibrine (N X 6,25), 25,2 milligr. de globuline ou 27,9 milligr. de sérine. La fibrine et la sérine sont dosées directement, tandis que la globuline est dosée par la différence entre les protides totaux du sérum et la sérine.

3) Méthode de Rührer

Les méthodes qui précédent exigent des manipulations longues et compliquées et ne sauraient être employées en pratique. Aussi a-t-on recherché des procédés plus simples de dosage de la sérine et de la globuline. La méthode de Rührer est particulièrement intéressante.

C’est un procédé empirique qui se base sur lès constatations suivantes: Comme Naegeli (121) l'avait remarqué en 1943, l'indice de réfraction et la viscosité ne paraissent pas varier parallèlement d’un sérum à l'autre (‘). Aussi cet auteur émit-il l'hypothèse que les divergences étaient dues aux proportions différentes de sérine et de globuline. La réfractométrie donne les albumines totales; le chiffre des globulinesse tire du rapport de la réfractométrie et de la viscosimétrie.

En 1916 Rôührer (136), mélangeant en proportions variables des solutions pures de sérine et de globuline établit une méthode graphique qui permet, en portant sur un système de coordonnées, les valeurs trouvées au refractomètre et au viscosi-

(1) Borelli et Data avaient déjà constaté dans les néphrites urémigènes que le coefficient de viscosité était relativement élevé alors que la quantité d'albumines est diminuée. Ils l’expliquaient d’ailleurs par l'apparition de substances anormales ayant une viscosité très élevée.

Ha. ie

mètre, de calculer avec une approximation de 2 à 3 p. 100 le « quotient albumineux », c’est-à-dire le rapport de la sérine à la globuline. Rührer, Adler, Freundenreich ont obtenu par cette méthode des résultats particulièrement constants d’un moment à l'autre de la journée pour un même individu et de faibles variations d’un sérum à l’autre.

Des critiques peuvent être adressées à la méthode. Nous avons vu par ailleurs que pour Chalier, Boulud et Chevalier la viscosimétrie donnerait le chiffre des albumines totales.

D'autre part, Wanner (166), expérimentant la méthode, a trouvé parfois des rapports déconcertants de sérine à la globuline, par exemple à la période de convalescence des pneumonies. Il les explique par les modifications possibles de l'indice réfractomètrique et de la viscosité indépendantes de la teneur en albuminoïdes que nous avons déjà signalées. Des expériences de contrôle ont montré à cet auteur que l’adjonction d’eau distillée ou de solutions salines à un sérum ne fait pas varier dans le même sens la viscosité et l'indice réfractométrique et que les rapports sérine-globuline sont différents, pour un taëx de dilution donné suivant le liquide de dilution utilisé. Les erreurs peuventatteindre 5 à 20 p. 100 en plus ou en moins Elles expliquent les résultats paradoxaux obtenus chez les hydrémiques.

Rôbrer répond ainsi aux objections de Wanner :

1° « Ces expériences de sérum délayé ne peuvent pas plus être appliquées à un examen de ma méthode qu’à celui de la méthode de Reiss, puisque toutes deux supposent des rapports constants entre la réfraction due aux diverses substances du sérum et celle due aux matières albuminoïdes, de telle sorte qu’on puisse saisir par les variations des propriétés de réfraction du sérum, celles des éléments albuminoïdes. Si l’on fait un mélange avec de l’eau distillée ou une solution de soude à 1/100, il se produit une diminution de la quantité de sel dans le sérum, et par suite l'application de ma méthode, comme de celle de Reïss perd tout son sens » .… Wanner trouve à la suite d'un délayement progressif fait avec ces liquides un accroissement relatif évident de la globuline « tandis que les courbes

Pan

représentatives de ces séries de délayement (puisque la portion réfractée de sel diminue), doivent descendre toujours plus bas, s’éloignant de plus en plus sous mes courbes représentatives des rapports généraux du mélange sérine-globuline. Et si l’on fait la lecture de mes courbes dont la valeur tient à la contenance du sérum en sel, qui demeure normalement constante, il s'ensuit une élévation progressive et apparente de la masse relative de la globuline... »

La concentration en matière non colloïdale du sérnm ne varie que dans des cas exceptionnels. Cependant Rührer rappelle les variations de la réfractométrie dues à l’hyperglycémie, l'hyperazotémie. Dans le cas d’hyperazotémie les erreurs consécutives de la réfractométrie sont très faibles. Pour sa méthode « [elle] donnerait [pour 1 gr. d’urée], un déplacement des rapport du mélange sérine-globuline de 1 à 2 °/,, à l'avantage de la sérine, défaut qui dans les deux méthodes peut être négligé.

« Dans quatre sérums humains qui provenaient de saignées faites dans des pneumonies grippales, j'ai trouvé une étendue de variations de la portion réfractée de la matière dialysable de + 0,2 à 0,4, divisions du réfractomètre. Les rapports du mélange sérine-globuline, d’après les courbes qui supposaient * une valeur moyenne constante de réfraction de la matière non albuminoïde, seraient entachés d’incertitude de + 2 à 0,4, ce qui pour une application clinique de la méthode ne constitue qu’une faible limite d'erreurs pertubatrices. » Il serait d’ailleurs très important, ajoute Rôührer, de pratiquer des déterminations

très précises des variations de la réfraction par les matières non colloïdes du sérum.

2° À la deuxième objection de Wanner sur la variabilité éventuelle des propriétés de viscosité de la matière albuminoïde du sérum par les sels (prouvée d’ailleurs par les procédés de réduction, de précipitation et de dialyse), Rührer a répondu par quatre série de recherches :

a) Les courbes qu'il a établies suivent le même trajet pour le sérum délayé et pour les mélanges artificiels de sérine et de globuline ;

ns.

RS FO b) 102 couples de valeurs obtenus et étudiés par la réfractométrie-viscosimétrie tombent à l’intérieur du champ des courbes ;

c) La comparaison des résultats obtenus par la méthode et les procédés directs de détermination ont montré qu'ils étaient concordants ;

d) Enfin les variations obtenues par Wanner dans le chiffre de la globuline tiennent souvent à ce qu'il ne se servait pas d’un viscosimètre assez sensible (l'erreur pouvant aller de 8 à 10 p. 100 en plus ou en moins). D'ailleurs ces variations de la globuline existent réellement dans certains cas (comme celui des pneumonies grippales).

3° On doit également considérer que la teneur du sérum en ions hydrogènes et en dérivés alcalins a une influence nulle sur

la viscosité. D’autre part, l’urée n’a qu’une faible influence sur

elle (Handowsky).

Rôhrer ayant ainsi réfuté les objections de Wanner sur sa méthode, et s'appuyant sur la remarquable concordance des résultats qu'il a obtenus en l’appliquant avec ceux des méthodes directes, conclue à la solidité de son procédé.