CHAPITRE III INDICE OPSONIQUE. SA MESURE

La méthode opsonique de Wright appliquée à la tuberculose consiste à mesurer comparativement l’influence qu’exercent, in vitro, sur le pouvoir d’absorption des phagocytes vis-à-vis du bacille tuberculeux, le sérum d’un individu malade et celui d’un individu sain.

-La méthode est basée sur la constatation que les sérums normaux facilitent la phagocytose des microbes, et que les sérums frais spécifiques, c’est-à-dire qui proviennent d'individus immunisés contre un microbe donné, agissent spécifiquement comme excitateurs de la phagocytose envers ce même microbe (Sawtchenko (1), Neufel et Rimpau (2), Leishman (3), Dean (4).

C’est ce pouvoir des sérums d’activer la phagocytose que Wright a appelé pouvoir opsonique (obuvsw, je prépare) et qu'il a proposé de mesurer au cours de la

tuberculose.

(1) Sawronenxo. Ann. Inst. Pasteur, 1902.

(2) Neurez et Rimpau. Deutsche Med. Woch., sept. 1004. (3) Lrisaman. Path. Soc. Trans., 1905, vol. 56.

(4) Dean. Proceed. of the Royal Soc., vol. 76, p. 5rx.

PME VAL:

Technique.

La méthode étant très délicate et passible de nombreuses causes d'erreur, on est obligé d'entrer dans quelques détails en décrivant sa technique (1). Celle-ci consiste à réaliser l'expérience de phagocytose in vitro en mettant en présence :

« 1° des leucocytes ; 2°une émulsion bacillaire ; 3° le sérum dont on veut déterminer le pouvoir opsonique. Ces trois éléments étant mélangés en parties égales, on place le mélange à l’étuve à 37° pendant un temps déterminé (quinze ou vingt minutes). On fait des préparations colorées. On compteles bacilles contenus dansun certain nombre de leucocytes et on établit la moyenne du nombre de bacilles phagocytés par leucocyte. On obtient ainsi le pouvoir opsonique du sérum considéré. Mais comme les conditions (concentration de la suspension de globules et de l’émulsion bacillaire) changent fatalement d’une expérience à une autre, les résultats obtenus ne sont comparables etne prennent une valeur que si on les rapporte à un facteur constant, toujours Je même dans toute la série des expériences. Ce facteur constant est représenté par un sérum normal, celui de

l'observateur, par exemple. Au pouvoir opsonique de

(1) Pour la description de cette technique, nous avons fait de larges emprunts à l'excellent travail de M. le médecin-major À. MaxauD : « La méthode opsonique de Wright, sa technique »., Revue d'Hygiène et de Police Sanit., avril 1909, n° 4, p. 302.

LETULLE. 3

QU RD een

ce sérum témoin on compare le pouvoir opsonique des sérums pathologiques étudiés. e

« Le chiffre représentant le pouvoir opsonique d’un de cessérumsdivisé par lechiffrereprésentant le pouvoir opsonique du sérum témoin donne l’indice opsonique.

« Nous allons passer successivement en revue les opérations nécessaires pour la détermination.de l'indice opsonique :

« 1° Préparation des leucocytes;

« 2° Préparation de l'émulsion bactérienne ;

« 3° Préparation du sérum;

« 4° Mise en contact de ces éléments ;

.« 5° Etalement sur lames et coloration ; . € 6° Numération ; « 7° Pouvoir opsonique et index opsonique. »

1° Préparation des leucocytes. — Les leucocytes habituellement employés sont empruntés, soit au sang humain, soit à l’exsudat péritonéal du cobaye. L’expérimentateur emploie généralement ses propres leucocytes ; il lui suflit de se piquer avec un vaccinostyle à la face dorsale d’un doigt, près de l’ongle, après avoir ligaturé le doigt à sa base. Environ vingt gouttes de sang sont recueillies dans un tube de centrifuge à fond effilé rempli de ro centimètres cubes de la solution

anti-coagulante suivante :

Eau distillée… . . ,:. 4 1000 cent:-cubes Chlorure! de'sodium.u.. 2". 18870 Gitrate desoude 2 Me OR 19 grammes.

90 es

Il faut huit.à dix parties de cette solution au minimum pour une partie du sang.

On fait le mélange en renversant et redressant plusieurs fois le tube dont on a obturé l’orifice avec la pulpe du pouce ; on doit éviter de secouer brusquement le tube, ce qui aurait pour effet d’altérer les leucocytes. On centrifuge, puis on lave le culot. Pour cela on prélève le liquide séparé du culot en l’aspirant dans une pipette à boule. On verse dans le tube de l’eau salée physiologique à 8,5 pour 1 000 que l’on mélange au culot en renversant le tube comme précédemment, et l’on centrifuge de nouveau. Cette opération est répétée trois fois. Puis on enlève tout le liquide. La partie la plus superficielle du culot contient les globules blancs avec très peu de globules rouges. Afinde séparer cette couche superficielle de la couche profonde composée exelusivement de globules rouges, on incline le tube le plus possible. La couche superficielle des leucocytes s'étale seule contre la paroï où elle est recueillie par aspiration dans une pipette et portée dans un petit tube.

On peut encore se procurer des leucocytes en provoquant, chez le cobaye, la formation d’un exsudat péritonéal, par injection d’eau salée, de bouillon, etc. Quatre à cinq heures après, on prélève, à l’aide d’une pipette coudée, un peu de l’exsudat riche en leucocytes. On le recueille dans de l’eau salée citratée et on le

traite comme il a déjà été dit pour le sang.

2° Préparation de l'émulsion microbienne. — On prend

une jeune culture en bouillon glycériné, âgée de quatre

à six semaines. Les cultures vieilles contiennent des bacilles longs qui forment des amas et qui Sont phagocytés d’une façon irrégulière. La culture est stérilisée à l’autoclave à 110°. On filtre sur papier et on lave les bacilles en versant sur le papier-filtre de Peau salée physiologique. Puis, les bacilles sont prélevés sur le filtre, minutieusement broyés au mortier etémulsionnés dans l’eau salée à 1,5 pour 100 que l’on ajoute goutte à goutte en continuant le broyage. On obtient ainsi une émulsion laiteuse que l’on rend encore plus homogène en l’agitant dans un flacon avec des perles de verre. On la centrifuge ensuite pour la débarrasser des grumeaux. Cette émulsion homogène est diluée avec de l’eau salée à 1,5 pour 100 (c’est le taux le plus favorable) jusqu’à l'obtention d’une concentration microbienne déterminée qu'on apprécie d'après son opalescence. Cette opalescence doit être comparable à celle d’une émulsion dont la richesse en bacilles est telle que l’on obtienne une moyenne de deux à quatre bacilles phagocytés par leucocyte sous l’action opsonisante d’un sérum normal. L’émulsion ainsi préparée est stérilisée à r15°. On peut la conserver en tubes scellés qu’on aura soin de sécouer avant chaque expérience pour remettre les

bacilles en suspension.

3° Préparation des sérums à examiner. — « On se procure le sang chez homme par piqüre de la face dorsale du pouce au voisinage de longle, ainsi qu'il a été dit plus haut. Le sang est aspiré par capillarité dans un

petit tube à extrémités eflilées et dont l’une a été re-